中华实验和临床病毒学杂志
Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology 중화실험화림상병독학잡지
- 主管单位: 实验和临床病毒学杂志
- 主办单位: 中国科学技术协会
- 影响因子: 0.71
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 11-2866/R
- 国内刊号: 段树学
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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基因优化对基因工程丁型肝炎小抗原蛋白表达和纯化的影响
目的 探讨基因优化对基因工程丁型肝炎(丁肝)小抗原蛋白表达和纯化的影响.方法 依据GenBank上的丁肝小抗原原始基因,参照大肠埃希菌优势密码子谱进行优化;再分别将优化前后的两组基因进行常规原核表达,用SDS-PAGE电泳比较目的蛋白表达量及优势表达方式;进一步以柱层析进行纯化,再以Image Lab软件分析SDS-PAGE电泳条带,比较两组目的蛋白的纯度.结果 SDS-PAGE显示,两组表达的目的蛋白均与预期相对分子质量大小一致,优化基因组的蛋白表达量高于原始基因组,且更倾向于可溶性表达;经柱层析纯化后,前者的目的蛋白纯度也明显高于后者,可达96.3%.结论 基因优化可提高基因工程丁肝小抗原蛋白表达量,增加可溶性蛋白的比例;且表达产物更易纯化至较高纯度以供诊断使用.
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围产期母血与脐血乙肝标志物及DNA载量关联性研究
目的 研究围产期母血与新生儿脐血乙肝病毒标志物及核酸DNA载量的关联性,探索脐血乙肝五项模式与HBV-DNA载量之间关系,用于评估新生儿宫内感染乙肝病毒的风险性.方法 在知情同意的原则下选择住院分娩产妇612例作为乙肝研究对象,根据产妇乙肝五项不同模式共分为五组,均采用ELISA法检测产妇血清、新生儿脐血HBV标志物,同时用实时荧光定量PCR检测产妇血清和脐血新鲜血清HBV-DNA载量,探讨围产期母血与脐血间HBV-DNA载量的关联性.结果 年龄在18 ~ 44岁围产期妇女,A组传染性强的乙肝“大三阳”或1,3阳性者149例,产妇血清和脐血HBV-DNA阳性率分别为99.33%和32.21%;B组260例乙肝“小三阳”,产妇血清和脐血HBV-DNA阳性率分别为20.00%和3.08%;C组乙肝1、5阳性者58例,产妇血清和脐血HBV-DNA阳性率分别为65.52%和12.07%;D组乙肝病毒第5阳性者59例,产妇血清和脐血HBV-DNA阳性率分别为13.56%和1.69%;E组对照组:乙肝五项全阴性86例,产妇血清和脐血HBV-DNA阳性率分别为1.16%和0.A组与B组间脐血HBV-DNA阳性率,差别有统计学意义(x2=54.09,P<0.01).乙肝产妇所生新生儿脐血HBeAg阳性率高达82.55%,脐血HBsAg的阳性率为32.89%,A组即HBsAg HBeAg阳性的产妇经胎盘传播乙肝病毒的概率(32.21%)明显高于B组“小三阳”产妇的脐血HBV-DNA感染率(3.02%),A组是B组的10.67倍;传染性强的A组母血是脐血HBV-DNA平均载量的6345倍.结论 ①新生儿宫内感染乙肝病毒阳性率与围产期母体内HBV-DNA载量呈正相关.②乙肝产妇生产的新生儿脐血HBeAg阳性率是HBsAg的2.51倍,要研制复合型乙型肝炎人免疫球蛋白:即增加高效价HBeAb成分可结合HBeAg,原有的HBsAb也可结合相应的HBsAg,增强阻断乙肝病毒垂直传播作用;③我国应加强乙肝知识的宣教工作,完善围产保健制度.
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乙酰半胱氨酸镁对大鼠肝硬化门静脉高压的保护作用
目的 探讨乙酰半胱氨酸镁对大鼠肝硬化门静脉高压血管活性物质和肝纤维化指标的影响.方法 以12 μg· kg-1二甲基亚硝胺制备大鼠肝硬化模型,肝硬化造模完成后分组实验,乙酰半胱氨酸镁盐按25、50、100 mg·kg-1剂量每日分别腹腔注射进行肝硬化治疗,给药8周后处死大鼠取材进行各项指标测定.通过病理切片的检查、肝组织转化生长因子β1、一氧化氮、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶的检测来评价乙酰半胱氨酸镁盐治疗肝硬化门脉高压的效果.结果 二甲基亚硝胺造模结束后,模型组大鼠HE与网格染色结果显示其肝硬化处于Ⅲ-Ⅳ期;乙酰半胱氨酸镁低、中和高剂量组肝硬化程度明显轻于模型组,淋巴细胞浸润和假小叶形成减轻;治疗低、中和高剂量组转化生长因子β1指标明显低于模型组(P<0.05);与模型组比较,各治疗组的一氧化氮、总一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶明显降低(P<0.05).结论 乙酰半胱氨酸镁具有独特的抗氧化性,能清除体内各种自由基,调节配体依赖信号传导和细胞生长,对二甲基亚硝胺引起大鼠肝硬化门静脉高压症具有明显地保护作用.
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树突状细胞MicroRNA表达谱在HBsAg刺激后的变化
目的 建立HBsAg刺激树突状细胞(DC)前后microRNA (miRNA)表达的差异谱,为研究miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫机制中的作用提供理论基础.方法 体外培养原代DC,分别用HBsAg、LPS、TNFα刺激24 h后提取细胞总RNA,利用基因芯片技术进行比较,筛选出HBsAg刺激后差异表达显著的miRNA,利用计算机软件技术进行靶基因初步预测.结果 HBsAg刺激前后miRNA差异表达2倍以上者共30个,其中16个上调,14个下调.三个不同刺激组间miRNA差异谱存在不同差异.筛选出的靶基因中包含DC信号通路的相关成分.结论 HBsAg刺激DC后的miRNA表达谱的变化存在特异性;靶基因的初步筛选结果进一步提示了miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫机制中可能起着重要作用.
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两种人类疱疹病毒与实验性龈炎的关系
目的 检测人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)和Epstein-Barr病毒-1型(Epstein-Barr virus-type1,EBV-1))在实验性龈炎过程中龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)和唾液中的检出变化,探讨病毒在牙龈炎症发生发展过程中的作用.方法 选取11名牙龈健康,无全身疾病的年轻男性受试者,在停止口腔卫生措施后21天内(第0、7、14、21天)和恢复口腔卫生措施一周后(第28天)收集14,45两颗牙的GCF以及受试者的唾液,使用巢式PCR技术检测HCMV和EBV-1在不同时间点的检出情况.结果 GCF中HCMV在基线、7、14 d和21 d时分别有4个、4个、3个和2个受试者检出,但检出的受试者在该过程中不一致,第28天时无受试者检出;EBV-1在GCF中均未检出.在唾液中,实验过程中不同时间点共仅有4名和3名受试者检测到了HCMV和EBV-1.HCMV和EBV-1在实验性龈炎过程中的检出情况无明显规律,与临床指标的相关性无统计学意义.结论 从健康牙龈到龈炎这一炎症发生发展过程中GCF和唾液中HCMV和EBV-1的检出无明显规律,提示在牙龈的早期炎症中HCMV和EBV-1无明显作用.
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HBV X siRNA与5-氮-2'-脱氧胞苷对裸鼠肝癌皮下移植瘤作用的研究
目的 目的 探讨靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)对HBV相关肝细胞癌生长的影响及可能机制.方法 设计合成X-siRNA及对照siRNA,用siRNA处理HepG2/GFP-HBx细胞,RT-PCR法测定处理细胞的HBV X基因表达;将HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤,分别用X-siRNA、5-aza-dC单独或联合处理裸鼠并观察移植瘤生长;甲基化PCR测定移植瘤组织p16基因甲基化.结果 RT-PCR检测示X-siRNA处理的细胞HBV X mRNA水平明显降低;裸鼠体内实验显示HepG2/GFP-HBx组的皮下移植瘤体积明显大于HepG2/GFP组(P<0.05);X-siRNA与5-aza-dC处理组移植瘤体积明显小于未处理组(P<0.05);甲基化PCR检测示HepG2/GFP-HBx组移植瘤组织存在p16甲基化而HepG2/GFP组未检出p16甲基化;X-siRNA、5-aza-dC处理的移植瘤组织中p16基因甲基化减低.结论 X-siRNA及甲基化抑制剂可能通过逆转p16甲基化而能有效抑制肝细胞癌生长,具有潜在应用价值.
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两种检测多环芳烃致癌性细胞转化实验方法的研究
目的 比较BALB/c-E6E7细胞(含HPV16 E6E7基因的BALB/c 3T3细胞)转化实验与BALB/c 3T3细胞转化实验对三种多环芳烃致癌性的评价能力.方法 应用已优化的BALB/c-E6E7细胞转化实验与Ⅱ阶段BALB/c3T3细胞转化实验检测三种多环芳烃的致癌性和促癌性.结果 两种细胞转化实验对三种多环芳烃致癌性和促癌性的评价结果一致,且符合IARC对其致癌性的分类标准.BALB/c-E6E7细胞可形成更多的转化灶,转化频率约为BALB/c 3T3细胞的2~10倍,该细胞转化实验具有更高的敏感性并可有效缩短实验时间.结论 BALB-E6E7细胞转化实验是一种更为敏感和高效的评价多环芳烃致癌性和促癌性的方法,有助于环境致癌物的风险评估.
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朊蛋白突变体D178N在RT-QuIC实验中的转化研究
目的 利用RT-QuIC研究带有D178N突变的朊蛋白的自我转化能力.方法 以带有人PRNP基因的质粒为模板,通过定点突变,构建了带有D178N突变的人PRNP基因,利用原核表达系统表达并纯化了带有N端及N端缺失的D178N朊蛋白.分别将此蛋白作为底物,利用RT-QuIC体外纤维形成实时监测系统,对各种突变蛋白体外纤维形成进行了观察和比较,并对形成纤维蛋白的蛋白酶抗性进行了初步分析和比较.结果 正确构建了D178N突变的PRNP基因;在RT-QuIC的反应条件下,缺失N端的带有D178N突变的人朊蛋白,即使在不存在prpSc种子的情况下,在体外也能够发生自我转化,且形成的纤维具有蛋白酶抗性;而带有N端的D178N突变的朊蛋白,在RT-QuIC的反应条件下不发生自我转化.结论 朊蛋白N端对D178N突变的朊蛋白自发纤维形成具有一定影响,这为探索和研究遗传型克雅病的致病机制提供了重要线索.
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2005-2010年北京地区儿童原发性EBV感染流行株EBNA1与LMP1基因特征分析
目的 分析2005-2010年北京地区儿童原发性EBV感染流行株EBNA1与LMP1基因特征,为研究EBV变异株与疾病临床表型间是否存在相关性提供背景资料.方法 应用PCR方法扩增EBV的EBNA3C、EBNA1和LMP1基因片段,测序后应用BioEdit 7.0.9和Mega 4.0.2软件进行序列分析.结果 62例进行了EBV分型,以EBV-Ⅰ型为主,检出率为98%.62例EBNA1基因扩增阳性,其中V-val亚型(均是Vvv1变异株)为98%.50例LMP1基因羧基段扩增阳性,以China 1为主,其检出率为90%.Vvv1变异株和China 1变异株在EBV-IM与EBV-HLH中的检出率差异均无统计学意义(P=1.00).40例进行了多基因连锁分析,其中EBV-Ⅰ型、EBNA1-Vvv1变异株和LMP1-China 1变异株高度连锁,其连锁检出率为90%.35例患儿LMP1基因全长扩增阳性,CG1-CG4的检出率分别为85%、6%、6%和3%.结论 北京地区儿童原发性EBV感染疾病中,EBV亚型以EBV-Ⅰ型为主,Vvv1变异株和China 1变异株分别是EBNA1和LMP1变异株中的优势变异株,且二者高度连锁.儿童原发性EBV感染流行株可以分为CG1-4组,其中以CG1为主.
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2009-2011年上海市手足口病病原学检测及其临床特点分析
目的 了解上海市手足口病不同病原体的感染现状以及所致的手足口病的临床特点之间的差异,为制定观察、治疗方案,做好手足口病防控工作提供参考.方法 采集2009年3月至2011年12月在本院传染科门诊诊断为手足口病的357例病例的咽拭子、疱疹液、粪便共551份标本进行病原学检测.用RT-PCR法对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)、肠道病毒通用型(PE)进行鉴别.结果 357例手足口病患儿共采集到551份标本,检测病毒总阳性率为79.7%,2009年手足口病以CoxA16流行为主,2011年以EV71流行为主,三年病毒流行株差异有统计学意义(P =0.005);疱疹液病毒检出率高;EV71、CoxA16、PE病毒感染的手足口病患儿在发热、易惊的发生比例比较差异有统计学意义(P<0.05);EV71感染的患儿外周血白细胞计数和中性粒细胞比例要高于CoxA16和PE感染的患儿,差异有统计学意义(P<0.05).结论 上海市手足口病在不同时期病原体呈现交替流行;对不同病原体临床特征的分析比较有助于EV71感染的防控、早期治疗、重症病例的筛查.
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烟台市手足口病合并脑炎病毒分离及基因序列分析
目的 了解烟台地区手足口病合并脑炎病原谱及其基因学特征.方法 采集烟台地区手足口病合并脑炎患者粪便及脑脊液标本,通过细胞培养分离病毒,实时荧光PCR鉴定病毒型别,RT-PCR扩增VP1区基因部分序列并测序,进行序列分析.结果 10份粪便标本分离病毒3株,均为EV71.与C4a型代表株核苷酸同源性为98%~99%,氨基酸同源性98.90%~99.45%.系统发生树中,烟台分离株与C4亚型C4a簇代表株位于同一分支.结论 烟台地区手足口病合并脑炎病原主要为EV71,属于C4亚型C4a簇.
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难治性慢性丙型肝炎强化治疗疗效研究
目的 探讨难治性慢性丙型肝炎强化治疗疗效,通过优化治疗剂量和疗程来提高慢性丙型肝炎患者对干扰素联合利巴韦林治疗的持续病毒应答率.方法 对常规治疗的干扰素剂量(聚乙二醇干扰素α每周皮下注射1次)和利巴韦林(每天10.5 mg/kg)经治的无应答和部分患者,根据患者的意愿进行标准干扰素α10 MU隔日注射1次或聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFN α-2a)360 μg每周注射1次,并根据体重每天给予15 mg/kg的利巴韦林的强化剂量治疗,在治疗的0、4、12周和以后的每间隔12周、治疗结束后的24周进行HCV RNA含量检测,根据患者治疗过程中的病毒应答情况给予72 ~96周的疗程,以持续病毒应答(sustained viral response,SVR)作为疗效的评判指标.结果 18例患者完成全程治疗和观察,12例获得持续病毒学应答,5例治疗无效,1例复发.3例患者获得RVR,RVR获得者的cEVR和SVR均为3/3,RVR组治疗前的病毒载量显著低于未获得RVR组(t=4.687,P<0.001).15例无快速病毒应答者,8例获得完全早期病毒应答,9例获得SVR.聚乙二醇干扰素α-2a 360 μg每周注射1次的SVR为4/5.11例获得cEVR患者均获得SVR,7例无cEVR的患者,仅1例获得SVR.结论 强化剂量的干扰素和RBV可以使较高比例的既往规范抗病毒治疗无应答、部分应答获得SVR.在强化治疗过程中根据病毒的应答情况及时调整和延长HCV RNA阴性的疗程是提高难治性慢性丙型肝炎持续病毒应答率的重要措施.
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阿德福韦酯治疗e抗原阴性慢性乙型肝炎病毒老年感染者的临床观察
目的 目的 观察e抗原阴性的慢性乙型肝炎病毒感染的老年患者,在阿德福韦酯(ADV)初始抗病毒治疗3年的疗效及其不良反应.方法 对初治的老年慢性乙型肝炎病毒感染者31例应用ADV治疗3年,治疗前及治疗后查生化指标:总胆红素、白蛋白、丙氨酸转移酶、天冬氨酸转移酶、肌酸激酶、尿氮、肌酐、尿酸、钾、钠、氯、钙;外周血:白细胞、血红蛋白、血小板及HBV DNA等病毒学指标.结果 治疗后血清总胆红素、血清直接胆红素、丙氨酸转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、HBV DNA载量与治疗前比较,差异有统计学意义(P <0.001),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05).结论 ADV治疗老年慢性乙型肝炎是安全、有效的.
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LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法的建立
目的 人副流感病毒1,2,3型是呼吸道感染的主要病原.本研究建立了特异、快速、灵敏的多重荧光定量RT-PCR方法用于人副流感1,2,3型病毒临床标本检测.方法 针对人副流感1,2,3型病毒设计特异性引物探针,优化荧光RT-PCR反应条件.应用体外转录方法分别制备人副流感1,2,3型病毒的标准品.验证荧光定量RT-PCR方法的特异性,敏感性和稳定性.结果 该方法对人副流感1,2,3型病毒核酸检测有高度特异性,检测的灵敏度HPIV1为10个拷贝,HPIV2为100个拷贝,HPIV3为100个拷贝.可从临床患者鼻咽吸出物标本中直接检出.结论 本研究建立的LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法具有较高的特异性和敏感性.适用于临床早期诊断和实验室病原谱筛查.
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B型流感病毒Yamagata系和Victoria系双重荧光PCR诊断方法的建立与应用
目的 建立一种新型的双重荧光PCR诊断方法,用于B型流感病毒By (B/Yamagata)和Bv(B/Victoria)亚系的准确分子分型.方法 从GenBank随机下载By和By HA(hemagglutinin)基因各50条序列,通过MEGA分析,利用Primer Primer软件设计亚系特异性引物和通用探针,建立双重荧光PCR诊断方法.用HAI(hemagglutination inhibition)实验确认的B型流感病毒亚系分离毒株和A型流感病毒进行特异性验证,用体外转录核酸拷贝数进行灵敏度实验.结果 2006-2010流感监测年份,对17 765份流感样病例咽拭标本中分离到B型流感病毒793株,本方法鉴定有152株By和641株Bv病毒,与HAI鉴定结果一致.本诊断方法的检测特异性达100%,灵敏度达102拷贝/μl,重复性变异系数<3.5%.结论 本研究所建立的荧光PCR方法为流感实时监测提供了有力的技术支撑,适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断.
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广东省佛山市乙型肝炎患者伴随丁型肝炎感染的现状调查
目的 了解广东省佛山市的丁型肝炎(丁肝)感染现状,为全国的丁肝流行病学调查工作奠定基础.方法 搜集广东省佛山市第一人民医院2011年的乙型肝炎(乙肝)阳性血清,以不同公司的丁肝酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)诊断试剂平行检测;进一步以反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法辅证.结果 两种ELISA丁肝诊断试剂检测结果一致,8例阳性;经RT-PCR进一步验证,结果正确.结论 广东省佛山市丁肝病毒感染率高于全国平均水平,无性别统计学差异,且感染人群偏于高年龄组.
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治疗性HPV疫苗的研究进展
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)引起包括宫颈癌等在内的多种疾病,如何预防和治疗已为人们所关注.已上市的疫苗主要用于预防HPV的感染,对已感染HPV人群的治疗效果未做进一步研究,而目前临床治疗效果不够理想,因此利用治疗性疫苗通过免疫学方法治疗HPV引起的疾病逐渐成为研究的热点.以HPV E6和E7为靶抗原的治疗性疫苗研究开始较早,研究为深入,已经取得了一定的进展.同时近年来的研究发现,HPV其他的蛋白如E2、E5、L1和L2等也可作为治疗性疫苗的候选靶抗原,并显示出较好的应用前景.
关键词: -
病毒性肝炎与肝细胞内质网应激的研究现状
近年来的研究表明内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)参与多种肝脏疾病的发生、发展及转归.发现乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等病毒感染可诱导肝细胞ER stress反应,并与病毒复制、肝细胞损伤、肝癌发生等相关.本文将对肝炎病毒感染与ER stress的研究现状进行综述.
关键词: -
CD151在肿瘤发生中的作用机制及其潜在的治疗意义
四跨膜蛋白家族(transmenbrane 4 super family,TM4SF)成员也称tetraspanin,是一类存在于真核多细胞生物细胞膜上的蛋白家族,相对分子质量为(21 ~28) ×103.其结构为横跨四次细胞膜的Ⅲ型膜糖蛋白复合体,含有4个高度疏水的跨膜结构域.胞质区为短的N2末端和稍长的C2末端,并在4个跨膜结构域之间形成2个一大一小的细胞外环.其中大环及其跨膜区构成了四跨膜蛋白家族的结构和功能特异性并在调整其与其他膜蛋白(如整合素、Ig蛋白超家族等)的相互作用上发挥重要作用.
关键词:
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 |
2006 | 01 02 03 04 |
2005 | 01 02 03 04 |
2004 | 01 02 03 04 |
2003 | 01 02 03 04 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |
1999 | 01 02 03 04 |
1998 | 01 02 03 |