北京地区部分人群接触密切的家畜(禽)戊型肝炎病毒感染血清学调查

目的 了解北京地区戊型肝炎(戊肝)病毒感染现状.方法 采用EIA诊断试剂检测人群、猪和鸡血清中戊肝病毒(HEV)抗体.结果 1208份人群血清中有260份HEV-IgG抗体阳性,总阳性率为21.52%,对260份HEV IgG阳性血进行IgM抗体检测,有22份阳性,占8.46%.32份猪血清中有15份阳性,阳性率为46.88%,34份鸡血清HEV抗体全部为阴性.人群不同年龄组HEV抗体阳性率依次为11～20岁为5.60%(14/250),21～30岁为20%(42/210),31～40岁为24.03%(62/258),41～50岁为26.44%(78/295),51～60岁为32.82%(64/195),男女不同性别HEV感染率比较,男性阳性率为29.51%(144/488),女性为21.70%(102/470).结论 北京地区人群和与人接触密切的家畜猪均存在戊肝病毒感染,人群戊肝病毒感染率随年龄增长而升高,尤其是男性戊肝病毒感染率明显高于女性,郊区流动人群戊肝病毒感染率明显高于市内人群,家畜猪感染率是人群的2倍以上.

青海同德藏族人群感染HBV基因型、血清型调查

目的 了解青海同德藏族人群乙型肝炎病毒(HBV)基因型、血清型的分布状况.方法 用巢式PCR扩增青海同德藏族人群表面抗原(HBsAg)阳性者的HBV S、C基因,测定其序列,判定其基因型和血清型.结果 源于自然人群的311份血清标本中,同时获得S和C基因序列者271份,其中C型基因10例,占3.7%,C/D重组型261例,占96.3%;血清ayw2亚型259例,占95.6%,adr亚型10例,占3.7%,adw2亚型2例,占0.7%.结论 青海同德藏族人群感染HBV以C/D重组型为主,血清型以ayw2为主.

2007年山西省部分地区虫媒病毒调查

目的 调查山西省部分地区的虫媒病毒,在当地采集蚊虫标本进行病毒的分离与鉴定.方法 2007年7月和8月在当地采集蚊虫标本,通过组织细胞培养进行病毒分离,利用分子生物学和生物信息学技术对病毒分离物进行鉴定与分析.结果 分离到10株病毒分离物,鉴定结果显示分离株SX0765、SX0766、SX0767、SX0771、SX0789、SX0790、SX0793、SX0794、SX0795、SX0796均为版纳病毒;此外,分离株SX0771和SX0794还同时存在辽宁病毒基因.进一步分析显示版纳病毒新分离株与此前在北京、云南和辽宁分离到的病毒株之间存在明显差异,同源性在89.7%～94.1%之间.结论 在山西省分离到10株版纳病毒和两株辽宁病毒,版纳病毒与我国其他地区分离株有明显差异,在进化上相对独立.

H9N2禽流感病毒反向遗传系统的构建和鉴定

目的 建立H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统,为人禽流感疫苗研制以及传播和致病机制等方面的研究提供技术平台.方法 使用RT-PCR方法获得禽流感H9N2亚型病毒A/Guangzhou/333/99(H9N2)的8条全长基因节段,然后克隆到双表达载体pCI-pol Ⅰ中,获得H9N2禽流感病毒的8个基因节段的8质粒系统.将构建好的8质粒共转染293T细胞后,收获上清接种鸡胚,然后对鸡胚尿囊液进行鉴定;对拯救的病毒进行鉴定.结果 8质粒系统转染293T细胞后可以成功拯救出H9N2禽流感病毒,血凝效价可达到29/50μl,生长特性与野生型病毒类似.结论 成功建立了H9N2禽流感病毒反向遗传系统.

腺病毒介导HSP70-HBsAg嵌合基因转染树突状细胞及生物学特性分析

目的 分析携带热休克蛋白70(HSP70)和乙肝表面抗原(HBsAg)嵌合基因的腺病毒表达载体感染人外周血诱导培养树突状细胞(DC)后其生物学特性的改变.方法 从正常人外周血中分离单个核细胞,经Ad-HSP70-HBsAg感染刺激后.在含细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的培养液体中体外诱导培养DC;采用荧光倒置显微镜、RT-PCR、流式细胞仪(FACS)和混合淋巴细胞反应(MLR)试验对人外周血来源的DC进行生物学特性分析.结果 Ad-HSP70-HBsAg感染后的DC能够有效表达示踪蛋白GFP和转录基因HSP70-HBsAg,病毒感染组和对照组的DC在细胞形态、DC细胞表面分子表达和刺激同种异体的人外周血幼稚型T细胞增殖能力的方面无明显差别.结论 Ad-HSP70-HBsAg可有效转染DC,感染后的病毒对DC的生长和生物学特性无显著影响.

流行性乙型脑炎病毒脑脊液分离株"47株"全基因组特征分析

目的 对1950年分离自我国黑龙江省患者脑脊液的乙脑病毒"47株"进行全基因组序列的测定和分析,全面了解其全基因组特征.方法 复苏毒种提取病毒RNA,使用自行设计的乙脑病毒全基因组扩增测序引物,完成对病毒全基因组序列的测定.采用DNAStar、Modeltest、Phylip等生物软件完成全基因组核苷酸、氨基酸序列差异分析和乙脑病毒全基因组的系统进化分析.结果 乙脑病毒"47株"全长10 977个核苷酸.96至10 391位为开放读码框ORF,共10 296个核苷酸,编码3432个氨基酸."47株"与5株疫苗株在全基因组水平的核苷酸差异在2.4%～4.4%之间,氨基酸差异在0.3%～1.1%之间.乙脑病毒全基因组适进化模型为GTR+I+G.全基因组进化分析显示"47株"属于基因Ⅲ型乙脑病毒.结论 "47株"全基因组核苷酸和氨基酸高度保守,属于基因Ⅲ型乙脑病毒.

PD-L1重组蛋白的表达及生物学活性分析

目的 构建细胞程序死亡因子1配体1(PD-L1)的重组表达质粒,在原核系统中表达并分析其生物学活性.方法 经密码子优化后合成PD-L1全基因序列,构建硫氧还原蛋白-pET43b/(PD-L1)重组表达质粒并在大肠埃希菌中表达;用ELISA验证表达产物与其受体结合的生物学活性.结果 正确构建了PD-L1重组表达质粒及其大肠埃菌基因工程菌,能稳定、高效地表达目的 蛋白,相对分子质量为47×103,目的 蛋白能与其受体特异性结合.结论 成功获得有生物学活性的PD-L1重组蛋白,为研制单克隆抗体及其与病毒感染慢性化的关系提供基础条件.

HIV/AIDS患者负性情绪及其与外周血T细胞计数关系的探讨

目的 探讨HIV/AIDS患者负性情绪与外周血T淋巴细胞计数的相关性.方法 采用症状自评量表(SCL-90)、抑郁自评量表(SDS)、焦虑自评量表(SAS)对102例HIV/AIDS患者进行问卷测评,进行外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数.CD4+T细胞<0.2×109/L分为A组,≥0.2×109/L分为B组,分析A、B组负性情绪的差异性,CD4+细胞计数与SCL-90各项得分相关性,分别将CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数作为因变量进行线形回归分析.结果 77例(75.49%)HIV/AIDS患者存在程度不同的心理卫生问题,除敌对情绪外,躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、恐怖、偏执、精神病性等八项因子分均较常模明显异常(P均<0.05),抑郁和焦虑主观感受的发生率分别为67.65%(69/102)和43.13%(44/102),较正常人明显突出;A组患者的心理卫生问题、在抑郁、焦虑方面的主观感受较B组突出(P<0.05);CD4+T细胞数量与SCL-90总分及多项均分呈负相关,线性回归分析显示抑郁症状对CD3+、CD4+、CD8+T细胞的影响大.结论 大部分HIV/AIDS患者心理卫生状况存在明显异常,HIV/AIDS人群的情绪表达与CD4+T细胞计数有一定的相关性,以抑郁症状明显.

谷氨酰胺对急性肝损伤大鼠肠黏膜屏障的作用

目的 探讨谷氨酰胺(glutamine,GLN)对急性肝损伤大鼠肠黏膜屏障的作用.方法 61只清洁级Wistar大鼠随机分为3组:对照组、模型组、GLN干预组.采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-Gal)腹腔注射法建立急性肝损伤大鼠模型.检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总胆红素(TBiL)水平;光镜下及电镜下观察大鼠肝脏及肠道病理学改变;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;高压液相离子色谱仪(HPLC-PED)检测大鼠肠黏膜通透性的改变.结果 模型组及GLN干预组大鼠死亡率差异无统计学意义(P>0.05);模型组及GLN干预组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平差异无统计学意义(P>0.05);三组肠黏膜通透性差异无统计学意义(P>0.05);光镜下GLN干预组与模型组大鼠肝脏损伤程度差异无统计学意义;肠道未见明显病变;透射电镜下模型组和GLN干预组大鼠肝脏和肠道出现线粒体和细胞核等损伤,GLN干预组较模型组大鼠损伤轻;GLN干预组肝脏和肠道的凋亡指数(Apoptosis index,AI)显著低于模型组(P<0.05).结论 脂多糖可以造成D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤模型,造模前给予谷胺酰胺干预可能对于改善肝功能,保护肠黏膜的通透性,降低死亡率没有显著性作用.

河北某非法采血村人群感染HCV基因亚型调查

目的 了解河北某非法采血村村民感染丙型肝炎病毒(HCV)基因亚型分布情况.方法 对该村全体村民采集静脉血标本计520份,无菌分离血清;以RT-PCR法扩增其中可利用的483份血清HCV之C/E1基因片段,双脱氧链终止法测序;用Mega4.0软件进行HCV系统进化分析,构建系统进化树,判定基因亚型.结果 483份标本中,HCV RNA阳性者70份,阳性率14.5%;基因分型1b亚型36例,占51.4%;2a亚型34例,占48.6%.结论 该村村民血清HCV检出率约为14.5%,远高于一般人群;HCV亚型构成为1b、2a各半.

河南地区HIV-1毒株Gag基因抗原表位变异特征及准种特点研究

目的 探讨中国河南地区人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)毒株GAG蛋白抗原表位变异特征,并对其准种特点加以分析.方法 套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增确认HIV阳性样本gagp17～p24基因区段并测序,PCR产物纯化后克隆,挑选克隆株鉴定为阳性后测序,以MEGA(version 3.0)等软件进行分析.结果 河南HIV毒株为B'亚型;gag基因p17区段抗原表位突变有E62G(55.80%),Y79F(48.90%),T84V(48.90%),144V(44.20%),gag基因p24区段抗原表位未见明显变异.结论 HIV-1 B'亚型毒株gag基因p17区段的4个抗原表位,存在较大变异,p24区段较为保守,适合抗原表位疫苗的研制.

呼吸道合胞病毒感染后婴幼儿喘息患者血清leptin水平的变化

目的 通过测量呼吸道合胞病毒肺炎儿童患者瘦素(leptin)的水平,探讨瘦素与呼吸道合胞病毒感染后婴幼儿喘息间的相互关系.方法 43例呼吸道合胞病毒感染后婴幼儿分别于入院后24h内、治疗结束及出院后12周用放射免疫法检测血清leptin水平,并随访2年.根据患儿喘息发作的情况,分为婴儿哮喘组和非哮喘组;另选10名健康儿童血清标本作对照.结果 BSV感染后喘息发作≥3次的婴幼儿患儿,占41.9%.治疗前,哮喘组和非哮喘组血清leptin水平均高于对照组,差异有统计学意义(t=3.41、2.64,P<0.05).治疗后,哮喘组血清leptin水平高于非哮喘组和对照组,差异有统计学意义(t=5.74、6.23,P<0.05).出院12周后复查,哮喘组血清leptin水平仍高于非哮喘组和对照组,差异有统计学意义(t=6.32、6.11,P<0.05);而非哮喘组血清leptin水平和对照组比较,差异无统计学意义(t=0.81,P>0.05).结论 呼吸道合胞病毒感染后喘息发作≥3次的婴幼儿血清leptin水平较健康同龄儿童及非哮喘儿童明显升高,持续高leptin水平可能是BSV感染后婴儿哮喘的高危因素之一.

人源性抗HBsAg单链抗体在大肠埃希菌中分泌表达条件的研究

目的 研究抗HBsAS单链抗体A-15在大肠埃希菌中的高效表达,增加该抗体在培养基中的产量.方法 改变工程菌的诱导时机、诱导剂浓度和诱导时间,以观察这些因素对单链抗体表达的影响.另外,加入不同浓度的蔗糖、甘氨酸和Triton X-100,以考察三种化学物质对单链抗体在培养基中分泌量的影响.结果 工程菌培养4 h后,加终浓度0.5 mmol/L IPTG诱导表达8 h为抗HBsAS单链抗体A-15较佳的表达条件.终浓度0.3 mol/L蔗糖,2%甘氨酸和1%Triton X-100同时加入诱导时的培养基中,可使培养基中表达的单链抗体亲和活性分别增加16.78倍.经测定抗HBsAg单链抗体A-15在培养基中终表达量为7.4 mg/L.结论 抗HBsAg单链抗体A-15的分泌表达条件得到优化,表达量明显提高,这为更有效地制备该抗体用于其结构和功能研究提供了一个切实可行的方法.

利巴韦林注射液在细胞水平上抑制EV71病毒复制的初步研究

目的 通过体外实验,观察利巴韦林注射液对肠道病毒71型(EV71)病毒在横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)复制的抑制作用和体外灭活作用.方法 使用在2008年4月安徽阜阳疫情中分离到的EV71病毒,通过三种体外细胞实验:药物在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定实验;药物对细胞的保护作用实验;药物体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定实验.观察利巴韦林注射液对EV71病毒感染横纹肌肉瘤传代细胞(RD-A细胞)中所起的作用.结果 在利巴韦林注射液在细胞中抑制EV71病毒复制的药效测定实验中,1:640利巴韦林注射液稀释度组较病毒对照组延迟病变出现2 d,细胞生长未受到影响.在药物对细胞的保护作用实验中,1:8利巴韦林稀释度组较病毒对照组延迟病变出现4 d.在利巴韦林注射液药物体外对EV71病毒的灭活作用的药效测定研究中,1:40稀释度组较病毒对照组延迟病变出现2 d,而细胞生长未受到影响.结论 利巴韦林注射液在体外有抑制EV71病毒复制和部分灭活病毒的作用;并有一定的保护细胞抑制EV71病毒感染的作用.本研究对于临床上EV71感染的早期预防和治疗具有一定的指导意义.

恩替卡韦治疗慢性重型乙型肝炎的病例对照研究

目的 评估恩替卡韦(ETV)治疗慢性重型乙型肝炎的疗效及安全性.方法 选择78例HBV DNA阳性慢性重型乙型肝炎分为ETV治疗组、对照组各39例.ETV组采用与对照组相同的内科综合治疗,并予ETC抗病毒治疗.检测两组肝功能、PTA、HBV DNA载量变化,记录不良事件.于第12周比较两组治疗有效率,并对ETV组有效与无效病例的基线情况进行比较分析.结果 ETV组、对照组的基线特征相似.12周时ETV组治疗有效率56.41%,对照组33.33%(P=0.0405).重肝早期患者中,ETV组治疗有效率明显高于对照组(P=0.0275),而中、晚期无明显差异(P=0.4687).ETV治疗有效与无效病例的基线比较结果显示:两组间年龄、胆红素、HBV DNA载量以及病情分期、肝硬化比例差异有统计学意义(P<0.05);而胆碱酯酶、甲胎蛋白水平及性别、腹水、HBeAg阳性比例差异无统计学意义(P>0.05).ETV治疗期间,无明显不良反应发生.结论 ETV在慢性重型乙型肝炎早期应用可以提高疗效,但对中期和晚期的疗效可能没有影响.其疗效可能与年龄、重肝分期、岛焖厮健BV DNA载量、是否合并肝硬化有关.ETV治疗慢性重型乙型肝炎有较好的安全性.

HBV感染患儿外周血NK及NKT细胞分析与临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患儿外周血NK及NKT细胞变化特点及与肝病病情的关系.方法 采用流式细胞术对CHB息儿42例、正常儿童15例的外周血NK细胞及NKT细胞进行检测,并结合血清转氨酶(ALT)和病毒载量水平进行统计学分析.结果 CHB患儿外周血NK细胞与正常儿童相应的细胞群比较,差异有统计学意义(P<0.05),而NKT细胞则无统计学(P<0.05).结论 CHB患儿外周血NK细胞频数较正常儿童明显升高.

抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗狂犬病毒单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经细胞克隆和间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价,用G蛋白亲和层析柱进行纯化,间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性.结果 细胞融合率达100%,经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株,其腹水效价分别为1×104,1×105,1×104和1×105;4株单抗均为IgG类型且特异性好.结论 制备的单抗具有良好特异性和敏感性.

三种方法检测抗dsDNA抗体的比较

目的 比较间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附测定(ELISA)及放射免疫检测法(Farr)检测抗dsDNA抗体的敏感性及特异性,为开展临床联合检测寻找合适的方法.方法 收集我院门诊和住院患者血标本共200份,其中包括门诊和住院及后期追踪经临床诊断的系统性红斑狼疮(SLE)120份标本、类风湿关节炎(RA)20份标本.进行性系统硬化症(PSS)20例.混合型结缔组织病(MCTD)20例,干燥综合征(SS)20例,另健康体检者50例(全部经排查不具有结缔组织病)同时用以上三种方法检测抗dsDNA抗体.结果 用IIF、ELISA及Farr检测抗dsDNA抗体,SLE患者抗dsDNA抗体阳性率分别为25%、32%和32%.RA患者抗dsDNA抗体阳性率均为0.PSS患者抗dsDNA抗体阳性率分别为0.0和5%.MCTD病抗dsDNA抗体阳性率分别为0、5%和10%.SS患者抗dsDNA抗体阳性率均为0.健康体检者抗dsDNA抗体阳性率均为0.结论 用两种方法联合检测抗dsDNA抗体,尤其是IIF和ELISA检测,能提高单一一种方法对SLE患者抗dsDNA抗体检出率,有助于SLE的诊断及病情回顾.

鼻咽癌血清学检测方法的改进

目的 改进现有鼻咽癌血清学早期诊断方法,提高检测灵敏度.方法 用链霉亲和素.生物素放大免疫酶法与既有常规免疫酶法对鼻咽癌防治示范基地所取294份普查血清IgA/VCA,IgA/EA抗体进行血清学检测,并用SPSS统计软件对检测结果进行χ2检验和t检验.结果 共检测30岁以上294份普查人群血清,其中鼻咽癌患者血清106份,健康人血清188份.改进的链霉亲和素一生物素放大免疫酶法与既往已有的免疫酶法相比,血清IgA/VCA、IgA/EA抗体的检测阳性率增加;检测血清抗体的几何平均数明显提高.结论 改进方法可以提高血清学检测的灵敏度,同时保证了检测结果的特异性,提高了鼻咽癌的检出率,可以应用于鼻咽癌早期筛查工作.

抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体.方法 人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163-177,208-222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价.用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性.结果 得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,2株单抗的中和效价分别为1:8和1:16.结论 成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体,为其下一步应用打下基础.

血清肝纤维化指标酶联免疫分析实验和增强化学发光免疫分析系统检测的评价

目的 评价增强化学发光免疫分析系统(Enhanced Chemiluminescence Immunoassay, ECLIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA),测定血清透明质酸(HA)、层黏蛋白含量(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)方法与患者肝纤维化程度的相关性.方法 以患者肝穿病理结果为金标准,分别用ECLIA和ELISA法检测253例患者的4项血清纤维化指标,并分别与病理结果进行比较.结果 两种方法的检测结果均能反映患者从肝炎到肝硬化的肝纤维化逐渐加重的趋势.但与ELISA法比较,ECLIA方法检测的结果与病理结果的相关性较好.结论 ECLIA系统检测血清肝纤维化四项指标,可以更好的反应肝硬化的发展程度.

新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展

随着分子生物学领域的飞速发展,重组病毒载体成为当今病毒基因工程研究的热点之一,现有的病毒疫苗载体也存在各自的优缺点,安全有效性都有待进一步证实,应用较广泛的腺病毒虽然有表达水平高、容量大等优点,但是其在成人中感染率极高,现有的宿主免疫会局限载体的复制并降低其免疫原性.

丙型肝炎病毒细胞培养系统的研究进展

丙型肝炎病毒HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因,为单股正链RNA病毒,属黄病毒家族.

我国病毒性肝炎防治成果丰硕

我国曾是"肝炎大国",经过广大医务人员和科研人员的多年努力,现阶段我国肝炎防治取得了长足进展,各种肝炎的发病率均显著地下降.

《中华实验和临床病毒学杂志》稿约