重叠丙型肝炎病毒感染在慢性乙型肝炎患者肝脏病变中的作用

目的观察重叠丙型肝炎病毒(HCV)感染对慢性乙型肝炎(CHB)患者肝脏病变的近期及远期影响.方法选择0.5～15.0年间以Mengnihi法进行2次肝脏穿刺活体组织学检查的CHB患者230例,2次同期血清标本应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行HCV-RNA检测,并将血清HCV-RNA阳性与阴性患者近期肝脏病变及血清HCV-RNA持续阳性患者与具有可比性的持续阴性患者远期肝脏病变分别进行了回顾性对比分析.结果血清HCV-RNA阳性患者为41例(17.83%),其近期肝组织炎症活动度(G1～G4例数分布分别为5、8、16、12)与纤维化程度(S0～S4分布分别为1、3、8、19、10)和阴性患者相比(G1～G4例数分布分别为37、60、57、35;S0～S4分布分别为8、20、63、69、29)差异有统计学意义(P＜0.05).随访结束时血清HCV-RNA持续阳性患者29例,其远期肝组织炎症活动度与116例持续阴性患者相比(加重、无变化、好转例数分布分别为12、10、7;24、24、68)与纤维化程度(加重、无变化、好转例数分布分别为15、8、6;27、26、63)差异有统计学意义(P＜0.01).结论重叠HCV感染可加重CHB患者肝脏病变,并加速其进展.

丙肝病毒NS5B-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建及稳定转染HepG2细胞系的建立

目的构建可表达丙型肝炎病毒(HCV)NS5B-EGFP融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的HepG2细胞系.方法利用PCR技术从HCV基因组中扩增出ns5b基因片段,XhoI/Kpn I双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N3真核表达载体,转化TG1菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPN3-ns5b.将阳性克隆用脂质体法转染HepG2细胞,经持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系.结果成功构建了真核表达载体pEGFPN3-ns5b;建立了其重组质粒稳定转染的HepG2细胞系.结论重组质粒稳定转染的HepG2细胞系可表达NS5B-EGFP融合蛋白;该HepG2细胞系可以应用于以ns5b基因为靶位的抗HCV感染研究.

一起戊型肝炎暴发的血清抗体比较研究

目的评价戊型肝炎(戊肝)抗体E2-IgM(抗-HEV E2-IgM)酶联免疫试剂(捕获法)在反映戊肝流行特征和对戊肝早期诊断中的作用.方法在首发病例26 d后对某单位戊肝暴发人群和相邻单位对照人群进行血清抗-HEV E2-IgM、IgG检测;部分人群进行美国Genelabs抗-HEV IgM、IgG的平行检测.结果抗-HEV E2-IgM试剂捕获法在对照人群中仅检出1例阳性(0.11%),且阳性和阴性之间可明显区分,其特异度为99.89%;在暴发流行人群中检出145例阳性(8.66%),显著高于对照人群(P＜0.001);暴发人群中戊肝患者的血清学动态变化为:抗-HEV E2-IgM在暴露时间为30～60d时保持较高吸光度(A值),随着时间的延长A值呈明显下降趋势;抗-HEV E2-IgM阳性在该组人群中与性别和年龄无关;在暴发人群抗-HEV E2-IgM(+)的115例患者中,Genelabs抗-HEV IgG检测出88份阳性,检出率为76.52%,漏检27例,漏检率为23.48%.对照人群随机抽样179例患者中有20例Genelabs抗-HEVI IgG(+),阳性率为11.17%.在110份抗-HEV E2-IgM(+)的血样中,Genelabs抗-HEVIgM只检测出76份,检出率为69.09%;有16例患者Genelabs抗-HEV IgG、IgM均未能检出;Genelabs抗-HEV IgG和IgM的不一致率为25.45%.结论抗-HEV E2-IgM具有99%左右的特异度,与在正常人群中检出较高阳性率的Genelabs抗-HEV IgG试剂相比,减少了假阳性;抗-HEV E2-IgM与Genelabs抗-HEV IgM、IgG相比,对急性戊肝感染诊断的灵敏度提高了25%～30%,减少了漏诊;抗-HEV E2-IgM试剂盒操作简单、快速,本底较好,不存在酶结合物不足的问题.

柯萨奇B组病毒VP1胞质表达系统的建立

目的利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量,提高基因疫苗的免疫效果.方法(1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒(EMCV)5'非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7 EMCVP1.将该质粒和编码T7 RNA酶的pAR 3132共转染HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞;(2)将上述质粒分别转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,让带有不同质粒的两种载体细菌共感染小鼠腹腔巨噬细胞.结果(1)经共转染,在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中,目的抗原VP1在胞质中的表达比单独转染真核表达质粒pcDNA3 VP1增加2～4倍;(2)两种质粒载体细菌感染小鼠巨噬细胞后,目的抗原VP1也能在细胞中较好表达.结论pT7 EMCVP1和pAR 3132能在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞胞质中表达,且表达量比单独转染真核表达质粒pcDNA3 VP1明显增加.

HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定

目的在原核表达系统中对HIV p24抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性.方法利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(B2N)中扩增p24抗原基因,并克隆入T载体中.通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导,表达p24抗原.利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白.并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、Western Blot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测.结果PCR产物约为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致.重组质粒T-p24和pRSET-p24经BamH I和HindⅢ双酶切,其插入的外源基因片段均为690 bp.将纯化前与纯化后的蛋白作SDS-PAGE电泳,均可见一条约24×103的外源基因表达带,与计算的相对分子质量相符.经WB和ELISA试验,证明基因工程表达的p24抗原具有较高的特异性及活性.结论成功构建了HIV p24表达载体pRSET-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的特异性及活性.

登革病毒Ⅱ型NS1基因在小鼠体内诱导的DNA免疫

目的研究含有登革病毒Ⅱ型NS1基因的重组质粒肌内注射小鼠后在其体内诱导的细胞和体液免疫.方法用含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1于小鼠胫前肌注射并加强免疫2次.然后定期处死,采集血液标本以及小鼠脾细胞,检测小鼠的体液和细胞免疫.结果在末次免疫后4周检测到小鼠抗NS1抗体,并且检测到小鼠CD4+、CD8+亚群的变化.结论含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1免疫小鼠后,可以诱导小鼠产生针对NS1的稳定特异性体液、细胞免疫.

青岛地区2000-2003年HFRS患者汉坦病毒部分M基因的检测及其分型研究

目的调查山东省青岛地区2000-2003年汉坦病毒的流行情况,研究病毒在该地区的分子流行病学特征.方法采集肾综合征出血热(HFRS)急性期患者血清标本64份,提取血清中病毒RNA作为模板,根据GenBank中汉坦病毒基因序列,设计HTN型和SEO型的通用外套引物,同时分别设计HTN和SEO型的特异性引物作为内套引物,RT-nest-PCR扩增汉坦病毒基因组M片段G1区基因并测序.利用DNA Star软件进行核苷酸序列分析.结果在64份标本中,用HTN型特异性引物扩增出6份,占9%;用SEO型特异性引物扩增出25份,占39%;总阳性率为48%.总体看来青岛地区流行的毒株以SEO为主.SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小,其基因的离散率为0.3%～8.9%.HTN型汉坦病毒的变异率较高,其基因的离散率为2.6%～11.2%.结论青岛地区是以SEO型汉坦病毒的流行为主,HTN型并存的混合疫区;其中HTN型主要发现在胶南市.

慢性乙型肝炎患者血液流变学的研究

目的探讨慢性乙型肝炎(慢性乙肝)患者血液流变学的改变,并分析其与患者HBVDNA、肝功能、氧化损伤各项指标间的关系.方法检测55例慢性乙肝患者血液流变学指标、氧化损伤指标、肝功能、HBV DNA,并对此做出相关分析.结果乙肝组与正常对照组比较:全血低切粘度、红细胞聚集指数均有明显升高(P＜0.05).ALT异常组与正常组及正常对照组比较:红细胞压积、全血低切粘度、红细胞聚集指数均有明显升高(P＜0.05).HBV DNA阳性组与阴性组比较差异无统计学意义(P＞0.05).血液流变学指标和氧化损伤指标间无相关关系(P＞0.05).结论慢性乙肝患者体内存在微循环障碍及氧化损伤,血液流变学及氧化损伤指标与HBV DNA是慢性乙肝患者检查中相对独立的指标.

丁型肝炎病毒基因组RNA包埋锤头状核酶的活性研究

目的探讨用丁型肝炎病毒(HDV)基因组来包埋HBV靶向性核酶对核酶体内外活性产生的影响.方法用和HBV靶基因体外转录产物在不同反应条件下温育对HDV-核酶重组体的体外切割活性定量分析;与HBV基因组共转染Huh-7细胞以考察核酶在细胞内对HBV基因表达水平的抑制.结果体外实验发现,温度及核酶和底物的二级结构对包埋于HDV序列的核酶体外切割活性均有较大的影响.提高反应温度或消除二级结构都可使HDV包埋核酶的体外活性达到明显效果,与相同条件的裸露核酶活性没有太大差异.而细胞实验则表明,活性明显优于裸露核酶,可以将靶基因的表达抑制到极低水平.结论HDV RNA序列对所包埋核酶体外活性有一定的抑制作用,在细胞内则使核酶的活性得到显著增强.

SARS冠状病毒核衣壳蛋白的克隆表达及其临床应用研究

目的克隆、原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳(N)蛋白,分析、评价其抗原性和在SARS血清学诊断中的应用价值.方法采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)扩增SARS-CoV的N蛋白基因,克隆入pBAD/Thio-TOPO原核表达载体,表达、纯化重组融合N蛋白,Western Blot分析其抗原性和特异性,建立以重组N蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并与以全病毒裂解液为抗原的ELISA法进行比较.结果重组表达载体经诱导产生了高水平的重组融合N蛋白,融合蛋白经亲和纯化后,具备了较高的纯度和抗原反应性,以重组蛋白为抗原的ELISA法在特异性和敏感性方面优于以全病毒裂解液为抗原者.结论重组SARS-CoV的N蛋白具有良好的抗原性和特异性,可作为新一代SARS-CoV抗体检测试剂盒的备选抗原.

中药心康口服液对柯萨奇B3病毒感染小鼠促干扰素诱生和保护心肌的作用观察

目的研究中药心康口服液对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染小鼠体内促内源性干扰素(IFN)诱生,抗病毒保护心肌的作用效果,以探讨中药治疗的作用机制.方法用嗜心肌株CVB3感染小鼠腹腔,诱发心肌炎.感染前小鼠以30和12 g·kg-1·d-1的心康口服液灌胃2 d,病毒对照组以相同剂量的饮用水替代安慰用药;以外源性IFN 10 6 U·kg-1·d-1皮下注射作为阳性对照组.同时设正常小鼠对照,不作任何处理.持续用药至感染后5、10、和20 d,取全血分离血清,采用细胞病变法检测血清中IFN的活性;剖取心脏固定后制片,光镜下进行心肌病理形态学检察.结果心康口服液有促进感染小鼠体内诱生IFN的作用,感染期不同时间IFN诱生水平平均为29.2 U/0.1 ml,较病毒对照组平均12.6 U/0.1 ml水平有较大提高,且心肌病变程度与IFN诱生水平密切相关.接受外源性IFN组的小鼠,心肌病变程度明显比病毒对照组轻,但血清IFN水平低于心康口服液各组.结论中药心康口服液能使感染CVB3产生心肌炎的小鼠体内促进IFN诱生,从而发挥抗病毒、保护心肌的作用效果;这将有助于了解心康口服液临床治疗病毒性心肌炎的作用机制.

动态观察血清HBV-DNA水平预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的意义

目的研究干扰素-α-2a治疗慢性乙型病毒性肝炎(慢性乙肝)期间,患者血清中HBV-DNA定量的动态变化与疗效的关系.方法58例慢性乙肝患者皮下注射干扰素-α-2a 3 MIU/次,每周3次,疗程6个月.观察患者血清中HBV-DNA定量和丙氨酸转氨酶(ALT)的动态变化.结果完全有效组治疗1个月后,患者血清中HBV-DNA定量显著降低[(3.99±0.91)log10],明显低于部分有效组[(5.63±1.31)log10]和无效组[(6.69±1.42)log10],(P＜0.05).疗效不同的3组患者经过1个月的治疗,血清中HBV-DNA定量分别下降(2.50±0.44)log10、(1.62±1.12)log10和(1.05±1.35)log10.通过多因素分析,用干扰素-α-2a治疗1个月后患者血清中HBV-DNA阴转,提示干扰素-α-2a的疗效好;治疗前ALT高水平和无家族史也与其疗效好相关.结论患者治疗1个月后血清中HBV-DNA定量是预测干扰素-α-2a疗效的重要因素.

汉坦病毒病毒吸附蛋白表位的研究

目的研究并确定汉坦病毒(HTNV)病毒吸附蛋白(VAP)相关表位的序列特征.方法淘筛噬菌体肽库,将阳性克隆携带的外源肽与HTNV囊膜糖蛋白G2做同源性分析.应用IFA及ELISA法鉴定阳性噬菌体的特性.合成短肽,结合激光扫描共聚焦显微(LSCM)技术观察该短肽与宿主细胞膜的结合情况.结果保守性序列模式PX(1-2)HX(0-2)H与HTNV G2上96 YPWHTAKCHY105序列相似,合成的阳性短肽可以与病毒敏感细胞膜相结合.结论保守基因序列PX(1-2)HX(0-2)H及与之对应的HTNV G2上96 YPWHTAKCHY105序列在病毒与宿主细胞结合中可能起作用,且是VAP的相关表位.

福建省新分离3株乙型脑炎病毒的分子特征鉴定

目的确定福建省新分离乙型脑炎病毒(JEV)的基因分型及其E区段氨基酸序列特征.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增并克隆新分离JEV(02-41、02-43、02-102)的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X软件做碱基配对和比较分析,种系发生采用PHYLIP软件包分析.结果新分离的3株JEV属于基因Ⅲ型,E区段核苷酸和氨基酸与减毒活疫苗株SA 14-14-2株的同源性均在96%以上,在关键结构域有部分氨基酸差异.结论福建省新分离的3株病毒属于基因Ⅲ型JEV,E蛋白与疫苗株相比有部分氨基酸差异.

HBV DNA PreC/C和BCP片段基因多态性研究

目的研究乙肝患者HBV DNA核苷酸(nt)1 735～1 965片段突变及其临床意义.方法PCR扩增HBV DNA nt 1 735～1 965片段,将产物进行HBV DNA测序.结果在68例乙肝患者中,nt 1 735～1 965突变阳性率为48.5%,检出点突变总数168个,频率前10位的是nt 1 764(58.8%)、1 762(44.1%)、1 799(20.6%)、1 766(14.7%)、1 896(13.2%)、1 754(8.8%)、1 899(8.8%)、1 768(7.4%)、1 814(7.4%)及1 913(7.4%).同时,首次检出nt 1 907、1 922、1 923位点突变.54例慢性肝炎和10例肝炎肝硬化患者HBV DNA nt 1 896、1 764、1 762位点突变阳性率分别为16.7%、35.2%、35.2%和30.0%、60.0%、60.0%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论该研究提示:(1)Pre C/C与BCP区基因突变可能与肝实质纤维化相关;(2)HBV DNA突变发生率较高,且位点众多,基因测序对芯片探针设计有着十分重要的指导价值和临床意义.

腺病毒载体介导HBsAg基因在哺乳动物细胞中的表达

目的探讨腺病毒载体介导乙型肝炎病毒(HBV)前S2/S(preS2/S)基因在几种哺乳动物细胞中的表达.方法制备携带HBV preS2/S基因的非复制型重组腺病毒Ad-HBs,体外转染人胚肾细胞(293)、绿猴肾细胞(Vero)、肝癌细胞系(HepG2)和间质干细胞(MSCs),荧光显微镜观察EGFP的表达,同时采用RT-PCR检测目的基因的转录,ELISA法检测目的基因的表达.结果MOI为20的重组腺病毒Ad-HBs转染293、Vero、HepG2细胞和MSCs,48 h后90%以上的细胞表达EGFP,同时细胞表达高滴度的HBsAg(A值＞3.229).结论腺病毒载体不仅能够介导HBV preS2/S基因于连续细胞系细胞中高效表达,也能介导HBV preS2/S基因于干细胞中高效表达.

辽宁地区汉坦病毒分离株的基因分型

目的分离辽宁地区汉坦病毒并对分离株(SY 13)进行基因分型,以查清辽宁地区汉坦病毒流行株的基因型和基因亚型.方法采用组织细胞培养法分离汉坦病毒;用RT-PCR法分别扩增SY 13的M片段G1、G2区和S片段;采用邻位相连法,通过DNA Star、Clustalx、Phylip等序列分析软件分别对3个基因片段的序列与从GenBank下载的序列进行同源性分析,并构建种系发生树.结果通过对3个基因片段进行比较分析,SY 13与HTN型同源性较高,为79.3%～97.0%;通过M片段G2区的比较分析,SY 13与BAO 10、BAO 14、JIANG 13、BAO 9、Q 33处于同一分支,同源性为95.0%～97.0%.结论辽宁地区汉坦病毒SY 13株与黑龙江地区分离株属同一亚型,为HTN型病毒中的H4亚型.

酵母双杂交技术筛选乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP结合蛋白的研究

目的筛选与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶-N末端蛋白(TP)相互结合的肝细胞蛋白,进一步探讨TP的生物学功能.方法用聚合酶链反应(PCR)技术扩增TP片段,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH 109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖苷酶(X-α-gel)上进行双重筛选阳性菌落,DNA序列测定并进行生物信息学分析.结果成功获得了47个与TP特异性结合的阳性克隆,包括人类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、RNA聚合酶Ⅱ亚单位(hsRPB7)、血浆铜蓝蛋白(CP)等21种已知功能蛋白质基因和19个假设蛋白基因.结论HBV DNA聚合酶-TP可以与某些已知和未知功能蛋白相互结合,提示其具有较广泛的生物学功能.

甲型流感病毒荧光RT-PCR检测方法的设计和检定

目的设计甲型流感病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法并对其进行检定.方法用DNA Star和Primer Premier 5.0软件设计甲型流感病毒荧光PCR检测所用引物和探针;在GenBank中进行Blast以及电子对比证明其具有高度的特异性和保守性;和标准RT-PCR进行比较,检测此方法的灵敏度.结果所设计的引物和探针高度特异和保守,灵敏度比标准RT-PCR方法高3～27倍,并且反转录和PCR可合并为一步.结论设计了甲型流感病毒TaqMan检测方法;该方法具有特异、灵敏和简便的特点.

硒有效防治病毒感染性疾病进展

人体必需的微量元素硒与病毒感染性疾病关系的新研究成果日益增多.本文将以大量实验和临床研究成果,结合病毒感染的共性特征,对硒通过提高机体免疫力和适宜的氧化还原调控能力来降低人体对病毒感染的易感性,有效防治病毒感染性疾病做一综述.提示硒用于各种病毒传染性疾病防治的重要意义.

激素应用与SARS-CoV在患者体内存留的相关性探讨

探讨糖皮质激素的应用及使用时间与剂量是否与SARS患者体内SARS-CoV存留有关.

河北省1999-2001年麻疹网络实验室监测结果分析

为加速麻疹(M)控制,我省于1999年1月正式建立并启动了M监测系统.M网络实验室作为监测系统的一部分也开展了M疑似病倒的血清学诊断工作,为进一步完善M网络实验室的监测工作,现对我省M网络实验室监测结果进行分析.

HIV-ELISA"即刻法"室内质控

质量控制图是HIV检测实验室常规的室内控制方法,需连续测定质控血清20次以上,才能绘制控图.这限制了其在样本量小,检测试剂有限的实验室的应用."即刻法"是应用于免疫学实验室的新的室内质控方法,可弥补质控图的不足.青海省HIV抗体检测确认实验室引用了"即刻法"与质控图法对HIV抗体检测进行控制,现报道如下.

人血管抑素K1-5重组腺病毒载体的构建

血管抑素K1-5是目前被认为强的抑制血管生成的因子之一,研究表明其能明显抑制血管内皮细胞增生及牵移.我们采用腺病毒作为载体,成功构建了携带血管抑素K1-5基因的腺病毒,为下一步进行体内外实验奠定了基础.

一起病毒性脑膜炎流行的病原学研究

2002年12月底至2003年6月上旬,湖北省某地中学发生无菌性脑膜炎流行,发病年龄为12～16岁.临床症状表现为发热38℃～39℃、嗜睡、呕吐、脑膜刺激症状,其发病症状较轻.湖北省疾病预防控制中心传染病所先后采集脑脊液、血清标本,采用病毒分离、RT-PCR、中和试验和ELISA方法进行了病原学检测,现将初步结果报道如下.

SARS患者的护理现状及进展

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)国内称为"传染性非典型性肺炎".2003年4月16日世界卫生组织将新型变异的冠状病毒确定为引起SARS的病原体[1].它的主要传播途径是通过人体呼出的飞沫、排出的体液(分泌物、汗液、唾液、呕吐物、尿液)及被污染的物品进行传播.它发病迅速,传染性强,尤其对医务人员的健康造成了极大的威胁(医护人员是主要的易感者).SARS患者的护理是一个崭新的课题.因此,护理人员不仅要做好患者的护理工作,还要做好感染预防控制工作,防止SARS的蔓延.

224例成人麻疹临床分析

近两年来,我院收治麻疹患者共528例,其中18周岁以上成人麻疹患者255例,占48.3%,资料较完整的有224例.现将其临床特点总结报道如下.

关于提高书写英文摘要质量的通知

广东省《病毒学研究与进展学习研讨会》纪要

关于出示刊出论文获奖及获基金资助证明的通知

关于我刊启用新FAX并E-mail的通知

关于我刊来稿须付稿件处理费的通知

警惕非法医学期刊的招摇撞骗

中华医学会医学病毒学会会史

编者按:今年2月10日(农历正月初二)是我国医学病毒学奠基人黄祯祥院士(1910-1987)95周年华诞.