甘肃省SARS抗体血清流行病学调查

目的了解甘肃省严重急性呼吸综合征(SARS)患者、密切接触者和正常人群血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平.方法利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SARS病毒IgG抗体水平.检测对象包括甘肃省9例SARS患者的急性期和(或)恢复期系列血清,1 109例直接护理SARS患者的医生、护士、实验室检测人员、疾控人员和曾与患者有接触的人员以及978例正常人血清.结果9例临床诊断病例SARS冠状病毒特异性IgG抗体中6例为阳性,疾病恢复后12个月血清抗体仍为阳性；密切接触者1例特异性IgG抗体阳性；正常人3例特异性IgG抗体阳性.结论病例抗体阳性符合临床诊断,密切接触者和正常人的抗体阳性数较低,提示可能不存在隐性感染.

河南省分离的HIV-1 B-Thai亚型流行株全基因组克隆及序列分析

目的克隆、鉴定自河南省分离的HIV-1 B-Thai亚型流行株并进行系统发育分析.方法收集河南省1份HIV-1感染者全血后分离的淋巴细胞,在植物血凝素存在下与健康献血员淋巴细胞共培养,从培养的淋巴细胞中提取前病毒DNA.在HIV-1基因的长末端重复序列的保守区设计引物,利用LA Tag长链扩增系统扩增HIV-1全长基因,纯化的PCR产物与pWSK29-T载体连接,成功克隆CNHN 24株.对鉴定的3个克隆进行全长测序,利用局部同源法计算同源率,同时采用Phylip软件绘制HIV-1 Env、Gag和Pol基因的进化树.结果V3V4环序列分析表明:本次克隆的CNHN 24株病毒为HIV-1 B-Thai亚型,V3环区氨基酸序列比对发现在9个位点发生氨基酸替换.在含有9 010 bp,全长HIV-1基因的CNHN 24株克隆中未发现明显的缺失、插入和重排现象,Gag、Pol、Vpr和Vif基因与RL42株的同源率达到95.42％～97.08％,进化分析显示,CNHN 24株与RL 42株的遗传距离近.结论HIV-1 CNHN24株为国内实验室完成的HIV-1全长基因克隆,为进一步研究HIV-1流行特征提供了基础.

人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制

目的研制人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)RNA核酸国家参考品及制定相应标准.方法收集各地HIV感染者阳性血浆和HIV非感染者血浆,应用HIV、HCV抗体和HBsAg检测试剂进行筛选,对HIV抗体筛查阳性者用新加坡Genelabs公司的HIV BLOT 2.2确证试剂进行确证.以世界卫生组织(WHO)推荐的HIVRNA标准品对国家HIV核酸参考品中定量样品进行标定,并对其稳定性进行研究.结果经过筛选,选出8份样品为阴性参考品,8份样品为阳性参考品,3份为定量参考品,6份为灵敏度参考品,5份为线性参考品.几次独立标定,得到定量参考品HIV RNA的国际单位(IU),其中b1～b3的国际单位的对数值在-x±s以内,表明结果可靠.稳定性实验数据表明,该核酸参考品在4℃以下可存放4 d.结论初步建立了HIV核酸参考品,这将对HIV核酸诊断试剂的质量评价提供重要依据.

丙型肝炎病毒NS5a高免疫原区人工合成多肽抗原性的研究

目的检测不同基因型丙型肝炎病毒(HCV)非结构5a区(NS5a)高免疫原区短链多肽的抗原性,确定该区的主要线性抗原表位并探讨基因异质性与免疫原性间的关系.方法设计并合成特异性多肽;DNA Star软件对多肽氨基酸同源性进行比较;间接ELISA法检测多肽的抗原性.结果多肽氨基酸的同源性在不同区及不同基因型间变化较大.氨基酸残基2 212～2 241、2 272～2 301和2 302～2 331的多肽抗原性强.18个来自保守区的多肽可以与不同基因型抗-HCV阳性血清起反应(阳性率高达96%);而来自不同基因型间氨基酸序列保守性较低区的多肽抗原性与同基因血清的反应性较高.结论HCV NS5a高免疫原区主要的线性抗原位于氨基酸残基2 212～2 241、2 272～2 301和2 302～2 331的位置;人工合成的多肽可以有效地用于检测抗-HCV抗体;一些多肽的抗原性具有基因型特异性.

逆转录病毒载体介导的HSVtk基因表达及提高重组逆转录病毒滴度的研究

目的探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)基因表达及提高逆转录病毒滴度的措施.方法将HSVtk基因插入逆转录病毒载体pReyTRE中,构建重组逆转录病毒载体.通过微乒乓感染法导入包装细胞PA317中,以潮霉素B筛选克隆细胞,浓缩克隆细胞上清制备重组逆转录病毒.在不同时间及不同丁酸钠浓度下,检测分析经筛选获得阳性克隆靶细胞中有无HSVtk基因的表达及如何获得高滴度的重组病毒液.结果成功构建了重组逆转录病毒载体RevTRE/tk,制备的重组病毒感染靶细胞后有HSVtk基因的表达.结论通过微乒乓感染法在包装细胞PA317培养30 h和10 mmol/L丁酸钠浓度下,经冷冻超速离心能获得携HSVtk基因的高滴度逆转录病毒颗粒,为其基因治疗的应用及研究奠定了基础.

甲肝减毒活疫苗L-A-1疫苗株的核酸序列测定与比较分析

目的测定甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗龙甲-1株(L-A-1)核酸序列,了解其减毒和适应二倍体细胞的分子机制,并与其他甲肝病毒株进行比较,得出L-A-1株的一些特点.方法通过抗原捕获聚合酶链反应(AC-PCR)扩增甲肝病毒减毒活疫苗L-A-1株23代的片段,产物纯化后克隆至T载体并进行序列测定,应用生物信息学软件分析比较.结果得到了甲肝减毒活疫苗L-A-1株的基因序列(nt 25～7 418).L-A-1株开放读码框架(ORF)长6 675个核苷酸,编码2 225个氨基酸.比较分析表明,该株与国际代表株MBB株和HM 175野毒株在核苷酸水平上同源性分别为98.00％和94.00％,在氨基酸水平上同源性分别为98.51％和98.65％.通过与其他细胞适应株、细胞病变株以及减毒株的比较得出:A-1株5′非编码区(5′NTR)nt 152、591、646、687处的突变和180～181处插入11个核苷酸以及2B区的nt3 889(aa1 052-Val)处的突变是病毒适应宿主细胞的分子基础;2C区的nt 4 185(aa1 152-Lys)处的突变可能参与病毒的减毒过程;由于3A区缺失6个核苷酸(nt 5 020～5 025)从而导致两个氨基酸(Asn、Asp)缺失是病毒适应细胞快速增殖的分子基础.结论分析了L-A-1株的基因序列,得出其适应细胞和减毒的核苷酸位点.

我国HIV-1感染者耐药突变的流行性研究

目的掌握我国大规模用药前耐药突变在我国HIV-1感染者中流行情况的本底资料.方法在第二次全国HIV流行病调查2002年样本中随机选取20%,对于蛋白酶(PR)基因区全长和逆转录酶(RT)20～230氨基酸位点进行PCR扩增、测序并使用HIVdb-Drug Resistance Algorithm软件进行分析,检测耐药相关突变.结果分别得到164份PR基因区样本和138份RT基因区样本.PR基因区样本中发现1份(0.61%)样本存在蛋白酶抑制剂(PI)主要相关突变,163份(99.39%)样本存在PI次要耐药相关突变.RT基因区样本中发现8份(5.80%)具有核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药相关突变,2份(1.45%)存在非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关突变.结论我国未用药HIV感染者中耐药相关突变尚处于低流行状态,应当在用药过程中定期监控以减少耐药突变的产生与传播.

巨细胞病毒感染后晚期mRNA表达与细胞病变相关性的研究

目的研究巨细胞病毒(HCMV)感染后晚期mRNA的表达与致细胞病变作用(CPE)及感染细胞的超微结构变化.方法用HCMV AD169株感染人胚肺成纤维细胞,通过半定量RT-PCR检测HCMV晚期mRNA的表达水平,同时动态观察CPE的改变,电镜观察细胞的超微结构变化.结果HCMV晚期mRNA在感染后12 h开始表达,随时间的延长水平逐渐升高;而CPE在48 h后才出现,并逐渐加重.电镜下可见内质网早期囊腔扩张,晚期呈空泡变,线粒体肿胀,线粒体嵴数目减少,甚至缺失,感染晚期细胞核中有大量成熟待出壳的病毒核衣壳.结论细胞超微结构变化与HCMV晚期mRNA表达密切相关,在病毒循环中起重要作用.晚期mRNA可作为观察治疗HCMV活动性感染的临床疗效指标.

含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究

目的探讨含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒(rAAV)和重组腺病毒(rAdV)疫苗在BALB/c小鼠中联合免疫的效果.方法将密码子优化的HIV-1 gp120基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒(AdV)载体质粒,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗.将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中的gp120特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答.结果两种重组病毒均可表达目的基因gp120;在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应,但用rAAV初免2次,再用rAdV加强3次所诱发的CTL和血清IgG反应强.结论rAAV和rAdV疫苗联合免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应.

HCV抗体检测试剂对血站HCV抗体初筛试剂的评价

目的建立对血站献血人员血液中HCV抗体初筛试剂的评价方法,为选择合适匹配的初筛试剂提供依据.方法用新研制出的抗HCV不同基因功能区抗体检测试剂对两种国产试剂和一种进口试剂的特异性和灵敏度进行考核评价.结果两种国产试剂之间的特异性和灵敏度均存在一定差异,且总体质量略差于进口试剂.结论用新研制出的抗HCV不同基因功能区抗体检测试剂可对初筛试剂进行评价,选择合适的初筛试剂匹配对控制献血员的血液质量至关重要.

风疹病毒分子流行病学研究

目的阐述风疹病毒(RV)的遗传变异规律及分子流行病学特点.方法利用RT-PCR扩增RV E1基因,然后测序,并用DNA STAR软件包绘制系统发生树,以分析RV的分子流行病学特点.结果测得RV JR23株E1基因的序列,与GenBank中包括3株中国株在内的不同时间、地点分离的30株病毒株一起绘制了系统发生树,比较了各株可产生HI抗体和中和抗体区的氨基酸变异情况.(1)总体上RV的核酸、氨基酸序列高度保守.中国的4株分离株遗传性质差别相对较大,其中379株和BRD株构成了不同于其他29株的基因Ⅱ型,就其遗传来源及生物学性状需进一步研究.(2)JR23株与英、美、日20世纪60年代流行株序列相近,其遗传来源可能为20世纪60年代世界流行株的中国衍生株,但具体的初始流行时间未知.结论RV的流行有地域的差异,其分子流行病学特点与时间有关.因为人是RV的惟一宿主,所以人员的流动性,影响了RV的流行特点.

祛毒增宁胶囊治疗艾滋病的疗效观察

目的临床观察中药祛毒增宁(ZL-1)胶囊治疗艾滋病(AIDS)的效果.方法应用经河南省药品监督管理局批准的ZL-1胶囊治疗1 000例AIDS患者.剂量为每次4粒,一日3次,共治疗一年,对其中60例患者进行仔细的临床观察及实验检查.结果AIDS患者服中药后症状有较好的改善,绝大多数患者可以继续进行日常工作,CD4细胞数显著上升,治疗1个月后CD4数量增加了112.3%,6个月增加了156.7%,其中增加50.0%、100.0%和200.0%的分别为治疗者的79.6%、63.3%和46.9%.共检查了10例患者病毒载量的变化,3例患者的病毒载量明显下降(0.931～2.696对数),4例稳定,二者占7/10.结论ZL-1胶囊治疗AIDS有效,无副作用.

儿童肝衰竭临床特征的研究

目的探讨儿童肝衰竭的临床特征.方法应用EXCELL 2000软件和t检验分析了本院收治的105例儿童肝衰竭临床资料.结果(1)急性肝衰竭9例,亚急性肝衰竭38例,慢性肝衰竭58例.(2)发病人数多的是学龄期7～12岁儿童组43例(41.0％);其次是婴儿组30例(28.6％).(3)婴儿组中13例(43.3％)病因不明,占第1位;其次为CMV感染9例(30.0％).1岁以上组病因以HBV感染多,有22例(29.3％);病因不明21例(28.0％);肝豆状核变性15例(20.0％);HAV感染10例(13.3％).(4)合并症中71例(67.6％)合并腹水,合并自发性腹膜炎34例,占有腹水病例的47.9％.合并其他部位感染的有35例(33.3％),感染多的是肺部感染,其次则是败血症.51例(48.6％)合并电解质紊乱,低钾见于所有电解质紊乱的病例.48例(46.2％)合并肝性脑病,肝性脑病在儿童中有其特殊的临床表现.(5)本组77.2％(71/92)患儿合并低血糖.结论儿童肝衰竭病因与年龄有较大的关系.在婴儿组中主要是由CMV感染引起,但近一半病因不明.年长组以HBV和HAV感染为主,但在引起儿童肝衰竭的其他因素中肝豆状核变性是常见的.在临床中必须注意儿童肝性脑病的特殊表现,积极预防和及时发现腹膜炎及除自发性腹膜炎以外的其他部位感染、电解质紊乱和低血糖等肝衰竭的合并症.

"克疣灵"治疗尖锐湿疣的临床实验研究

目的探讨中药"克疣灵"治疗尖锐湿疣(CA)的作用机理.方法采用细胞原代与传代培养技术、MTT比色法测定不同浓度"克疣灵"对兔阴茎包皮表皮细胞、CA疣体组织细胞增殖生长的影响,采用FQ-PCR定量检测不同浓度"克疣灵"对HPV6.11DNA表达水平及对CA患者阴茎包皮不同区域HPV6.11DNA表达水平的影响作用.结果"克疣灵"对兔阴茎包皮表皮细胞增殖生长无影响,而对CA疣体组织细胞、HPV6.11DNA的表达具有显著的抑制作用,"克疣灵"浓度与CA疣体组织细胞增殖率、HPV6.11DNA表达水平呈显著负相关,对CA患者非皮损区与皮损区的HPV6.11DNA表达具有显著的抑制作用.结论"克疣灵"具有显著的抗HPV6.11作用,能显著抑制CA疣体组织细胞的增殖生长,而对机体正常表皮细胞无损伤作用,提示"克疣灵"临床使用安全,对CA与HPV亚临床感染具有良好的疗效.

DNA芯片分析HBV阅读框架多点基因突变的研究

目的检测HBV-DNA阅读框架各位点的变异,为临床诊断和治疗提供依据.方法通过基因芯片技术,将HBV-DNA进行PCR扩增,掺入荧光分子标记,与点阵列的寡核苷酸杂交,通过计算机分析,检测HBV-DNA的基因序列,观察HBV-DNA阅读框架各位点的自然变异.结果HBV-DNA阅读框架各位点的变异普遍存在,其中前C区1896、1814变异率分别为23.5％、3.9％,BCP 1762、1764变异率分别为55.9％、53.9％,P区528、552 M-I、552 M-V变异率分别为39.2％、38.2％、10.8％.结论基因芯片技术是检测基因突变、基因测序的高效方法之一,具有极高的灵敏性和可靠性.HBV-DNA位点的变异对于疾病的稳定与进展以及病情转归的预判有重要作用.

埃博拉病毒结构蛋白研究进展

埃博拉病毒(ebola virus)于1976年在非洲中部苏丹和扎伊尔两国交界一带侵袭人类,引起了病死率极高的急性出血性传染病,迄今已发生过5次大流行.因该病始发于埃博拉河流域,并且于该区域流行严重,故而得名[1-3].

男男性接触者与艾滋病

已有许多国家确认艾滋病毒/艾滋病(HIV/AIDS)在男男性接触者(men who have sex with men,MSM)中的流行.在不同程度上,男男之间的HIV性传播是AIDS流行的重要途径之一.在大多数发达国家,这个途径一直是HIV传播的主要方式之一.

拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液三联叠加治疗慢性乙型肝炎的初步评价

用抗病毒药拉米夫定、干扰素α-2b和免疫调节剂黄芪注射液叠加,治疗慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,从临床综合疗效、肝功能、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制指标三方面进行分析,并与单用拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液及基础保肝治疗比较,初步评价联合用药方案的疗效.

HIV感染者和AIDS患者淋巴细胞免疫功能的研究

我们观察了HIV感染者和AIDS患者外周血中淋巴细胞亚群的数量,以探讨机体在HIV感染后细胞免疫所发生的变化.

肾脏疾病患者巨细胞病毒IgM抗体检测

巨细胞病毒(CMV)是一种可导致多种疾病的DNA病毒.为探讨肾脏疾病同CMV感染的关系,我们对患者血清进行了CMV IgM抗体的检测,现将结果报道如下.

乙型肝炎病毒在家庭内感染的调查

近我们对我院乙型肝炎病毒(HBV)感染住院患者的家庭内感染情况作了调查,现将结果报道如下.

2003年SARS流行中的多病原问题

2003年的SARS疫情给全世界,特别是给中国造成的灾难,让人们记忆深刻,虽然世界卫生组织已将SARS病原确定为一种新的冠状病毒(SARS-CoV),但除此之外,还发现有其他病原的报道.

α干扰素于体外培养的2.2.15细胞中对MxA基因的诱导及抗HBV作用

干扰素(IFN)诱导性抗病毒基因MxA于细胞内具有直接的抗RNA类病毒复制作用,已得以广泛验证[1].对DNA病毒的影响亦倍受关注.我们以2.2.15细胞培养为基础,通过IFN的刺激,观察IFN体外抗HBV复制及MxA基因的表达变化,以阐明MxA蛋白在IFN抗HBV复制中的作用.

SARS-CoV蚀斑形成技术的建立

自2002年11月我国出现第一例传染性非典型肺炎(SARS)病例以来,至2003年8月已造成5 000多例临床病例,其中死亡300多例,对我国国民经济和社会稳定造成了巨大影响.

荧光定量聚合酶链反应检测人类疱疹病毒7型方法的建立及应用

1990年,首次从健康人外周血单个核细胞中分离到人类疱疹病毒7型(human herpes rirus type 7,7).HHV-7为双链DNA病毒(145kb),主要感染CD4+淋巴细胞、唾液腺.

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《医学信息杂志》消息

《自然疫源性疾病》出版在即

《热带医学》书讯

《SARS的又一病原体--呼肠病毒》书讯

拉米夫定治疗后复发慢性乙型肝炎的临床分析及对策

拉米夫定作为一种新一代核苷类高效抗乙型肝炎病毒药物,目前已广泛应用于慢性乙型肝炎(慢乙肝)的治疗.国内有报道应用该药治疗慢乙肝一年具有较好的临床疗效[1].近年应用该药治疗的患者不断增加,部分患者用药后病情仍有反复,甚至恶化.因此,我们对拉米夫定治疗后的106例慢乙肝复发病例作如下临床分析,并针对复发探讨对策.

丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV RNA水平对疗效的影响

丙型肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染机体后引起的肝脏炎症,约85％的急性丙肝可转变为慢性肝炎,20％演变为肝硬化,1％～5％发展为肝细胞癌.

胸腺五肽联合苦参素注射液治疗慢性丙型肝炎的临床研究

丙型肝炎是全世界流行的传染病,?-干扰素治疗慢性丙型肝炎的疗效已得到公认[1,2].由于种种原因尚有相当一部分患者无法使用此药,对于?-干扰素联合病毒唑治疗失败的难治性病例亦无良策.