中华生物医学工程杂志
Chinese Journal of Biomedical Engineering 중화생물의학공정잡지
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多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠肠炎CD4+T细胞分泌和浸润的影响
目的 研究多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠肠炎CD4+T细胞分泌和浸润情况的影响.方法 用卵清蛋白(OVA)特异性的CD4+辅助性T细胞(Th)转入SCID小鼠中制作小鼠实验性肠炎模型.将实验模型小鼠分为多形螺旋线虫感染组和无感染组,观察感染14 d小鼠结肠炎性反应的组织学病理变化;应用实时荧光定量PCR检测感染14 d 小鼠结肠组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;以免疫荧光法观察感染3、5、7、14d小鼠结肠组织中CD4+T细胞的数量.结果 与无感染组比较,感染组小鼠结肠炎性反应明显加重,病理评分升高(5.41±0.53比2.12±0.69,P＜0.05).感染组小鼠IL-4、TNF-α较无感染组明显增高,IFN-γ则明显减低(IL-4:10.70±4.85比1.00±1.07,TNF-α:6.54+2.88比1.00±0.48,IFN-γ:0.21±0.10比1.00±0.28,均P＜0.05).各时间点感染组SCID小鼠结肠组织中CD4+T细胞均比同时间点的无感染组明显增多,CD4+T细胞浸润明显增强.结论 多形螺旋线虫感染在CD4+T细胞诱导的小鼠实验性肠炎的早期阶段促进了炎性反应的加重,可能与促进CD4+T细胞浸润、诱导Th2和抑制Th1的分泌有关.
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肝硬化大鼠模型肝细胞移植途径的筛选
目的 通过比较4种同种异体肝细胞移植方法治疗肝硬化大鼠模型的疗效,筛选出较好的细胞移植途径.方法 50只经证实成模的肝硬化大鼠模型动物被完全随机分为5组:肝动脉移植组(G1)、门静脉移植组(G2)、脾动脉移植组(G3)、尾静脉移植组(G4)及对照组(G5).前4组分别自肝动脉、门静脉、脾动脉及尾静脉注射肝细胞悬液2 ml(细胞数量为2×106),对照组(G5)不作干预.移植前后对各组大鼠行肝功能检测及术后处死大鼠取肝脏作病理评分.结果 G1、G2组移植后前3周血清白蛋白水平逐渐下降,第5周后逐渐回升,到第7周达到峰值[(15.4±2.3)g/L,(15.4±2.1)g/L].G1、G2组移植后前3周血清总胆红素水平逐渐上升,到第5周后逐渐回落,到第7周达到移植前的水平[(13.62±2.32)μmol/L].G5组移植前后血清总胆红素水平变化不明显;术后病理G3组改善为明显,G1、G2组次之,G4组再次之,G5改善情况差.结论 在针对肝硬化大鼠模型不同的移植途径中,经脾动脉途径移植肝细胞,术后病死率较低,能更有效地改善肝脏功能及减轻肝细胞的变性和坏死.
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替米沙坦干预心房颤动模型猪的右心房心肌靶蛋白鉴定
目的 研究替米沙坦(TMST)对实验性心房颤动(AF)模型猪的影响,分离并鉴定右心房组织差异表达蛋白.方法 健康家猪18只完全随机法分为3组,每组6只:正常对照(NC)组右心房植入电极不起搏,房颤(AF)组右心房植入电极并快速起搏,替米沙坦(TMST)组右心房植入电极快速起搏并给予TMST干预.实验前及2周后测量各组实验猪心室收缩末期左、右心房面积(LAESA、RAESA).实验结束时进行右房组织Masson染色观察,双向蛋白质电泳分离各组右心房心肌差异表达蛋白质,采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱技术鉴定靶蛋白.结果 AF组采用快速右心房起搏成功建立AF猪模型.与AF组比较,TMST干预可以减少AF诱发率和胶原纤维表达,并使LAESA和RAESA缩小[LAESA:(630.6±10.9)mm2比(744.3±29.9)mm2;RAESA:(553.4±13.7)mm2比(677.9±26.3)mm2,均P＜0.05].双向蛋白质电泳及质谱分析鉴定出翻译起始因子5A、热休克蛋白27、NADH脱氢酶铁硫蛋白8在TMST组表达减少.结论 翻译起始因子5A、热休克蛋白27、NADH脱氢酶铁硫蛋白8可能是与TMST减低实验猪AF诱发率、抑制心房重构相关的靶蛋白.
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T-bet质粒基因转染对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液白细胞介素13和内皮素1的影响
目的 观察气道内T-bet质粒基因转染对哮喘小鼠气道肺泡灌洗液白细胞介素13(IL13)、内皮素1(ET-1)的影响.方法 C57BL/6J小鼠32只,完全随机分为4组(n=8),即哮喘模型组(A组)、正常对照组(B组)、空质粒干预组(C组)和模型T-bet质粒干预组(D组).用卵白蛋白(OVA)抗原溶液小鼠腹腔注射致敏,滴鼻造模.B组用生理盐水代替卵白蛋白,C组和D组卵白蛋白激发48 h前,分别经鼻滴入50μg空质粒或重组T-bet质粒.免疫印迹检测和酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠的支气管肺泡灌洗液中IL-13、ET-1的水平.结果 哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中Th2因子IL-13和ET-1水平比正常对照组升高[(2.32±0.40)ng/L比(0.38±0.16)ng/L,(40.07±6.52)ng/L比(14.16±0.51)ng/L,均P＜0.05];模型T-bet质粒干预组BALF中Th2因子IL-13和ET-1水平[(1.16±0.19)和(23.08±2.59)ng/L]比哮喘模型组降低(均P＜0.05).结论 气道内转染T-bet质粒能有效下调小鼠BALF中Th2因子IL-13及ET-1水平.
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尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞内钙离子浓度及膜瞬时受体电位通道mRNA表达的影响
目的 观察尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)后细胞内基础钙离子浓度的改变及平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道(TRPC1,TPRC6)mRNA表达水平变化.方法 不同浓度尼古丁[O(对照组)、10、20、50、100μg/L]刺激大鼠气道平滑肌细胞,作用24及48 h后,采用Incyte细胞内钙浓度检测系统观察细胞内钙离子浓度的变化.提取细胞总RNA,反转录成cDNA,实时定量PCR方法检测细胞TRPC1和TRPC6 mRNA表达量变化.结果 20、50、100μg/L的尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细24和48 h后,细胞内基础钙离子浓度均较对照组明显升高[(117.99±19.39)、(122.89±17.91)、(124.70±17.93)nmol/L比(85.85±12.60)nmol/L;(142.07±18.99)、(162.27±19.91)、(207.30±26.56)nmol/L比(98.04±2.39)nmol/L,均P＜0.05].而细胞中TRPC1和TPRC6 mRNA相对浓度也均较对照组显著升高(P＜0.05),其中,100μg/L尼古丁刺激气道平滑肌细胞48 h后,细胞内基础钙离子浓度和TRPC6 mRNA相对表达量均较刺激24 h后的明显升高(P＜0.05).结论 尼古丁可能通过上调大鼠气道平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道TRPC1和TPRC6的表达而导致大鼠气道平滑肌细胞内基础钙离子浓度增加.
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携带靶向干扰小鼠早期生长反应基因1短发夹RNA的慢病毒载体转染小鼠视网膜的干扰效率研究
目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)和靶向干扰早期生长反应基因1(Egr-1)短发夹RNA(shRNA)共表达的慢病毒载体,转染小鼠视网膜组织,观察其对Egr-1基因的干扰效率.方法 针对已经筛选确定的Egr-1基因shRNA有效靶序列,构建携带GFP和靶向干扰Egr-1 shRNA的慢病毒载体LV-shRNA(Egr-1).15日龄C57BL/6小鼠完全随机法分为实验组和阴性对照组,每组10只.LVshRNA(Egr-1)慢病毒载体经玻璃体腔注射转染至实验组小鼠右眼内,不针对任何特异基因的LV-NC 慢病毒载体通过同样的转染途径转染至阴性对照组小鼠右眼内,实验组及阴性对照组小鼠左眼不做任何处理设为空白对照组.2周后荧光显微镜下观察转染情况,实时定量PCR(RQ-PCR)、免疫印迹(Western blot)、免疫荧光检测Egr-1的表达,观察Egr-1基因的干扰效率.结果 慢病毒载体经玻璃体腔注射途径转染小鼠视网膜后,GFP广泛分布于视网膜全层,包括视网膜色素上皮层.与空白对照组和阴性对照组注射眼比较,RQ-PCR检测显示实验组注射眼Egr-1 mRNA表达明显下调(0.290+0.074比1.006±0.033、1.010±0.086,均P＜0.001),抑制率为71.29%;免疫印迹显示实验组注射眼内Egr-1蛋白表达明显下调(0.224±0.035比0.674±0.050、0.688±0.049,P＜0.001),抑制率为67.44%.免疫荧光检测发现实验组注射眼在视网膜除内核层有少许Egr-1阳性细胞分布外,没有荧光表达.结论 成功构建携带绿色荧光蛋白和靶向干扰Egr-1基因shRNA的慢病毒载体,经玻璃体腔注射转染小鼠眼内其转染效率高,分布范围广,且对小鼠视网膜Egr-1基因抑制效率高.
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重组人p53腺病毒治疗恶性胸腔积液的疗效
目的 探讨重组人p53腺病毒治疗非小细胞肺癌并发恶性胸腔积液的疗效.方法 2006年1月至2009年12月广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心和广州呼吸疾病研究所的96例恶性胸腔积液患者完全随机分为治疗组(46例,常规GP方案化疗,抽胸水后用重组人p53腺病毒胸腔注入)和对照组(50例,常规GP方案化疗,抽胸水后用A群链球菌胸腔注入),观察两组患者的疗效和不良反应.结果 治疗组与对照组疗效差异无统计学意义,治疗组近期有效率71.7%(33/46),但局部不良反应胸痛和咳嗽加重明显小于对照组(4.3%比20.O%,4.3%比22.O%,均P＜0.05).结论 应用重组人p53腺病毒治疗恶性胸腔积液安全有效,不良反应比A群链球菌低.
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脉冲振荡法测定慢性阻塞性肺疾病患者呼吸阻抗的影响因素分析
目的 探讨连接管道、体位和通气对脉冲振荡法(IOS)测定慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者呼吸阻抗的影响,以评价IOS的临床意义及其在重症监护中的应用.方法 分别在坐位无管、坐位有管、卧位无管、卧位有管4种状态下采用IOS对COPD患者组和健康组(各40例)进行呼吸阻抗测定;30例机械通气COPD患者在通气和断开通气两种情况下进行呼吸阻抗测定.结果 健康组中,外加连接管后黏性阻力稍增大,共振频率左移[(9.849+1.811)Hz比(7.850+1.043)Hz,P＜0.05],弹性阻力减少,总阻抗无明显变化;由坐位转为平卧位后,黏性阻力明显升高,高频不如低频明显,共振频率右移[(9.849±1.811)Hz比(13.604±1.702)Hz,P＜0.05],弹性阻力增大,总阻抗增加[(0.328±0.080)kPa·L-1·s-1比(0.443±0.120)kPa·L-1·s-1,P＜0.05].COPD患者呼吸阻抗的变化规律与健康组类似.4种状态下区别COPD患者与健康者敏感的指标均为共振频率(F=159.5、114.3、98.6、97.0,均P＜0.05).与断开通气比较,COPD患者机械通气时部分阻力值下降,以高频时明显,但主要阻力参数的变化差异无统计学意义.结论 外加管道或体位改变后,IOS测定值变化有规律,且与呼吸机连接后不相互影响.IOS测定可广泛应用于平卧位、病情严重或机械通气的患者.
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CD133和GW112在胃癌中的表达及其与预后的关系
目的 研究胃癌组织CD133 mRNA和GW112 mRNA的表达水平及其与患者临床病理参数、无瘤生存率和生存率的关系.方法 采用实时定量PCR技术检测25例手术切除的胃癌及相应癌外正常胃黏膜组织中CD133mRNA和GW112mRNA的表达,随访患者进行生存分析.结果 (1)胃癌组织CD133 mRNA和GW112 mRNA表达量[0.07(0.01～0.13),0.12(0.04～0.36)]均显著高于正常胃黏膜组织[0.01(0.00～0.07),0.02(0.01～0.05)](P＜0.05).(2)GW112 mRNA表达量随患者年龄增高(＞60岁),合并淋巴结转移,TNM分期Ⅲ期或Ⅳ期而升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).CD133 mRNA则和临床病理参数无显著关系.(3)随访所有病例,5年生存率为(28.0+9.0)%,无瘤生存率为(24.6±9.5)%.分别按照癌组织CD133和GW112表达水平分为高、低表达组.CD133高、低表达组5年生存率(7.7%比50.0%)和无瘤生存率(0%比50.5%)差异均有统计学意义(P＜0.05);GW112高、低表达组5年生存率(11.1%比71.4%)和无瘤生存率(20%比29%)差异也均有统计学意义(P＜0.05).Cox多因素分析表明癌组织CD133和GW112的表达水平是患者无瘤生存期的独立影响因子(相对危险度分别为3.792和5.155);GW112同时也是患者生存期的独立影响因子(RR=4.978).(4)ROC曲线分析发现,联合检测CD133和CEA对患者预后有一定的预测价值.结论 胃癌组织CD133 mRNA和GW112 mRNA 表达水平与胃癌恶性潜能有关,可预测胃癌患者的预后.
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经阴道穿刺治疗宫内外同时妊娠4例
目的 探讨经阴道穿刺在宫内外同时妊娠(HP)治疗中的应用及价值.方法 2004年1月至2009年12月广州医学院第三附属医院生殖医学中心体外授精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠患者中,筛选出经阴道穿刺治疗的4例HP患者,分析探讨经阴道穿刺治疗HP的适应证、时机的选择、治疗方法及妊娠结局.结果 经阴道穿刺治疗的4例HP均为宫内妊娠合并输卵管妊娠,4例患者宫内妊娠胚胎及异位妊娠胚胎均见原始心管搏动.3例行经阴道穿刺抽吸异位妊娠胚胎,其中2例治疗时间分别为孕42d、43 d,均足月分娩,1例治疗时间为孕68d,穿刺术后4 h输卵管破裂行开腹手术治疗,术后4d宫内妊娠流产.另1例抽吸胚胎后注射50%葡萄糖2 ml,治疗时间为孕50 d,足月分娩.结论 如果HP患者孕周较小(＜8周),病变输卵管未破裂,无明显的腹腔内出血,术后能够有较长时间定期复诊随访,则可以选择经阴道穿刺治疗HP.
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经皮胸腰椎弓根置钉三维定位器的研制
目的 研制一种新的经皮经椎弓根置钉定位辅助器械,方便准确的辅助经椎弓根置钉手术操作.方法 术前将每个椎体经椎弓根平面行CT扫描,测量每个椎体水平面椎弓根螺钉植入角度(TSA)和矢状面椎弓根螺钉植入角度(SSA),将其延长线与背部皮肤相交,定位皮肤穿刺点,进行穿刺.两具新鲜冰冻脊柱标本分为定位器组及徒手组,各32个椎弓根进行验证实验.分别在定位器辅助及徒手下穿刺,比较术前与术后的准确率.结果 定位器组穿刺TSA偏差率为(10.83±3.41)%,徒手组穿刺TSA偏差率为(19.08±4.21)%(P＜0.05);定位器组穿刺SSA偏差率为(13.13±4.37)%,徒手组穿刺SSA偏差率为(21.15±6.78)%(P＜0.05).经皮胸腰椎弓根置钉三维定位器偏差率小,可有效辅助完成经皮椎弓根手术操作.结论 经皮胸腰椎弓根置钉三维定位器具有体积小、安装灵活、固定牢固、测量角度准确等优点,可应用于标本研究以观察其辅助穿刺的效果,并进一步运用于临床辅助手术.
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荧光谱客观分析在膀胱癌光动力学诊断中的应用
目的 探讨紫外激光激发膀胱癌组织细胞荧光谱分析对改进膀胱癌光动力学诊断的意义.方法 以不含细胞培养液和血卟啉单甲醚混合液为对照,分别取浓度为0、10、100、200 mg/L的血卟啉单甲醚作为光敏剂,孵育膀胱癌组织细胞株T24 1～3 h,再以全固态紫外激光作为激发光源(波长355 nm)激发,检测膀胱癌组织细胞特征荧光光谱并分析药物峰位置.结果 在可见光区域390～780 nm,不含细胞的培养液和血卟啉单甲醚混合液未出现特征峰;无血卟啉单甲醚光敏剂的膀胱癌组织细胞的自体峰在445～490 nm处;不同时间不同浓度血卟啉单甲醚光敏剂孵育的膀胱癌组织细胞除在445～490 nm处有自体峰外,在628.65 nm处均出现药物峰,200 mg/L血卟啉单甲醚孵育2 h时膀胱癌组织细胞药物峰及自体峰荧光强度达到高,且药物峰的荧光强度超过了自体峰.结论 紫外激光激发的膀胱癌组织细胞荧光谱性质稳定、强度佳,对改进膀胱癌光动力学诊断具有确切价值.
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新型可注射磷酸钙骨水泥在椎体后凸成形术中的生物力学评价
目的 评价一种新型可注射磷酸钙骨水泥(CPC)在椎体后凸成形术中的体外生物力学性能,以探讨该材料能否有效替代聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥(PMMA)应用于经皮椎体后凸成形术.方法 取老年尸体共20个胸腰椎新鲜标本(T11～L3),经双能X线吸收骨密度仪测试骨密度后完全随机分为CPC组和PMMA组.在材料试验机上制成椎体压缩骨折模型并测量两组椎体初始的强度和刚度,然后分别用CPC和PMMA两种材料行椎体后凸成形术,再次测量术后两组椎体的强度和刚度.结果 两种骨水泥都具有良好的可注射性,CPC固化后不放热,PMMA固化有明显放热反应,体外工作时间CPC长于PMMA,X线显影效果CPC优于PMMA.椎体后凸成形术后PMMA组椎体大载荷(4.80±1.957)kN、抗压强度(4.794±1.683)kPa,均较术前明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).刚度高于骨折前,但差异无统计学意义(P＞0.05).CPC组椎体后凸成形术后大载荷(3.412±1.078)kN、抗压强度(3.477±0.689)kPa,稍高于骨折前,差异无统计学意义(P＞0.05).而刚度(918±201)N/mm,低于骨折前,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 新型CPC在椎体后凸成形术中能有效恢复椎体的生物力学性能,可望在椎体后凸成形术中作为PMMA的理想替代材料.
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超声评价胃镜下幽门括约肌切开术治疗先天性肥厚性幽门狭窄术后并发呕吐的价值
目的 探讨超声评价胃镜下幽门括约肌切开术治疗先天性肥厚性幽门狭窄(CHPS)术后并发症呕吐的价值.方法 回顾性分析2006年1月至2009年11月本院胃镜下行幽门括约肌切开术治疗的30例CHPS患儿术后是否出现呕吐咖啡色内容物的并发症及治疗情况和超声检查资料包括幽门管长度和形态结构特征、黏膜层(含黏膜下层)及肌层的厚度、幽门管随胃蠕动波到达时的开放情况.结果 30例中4例患儿术后未出现呕吐并发症(A组);26例术后出现呕吐并发症,其中17例经常规保守治疗后明显好转或消失(B组),9例术后经保守治疗后无效,需再次手术(C组).B、C组共有16例术后呕吐咖啡色内容物,经常规保守治疗后消失.A、B、C 3组患儿超声检测术前后黏膜层厚度差异均无统计学意义;A、C组幽门管长径、B、C组幽门肌厚度术后1周与术前相比差异无统计学意义;A组幽门肌厚度与B组幽门管长径术后1周较术前有所减小[A组:(9.03+2.67)mm比(8.38±2.59)mm,B组:(18.70±3.90)mm比(16.66±3.00)mm,均P＜0.05].A组患儿幽门管开放良好;B组患儿幽门管腔始终未显示明显开放,仅少量液体由黏膜间隙通过;C组患儿幽门排空延迟,偶见缝隙样微开.B、C组16例呕吐咖啡色内容物的患儿中超声仅显示2例幽门管切开部位的黏膜有凹槽,10例无呕吐咖啡色内容物的患儿中也有2例显示切开部位黏膜层有小凹槽.结论 超声可明确CHPS术后呕吐的不同病因并指导进一步治疗,但不能诊断呕吐咖啡色内容物的原因.
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心房肌异质性与心房颤动
心房颤动(atrial fibrillation)(以下简称房颤)是临床上常见的快速心律失常.房颤本身及其引起的并发症,如心力衰竭、血栓栓塞等严重威胁着人类健康,使患者脑卒中发病率和病死率成倍增高,对房颤发生机制的研究已成为当今心血管研究领域的热点.
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胰岛素信号转导通路与骨重建
骨是一持续重建的组织.骨重建主要由破骨细胞和成骨细胞参与,以破骨细胞激活和骨吸收开始,以与之相耦联的成骨细胞激活和骨形成终结,贯穿于整个生命过程的始终[1].破骨细胞和成骨细胞功能受到全身和局部诸多因素调控,除生长激素、雌激素、甲状旁腺激素外,胰岛素信号转导途径相关因子也起着重要作用.本文就胰岛素信号通路对骨重建的作用进行综述.
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Prostasin基因与高血压关系的研究进展
原发性高血压是环境因素与遗传因素相互作用所引起的多基因、多因素疾病.1990年Yang等[1]从分子水平揭示了原发性高血压可能的发病机制,认为人类可能存在多种原发性高血压易感基因,这些基因的突变、缺失、重排和表达水平的差异可能是导致原发性高血压的基础.
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离体兔眼实验的建立及其初步评价
目的 建立离体兔眼实验方法,评价此实验的预测力和可靠性.方法 参照欧洲替代方法验证中心推荐的离体兔眼实验方法并结合具体条件,建立适合本实验室的离体兔眼实验方法.同步采用离体兔眼实验和兔眼刺激实验对26种受试物的眼刺激性进行检测,对2种实验分级结果的一致性和可靠性进行统计分析.结果 离体兔眼实验对26种受试物的眼刺激性分级结果与兔眼刺激实验分级结果具有较高的等级相关性(Spearman R=0.943,P=0.000;Gamma=1.000,P=0.000)及分级一致性(Kappa=0.799,P=0.000),2种实验方法分级结果的差异无统计学意义(McNemar Bowker W=5.00,P＝0.172);3次离体兔眼实验结果重复性良好(F=0.439,P=0.646).结论 本实验室成功建立了离体兔眼实验的实验方法,可以作为兔眼实验的一种替代方法.
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一种新型肠上皮干细胞分离方法的建立
目的 探讨密度梯度离心法作为一种新型肠上皮干细胞分离方法的可行性.方法 通过腹腔注射大剂量5-氟尿嘧啶(5-FU)制备肠黏膜严重损伤小鼠模型,取出损伤的肠黏膜消化成单细胞悬液,利用Percoll密度梯度离心法分离细胞体积大小不同的细胞群.HE染色观察各群细胞形态特征,免疫细胞化学及RT-PCR检测各群细胞musashi-1(msi-1)的表达.结果 分离的大部分细胞位于50%和70%密度梯度的Percoll分离液体层,50%密度梯度分离液体层中的细胞符合干细胞的形态特征,免疫细胞化学检测其msi-1表达阳性率约为93%,RT-PCR显示该群细胞msi-1 mRNA表达较强.结论 建立了一种简便、有效的分离具有活性的肠上皮干细胞的方法.
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靶向髓样细胞表达的激发受体1基因短发夹RNA真核质粒表达载体的构建及筛选
目的 构建编码髓样细胞表达的激发受体1(TREM-1)基因短发夹RNA(shRNA)真核质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果明显的shRNA质粒表达载体.方法 针对TREM-1的靶位点设计含shRNA的靶序列,分别构建pGCsi-TREM-1 shRNA1和pGCsi-TREM-1 shRNA2的质粒表达载体和pGCsi-NegshRNA阴性质粒表达载体,通过酶切及测序进行鉴定.鉴定后以脂质体包裹转染肺泡上皮A549细胞,分为未转染对照组(A组)、转染空质粒载体pGCsi对照组(B组)、转染阴性shRNA质粒表达载体pGCsi-NegshRNA对照组(C组)、转染TREM-1 shRNA1质粒表达载体组(D组)和转染TREM-1shRNA2质粒表达载体组(E组),48 h后观察转染细胞绿色荧光蛋白表达效果.转染24、48、72 h后,以A组为对照采用MTT法测定B、C、D、E组细胞的存活率.转染48 h后,通过荧光定量PCR检测各组TREM-1 mRNA的表达水平并与转染前相比较.结果 经酶切和测序鉴定证实,目的 TREM-1基因shRNA1和shRNA2片段已被克隆到pGCsi载体中.荧光显微镜下,B、C、D、E组A549细胞有明显的绿色荧光蛋白表达.各时间点B、C、D、E组细胞存活率均达90%以上.A、B、C 3组转染前后TREM-1mRNA的表达水平差异无统计学意义,D、E组转染的重组质粒均能有效抑制A549细胞的TREM-1mRNA的表达([(1.945±0.252)×105比(1.010±0.194)×105,(1.933±0.216)×105比(1.202±0.171)×105,均P＜0.05],抑制率分别为48.07%和37.82%.结论 成功构建了靶向TREM-1基因的shRNA质粒表达载体,可有效抑制细胞中TREM-1目的 基因的表达,为后续脓毒症的基因治疗提供了依据.
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基质金属蛋白酶9在大鼠糖尿病肾病发病中的作用
目的 探讨糖尿病肾病大鼠肾局部金属蛋白酶9(MMP-9)在糖尿病肾病发生发展的作用.方法 健康雌性清洁级大鼠,随机分成糖尿病组和正常对照组,采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.分别于4、8周处死,应用免疫组化及酶谱分析方法(zymography)观察各组肾组织MMP9的蛋白表达及其活性水平,分析MMP-9与细胞外基质Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(LN)的相关性.结果 MMP-9在正常对照组肾小球、肾小管细胞均有阳性表达(4周,26.63%+2.94%;8周,29.86%±0.89%);而糖尿病组随病程延长表达明显减弱(4W,16.11%±2.86%;8周,13.14%±2.68%),MMP-9活性也明显降低(正常组4周110.47±7.12;8周,111.50±6.95;糖尿病组4周82.74±10.92;8周,80.05±12.83),两组间各项指标的差异有统计学意义(均P＜0.01).MMP-9活性与Ⅳ型胶原(r=-0.852,-0.795,P＜0.01)、LN(r=-0.897,-0.832,P＜0.01)呈显著负相关.结论 糖尿病肾病时肾组织中MMP-9表达水平降低,糖尿病肾病的发病机制可能与MMP-9水平降低有关.
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超声胆管造影体外实验的初步探讨
目的 利用体外超声胆管造影模型,探讨不同深度下、不同浓度造影剂对造影剂衰减时间的影响及造影剂信号强度对小结石显示的影响.方法 以内径0.5 cm的硅胶管模拟胆总管,在不同深度下(5、10和15 cm)分别用不同浓度(1/200、1/300、1/400、1/600标准浓度)SonoVue造影剂进行管道内造影,观察造影剂信号衰减情况;取内径1.0cm的硅胶管模拟扩张胆总管,以小石粒放入模拟胆总管结石,观察不同直径结石的超声胆管造影表现.结果 常用造影剂标准浓度的1/200,深度为5、10、15cm时,后壁清晰显示时间分别为54、47、20.5 s;出现表面线状高亮回声出现时间分别为615、380、1140s;出现表面线状高回声后,注入生理盐水管腔依然能够显影,持续时间分别为150、260、285 s.当浓度低于标准浓度的1/200时,在3种深度下后壁均能清晰显示,但持续时间降低.在保留有胆汁的胶管里,造影剂注入后,造影剂与胆汁之间有明显的界线;当胆汁浓稠时,造影剂无法通过胆汁.当造影剂浓度为标准浓度的1/400时,内径为0.5～1.0 cm的小结石在造影模式下清晰显示为充盈缺损,后方伴声衰减;当造影剂浓度高于标准浓度的1/400时,结石显示不清楚或被淹没.在直径为0.3 cm或以下的结石,3种浓度的造影剂均不能显示明确的"充盈缺损"征.结论 腔内造影能获得较长的造影持续时间,且可以进行重复造影.1/300标准浓度的造影剂浓度能够获得合适的增强强度,而结石造影则宜选用1/400标准浓度的造影剂.胆汁对造影剂有负面影响,造影前应尽量抽尽胆汁.超声胆管造影不能提高超声对直径小于0.3 cm的结石的发现率.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 05 06 |
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