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猪脱细胞真皮基质对小鼠创面毛囊再生中基质细胞衍生因子-1及Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响

杜烨;冯自波;李恭驰;邹利军;杨鸿;王知;陈江海;潘银根;李炳辉

摘要: 目的 探讨猪脱细胞真皮基质(ADM)对小鼠创面毛囊再生中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响.方法 取新鲜猪皮,经脱细胞处理后制成微粒状,灭菌,密封,常温保存,以备后面实验使用.制作18只C57 BL/6小鼠背部全层皮肤缺损模型,以脊柱为中线,在左右各制作直径为6 mm的缺损,左右侧分别以纱布和猪ADM覆盖,隔天纱布侧换药,猪ADM侧不做处理,于模型建立第7天,按照所用材料不同分为纱布组与猪ADM组,再按所取部位不同分为纱布窗口组、猪ADM窗口组、纱布创面组、猪ADM创面组、纱布创缘组、猪ADM创缘组,其中9只小鼠组织用于蛋白质印迹法检测,另外9只小鼠组织用于免疫组织化学检测.通过蛋白质印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、β-catenin、转化生长因子-β(TGF-β)、Wnt3a、血管内皮生长因子(VEGF)、SDF-1、成纤维细胞生长因子(FGF)2、FGF9、AKT的蛋白表达,免疫组织化学检测Wnt3a、SDF-1、FGF2、FGF9的表达.数据比较采用独立样本t检验.结果 在小鼠模型建立第7天创面中,蛋白质印迹法检测β-catenin、Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM窗口组(0.533±0.058、0.446±0.039、0.972±0.048)高于纱布窗口组(0.401±0.005、0.132±0.022、0.175 ±0.036),差异均有统计学意义(£=3.996、12.230、23.130,P值均小于0.05).β-catenin、Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM创面组(0.557±0.009、0.626±0.066、0.868 ±0.102)高于纱布创面组(0.302 ±0.010、0.109±0.019、0.036±0.009),差异均有统计学意义(t=32.830、13.020、14.130,P值均小于0.05).Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM创缘组(0.419±0.014、0.370±0.069)高于纱布创缘组(0.115±0.020、0.056±0.007),差异均有统计学意义(t=21.460、7.825,P值均小于0.05).免疫组织化学检测结果显示Wnt3a、SDF-1、FGF2、FGF9在猪ADM组中的表达高于纱布组,且阳性细胞主要分布于毛囊细胞周围.结论 猪ADM在小鼠创面中可能通过上调SDF-1及Wnt3a/β-catenin信号通路的表达而促进毛囊的再生.

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  • 异种(猪)脱细胞真皮基质粉对表皮细胞和成纤维细胞的促进作用

    作者:常铭洋;陈志强;柳娟;闫舫;季守平;王韫芳

    目的 观察冷冻研磨获得的脱细胞真皮基质粉(ADMP)生物学性状,探索高纯度且保留生物活性的异种(猪)ADMP对表皮细胞和成纤维细胞生长的支持及在皮肤创伤修复中的应用.方法 选取幼龄长白猪背部皮肤,经生物酶法脱细胞、冷冻干燥后经过不同冷冻研磨程序得到异种(猪)ADMP,再由60钴辐照获得无菌异种(猪)ADMP;通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察异种(猪)ADMP颗粒大小及胶原形态,确定适合应用的研磨程序;通过MTT法检测HaCaT细胞和BJ人皮肤成纤维细胞在不同浓度异种(猪)ADMP包被下的黏附作用,确定异种(猪)ADMP实现细胞大黏附的浓度范围;DMEM培养液基添加异种(猪)ADMP为实验组,单纯DMEM培养液基为对照组,使用实时细胞分析技术分析BJ人皮肤成纤维细胞迁移指数,验证异种(猪)ADMP对成纤维细胞的促迁移作用;原代表皮细胞接种在异种(猪)ADMP培养液8d,绘制增殖曲线,检测异种(猪)ADMP对原代表皮细胞的促增殖作用,同时免疫荧光检测原代表皮细胞表面成熟与分化蛋白的表达.对数据进行Student's t-检验.结果 1、2、3、5、7、10次循环研磨获得异种(猪)ADMP,肉眼可见全部为白色、无块状,其中1、2、3次循环呈较粗颗粒;5、7、10次循环呈现集中均匀趋势,粒径分布在0 ~12 μm之间.其中5次循环粒径(13.00±2.10) μm与7次循环[(6.00±0.96)μm比较,差异有统计学意义(t=6.093,P=0.0002).异种(猪)ADMP透射电子显微镜下发现,不同循环次数获得的异种(猪)ADMP均能保留大量胶原分子.BJ人成纤维细胞和HaCaT细胞随包被浓度的增加,细胞黏附作用不断增强,浓度高于750 μg/cm2,无明显变化.实时细胞分析技术检测BJ人皮肤成纤维细胞在DMEM培养液基对照组培养液72 h后的迁移指数为1.21 ±0.10,而异种(猪)ADMP培养液基试验组的迁移指数为3.66 ±0.11,两组比较差异有统计学意义(t=22.24,P=0.002).在异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞形态统一增殖迅速,对照组出现一定比例的分化细胞,试验组与对照组第5天细胞数分别为(4.11±0.28)×105、(1.10±0.12)×105个,两组比较差异有统计学意义(t=13.51,P=0.005);第8天细胞数分别为(5.00±0.48) ×105、(3.05 ±0.30)×105个,两组比较差异有统计学意义(t=4.87,P=0.039),增殖曲线显示试验组在接种即日培养液至第5天,一直处于指数增长期.荧光染色中异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞E-cad全部表达,少量表达角蛋白10,整合素α6几乎全部强阳性,角蛋白14全部表达并有部分强阳性,Ki-67抗原表达率高.结论 通过生物酶解和冷冻研磨获得的异种(猪)ADMP对参与皮肤创伤修复重要的表皮细胞和成纤维细胞,具有促进其增殖和迁移的作用,未来可进一步应用于皮肤创伤修复.

  • 豫南地区49例新生儿烧伤流行病学特点及防治分析

    作者:肖荣;赵海春;胡东升;袁仕安;林国安

    目的 探讨豫南地区新生儿烧伤的流行病学特点及防治策略.方法 回顾性分析解放军第一五九医院全军烧伤中心1967年2月至2018年5月收治的49例新生儿烧伤病例资料,年龄0~28 d,平均年龄(3.57 ±7.35)d,男28例,女21例.烧伤总面积1% ~ 46%总体表面积(TBSA),平均(8.66±7.29)%TBSA,浅Ⅱ度(4.23±3.79)%TBSA,深Ⅱ度(7.29 ±6.71)%TBSA,Ⅲ度(5.73 ±5.05)% TBSA.受伤至入院平均时间(2.79±4.40)d.入院时伴中度以上休克者4例,吸入性损伤6例,合并新生儿窒息7例,新生儿硬肿2例,脑积水1例.将所有病例按入院时间不同分为20世纪60 ~70年代、20世纪80~ 90年代和2000年至今3组,比较分析其烧伤原因、烧伤部位、烧伤面积、手术次数、住院时间、并发症及预后情况.对数据行单因素方差分析x2检验及Fisher确切概率法检验.结果 热液烫伤占全部病例总数的57.14%,火焰烧伤占26.53%,新生儿恒温箱致烧伤占6.12%.各年代间比较,热液烫伤逐渐增多,火焰烧伤逐渐减少(P值均小于0.05).医源性因素所占比例逐年上升(P值均小于0.05).新生儿烧伤以头面颈、躯干及肢体部位受伤居多,臀部、会阴、消化道及吸入性损伤较少见,各年代间差异均无统计学意义(P值均大于0.05).各年代新生儿烧伤面积及不同烧伤程度烧伤面积差异均无统计学意义(P值均大于0.05),手术次数相当,但住院时间逐渐缩短(P<0.05).新生儿并发症仍以低白蛋白血症、电解质紊乱及腹泻居多.创面脓毒症、败血症及死亡病例现阶段明显减少(P值均小于0.05).总治愈率为91.84%.结论 提高全民烧伤防范意识及早期处理水平,规范新生儿护理流程,减少医源性烧伤,防患于未然,是解决新生儿烧伤的根本措施;液体复苏过程中重视血流动力学指标的监测,多学科联合救治,负压创面治疗技术及MEEK植皮等新技术的应用是严重烧伤新生儿救治的关键措施.

  • 褪黑素对烟雾吸入所致大鼠急性肺损伤的保护作用

    作者:刘磊;张建明;刘群;冯世海;赵永健;施耘

    目的 通过建立褪黑素干预大鼠烟雾吸入性损伤模型,探讨褪黑素对急性肺损伤的保护作用.方法 成年清洁级雄性SD大鼠72只随机分为空白组、损伤组和褪黑素组.空白组不做任何处理,损伤组于吸入性损伤处理后腹腔注射1%乙醇生理盐水(10 ml/kg),褪黑素组于吸入性损伤处理后腹腔注射褪黑素(10 mg/kg,1次/8 h).三组大鼠分别在3 h、12 h、24 h三个时相腹主动脉取血2 ml后处死,动脉血离心后检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量和白细胞介素10(IL-10).肺组织匀浆测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量.取右下肺组织作病理切片,光镜下观察肺组织病理情况.结果 光镜下见空白组大鼠肺泡腔结构完整,壁光滑;损伤组肺泡壁增厚,肺间质炎症细胞浸润;褪黑素组肺组织较损伤组病理表现有所减轻.褪黑素组各时相点血清TNF-α和IL-6含量高于空白组(P<0.05),低于损伤组(P<0.05).损伤组各时相点IL-10含量与空白组相比无统计学差异(P>0.05),而褪黑素组IL-10含量与空白组、损伤组相比均升高(P<0.05).褪黑素组各时相点肺组织SOD含量均高于损伤组(P<0.05),低于空白组(P<0.05).褪黑素组各时相肺组织MDA和MPO含量均高于空白组(P<0.05),低于损伤组(P<0.05).结论 褪黑素可以减轻炎症及氧化应激,对烟雾吸入性损伤所致急性肺损伤发挥一定的保护作用.

  • 横向跨区头皮瓣修复头部严重电烧伤

    作者:汪虹;王君;魏迪南;曾明;曹文德

    目的 运用跨区供血形成反流轴型皮瓣的研究理论,设计横向跨区头皮瓣修复头部严重电烧伤.方法 对16例头部严重电烧伤颅骨大范围外露创面的患者,将一侧颞浅动脉为蒂通过吻合支向对侧颞浅动脉或耳后动脉反流供血,以此走行的血管为轴线,采用扩张和不扩张两种方式形成横向跨区头皮瓣,修复外露创面.结果 16例患者中,2例置入扩张器术后伤口感染,造成扩张囊外露1 cm×2 cm~2 cm×3 cm,住院时间延长,对手术效果有一定影响,但所有皮瓣形成转移后均全部成活,创面完全修复.结论 横向跨区头皮瓣及其扩张后转移,应用于头部严重电烧伤修复能够取得良好的效果,丰富了跨区供血皮瓣的应用方式和应用范围.

  • 外固定支架联合负压封闭引流及皮瓣移植治疗Gustilo ⅢA型胫腓骨骨折

    作者:康靖东;陈娟;徐伟军

    目的 探讨外固定支架联合负压封闭引流及皮瓣移植治疗GustiloⅢA型胫骨骨折患者的疗效.方法 回顾分析2008年10月至2014年10月在中国核工业北京四○一医院治疗的40例GustiloⅢA型胫腓骨骨折患者资料,采用负压封闭引流治疗的20例患者设为试验组,采用一期皮瓣修复的20例患者设为对照组.所有患者入院后均急诊采用清创、外固定支架固定的常规方法进行治疗,试验组清创支架外固定术后行负压封闭引流,二期皮瓣修复创面;对照组术后行一期皮瓣修复、打包加压以及加强换药治疗,记录并比较两组患者创面愈合时间、术后再次手术率、骨折平均愈合时间以及术后半年踝关节功能评分.指标数据采用SPSS 17.0统计软件分析,计量资料组间比较采用t检验,计数资料采用,检验.结果 试验组患者的创面愈合时间(15.3±5.7)d与对照组(24.6±5.9)d比较,差异有统计学意义(t=2.326,P=0.021);术后试验组患者未行再次手术,对照组再次手术3例(15.0%),两组术后再次手术率比较,差异有统计学意义(x2=18.039,P=0.001);试验组与对照组患者骨折平均愈合时间分别为(6.7±1.4)个月、(6.8±1.9)个月,比较差异无统计学意义(t=1.322,P=0.193);试验组与对照组术后半年Mazur踝关节功能评分优良分别为15例(75%)、14例(70%),比较差异无统计学意义(x2=1.983,P=0.159).结论 在严格清创后,应用外固定支架联合负压封闭引流及二期皮瓣移植治疗伴有皮肤软组织缺损的GustiloⅢA型胫腓骨骨折,手术操作简单,再次手术率较低,骨折愈合及患肢关节功能恢复好,疗效满意,值得在基层医院推广和应用.

  • 外用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶治疗深Ⅱ度烧伤创面临床疗效观察

    作者:温春泉;赵筱卓;张国安

    目的:观察外用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶对深Ⅱ度烧伤创面的治疗效果。方法选择2013年12月至2014年11月北京大学第四临床医学院收治的深Ⅱ度烧伤患者50例,烧伤面积为10%~30%总体表面积( TBSA)。采用随机数字表法,将患者分为试验组和对照组,每组各25例。对照组创面行常规清创后应用莫匹罗星软膏涂抹并包扎;试验组创面在常规清创基础上局部外用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶及莫匹罗星软膏后包扎,分别比较两组患者的创面愈合时间,治疗7、14、21、28 d时的创面愈合率,观察两组患者的生命体征和不良反应发生情况。采用χ2检验、t检验对两组患者资料数据进行比较、分析。结果试验组创面愈合时间(19.6±2.5)d低于对照组(27.3±3.4)d,差异有统计学意义(t=26.407,P<0.05),伤后7、14、21、28 d试验组创面愈合率分别为(29.8±4.6)%、(74.0±7.1)%、(98.2±2.6)%、(100.0±0.0)%,明显高于对照组(20.6±4.5)%、(52.0±8.2)%、(79.6±5.0)%、(97.3±2.6)%,差异均有统计学意义(t=-7.090、-10.050、-16.289、-4.993,P值均小于0.05)。且用药后两组患者生命体征、血常规、尿常规及肝、肾功能均正常,无不良反应发生。结论应用外用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶可加速深Ⅱ度烧伤创面愈合。

  • 烧伤患者毛霉菌侵袭性感染(附4例报告)并文献复习

    作者:李峰;杨红明;王宏伟

    目的 探讨烧伤患者毛霉菌侵袭性感染的临床表现、诊断和治疗方法.方法 分析我科多年来收治的4例毛霉菌感染病例.本组4例均为男性,烧伤面积70%~94%,分别于伤后18~31 d发生毛霉菌感染,4例均采用组织病理切片,2例同时有创面培养毛霉菌感染确诊.确诊后予彻底清创或截肢,并调整抗真菌药物.结果 本组4例均于病程中后期出现毛霉菌感染,均有成片肌肉受累,在清创(其中截肢3例)、抗真菌治疗后,4例均于短期内死亡.结论 烧伤创面发生毛霉菌侵袭性感染十分少见,病情进展快,预后差;尽早手术切痂植皮、封闭创面,去除毛霉菌定植的土壤;对可疑病例应及时确诊,立即手术彻底清创或截肢、使用两性霉素B或其脂质体有助于改善预后.

    关键词: 毛霉菌病 烧伤
  • 两种气道湿化和吸氧方法的临床应用与效果比较

    作者:肖榕婵;沈锐;黄守春;伍景红;李丽红;武小红;冯祥生

    目的 探讨烧伤合并吸入性损伤患者气管切开术后,应用改进后气管套管内持续湿化和吸氧方法的效果和意义.方法 对2003年1月至2009年5月中山大学附属佛山市第一人民医院烧伤整形科收治的烧伤合并吸入性损伤并气管切开患者64例,随机分为两组即改良治疗组和传统治疗组,各组32例,两组患者年龄、烧伤面积和吸入性损伤的情况相当,具有可比性.两组分别采用改进后持续湿化和吸氧方法及传统的持续湿化和吸氧方法,并对两种气管套管内持续湿化和吸氧方法所产生的结果,如痰痂形成侧数、气管出血例数、肺部感染发生侧数等指标进行观察、对比、分析.结果 改良治疗组32例患者无一例有气管痰痂形成,有1例气道出血,31例患者SpO2,>95%,1例肺部感染;而传统治疗组32例患者有痰痂形成者5侧,7侧气道出血,23侧患者SpO2,>95%,5例肺部感染;两组比较差异有统计学意义(P<0.05).另外改良治疗组治疗过程中1例患者死亡,传统治疗组有2例患者死亡,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 应用改进后微量输液泵气管套管内持续湿化和吸氧同一通道方法,能够较好地提高气道湿化效果,有利于痰液及时排出;能够明显改善肺的顺应性,改善通气,明显降低肺部感染发生率;同时该方法方便护士进行吸痰操作,减少护理工作;其整体效果明显优于常用微量输液泵气管套管内持续湿化和吸氧两条通道的方法,值得临床推广应用.

  • 外伤后下唇缺损的修复方法

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