中华医学杂志
National Medical Journal of China 중화의학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 1.47
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0376-2491
- 国内刊号： 11-2137/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人黑皮素4受体F261S突变基因的克隆和功能验证
目的研究黑皮素4受体(MC4R)基因的新突变F261S是否造成了MC4R蛋白功能改变.方法用携带F261S纯合突变的先证者及正常人的基因组DNA,PCR扩增突变型及野生型MC4R基因全长,克隆到topo-TA真核表达质粒载体,测序鉴定后转染人胚肾293细胞.用浓度为1×10-11～1×10-5 mmol/L的α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)与表达的MC4R蛋白结合后,用双荧光素酶报告基因测试系统检测胞内cAMP,萤火虫荧光/海洋腔肠荧光二者强度之比体现了cAMP浓度.结果α-MSH浓度在1×10-9～1×10-8 mmol/L时野生型胞内双荧光强度比值显著高于突变型细胞(P<0.05),在1×10-7～1×10-5 mmol/L时差异更为显著(P<0.01).结论 F261S突变使MC4R介导的信号转导能力下降,此突变与中国人早发性肥胖有关.
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瘦素及胰岛素对人类肝细胞癌细胞系细胞瘦素受体mRNA表达的作用
目的研究瘦素及胰岛素对瘦素受体(OB-R)的调节作用.方法以人类肝细胞癌细胞系(HepG2)为实验摸型,采用6孔板培养皿培养HepG2细胞,4个孔作为一个浓度组,通过DNA序列测定及半定量的逆转录-聚合酶链反应等方法,分别观察了0、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L 浓度的人类瘦素及胰岛素对HepG2细胞内瘦素受体mRNA表达水平的影响.结果通过RT-PCR及DNA序列测定,我们证明了HepG2细胞含有瘦素长型受体(Ob-Rb)及短型受体(OB-Ra:OB-R219.3);通过半定量RT-PCR,我们检测了Ob-Rb 和OB-R219.3的mRNA表达水平.当HepG2细胞与不同浓度的瘦素孵育24 h后,10-7～10-6 mol/L浓度的瘦素明显抑制了OB-Rb的mRNA表达,并在10-6 mol/L浓度时达到大抑制为43%;同样10-8～10-6mol/L浓度的瘦素亦明显抑制了OB-R219.3的mRNA表达,并在10-6 mol/L浓度时达到大抑制为49%.当HepG2细胞与不同浓度的胰岛素孵育24 h后, OB-Rb及OB-R219.3的mRNA表达水平无改变.结论在HepG2细胞内瘦素对OB-Rb及OB-R219.3的mRNA表达有下调作用,而胰岛素对OB-Rb及OB-R219.3的mRNA表达无调节作用,这对与我们了解瘦素抵抗及瘦素的外周功能具有重要意义.
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RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α治疗骨肉瘤的实验研究
目的观察靶向缺氧诱导因子(HIF)-1α的短发夹状小干扰RNA基因转染对骨肉瘤生长的影响.方法针对HIF-1α构建短发夹状siRNA真核表达载体(pSilencer)-HIF并转染骨肉瘤细胞系(SaOS)-2 .骨肉瘤细胞置于缺氧诱导培养基中培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹沉淀观察HIF-1α的基因沉默效果.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析检测细胞体外增殖活力,透射电镜,原位末端标记TUNEL法,Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡.同时,通过裸鼠移植瘤模型观察HIF-1α基因沉默后对骨肉瘤体内治疗效果.结果测序证实成功构建HIF-1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer-HIF,转染骨肉瘤细胞后,HIF-1α基因表达显著抑制(90%).与对照组比较,pSilencer-HIF转染组骨肉瘤细胞缺氧状态下的增殖活性显著降低.缺氧培养72 h后,透射电镜、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,Annexin V/PI双标检测转染组细胞凋亡率为18.71%±0.98%,明显高于pSilencer-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01).裸鼠移植瘤实验显示pSilencer-HIF转染组肿瘤生长减慢,成瘤率下降,肿瘤组织中可见大量坏死组织.结论靶向HIF-1α基因的短发夹状siRNA可以有效阻断骨肉瘤缺氧耐受转导通路,抑制骨肉瘤细胞的生长.
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采用单引物扩增法标记的基因芯片技术筛选乳腺原发癌与淋巴结转移癌的差异表达基因
目的比较乳腺原发癌与淋巴结转移癌的基因表达差异,筛选乳腺癌转移相关基因.方法采用单引物扩增(SPA)标记方法和含21 000个人功能基因的Oligo芯片,比较10例淋巴结转移阳性乳腺癌患者的原发癌及淋巴结转移癌的基因表达差异,筛选至少5对样本中有1.5倍以上相同差异表达趋势的基因;采用实时定量RT-PCR方法对差异表达基因进行病例验证.结果 SPA方法标记靶标可使用于一张芯片杂交的起始总RNA模板量减少至0.25 μg;共筛选出57个基因在至少5对样本中有1.5倍以上相同的差异表达趋势,其中19个基因在转移癌中表达上调,38个基因下调,8个差异表达基因与细胞黏附和运动能力有关,14个与信号传导有关,14个与细胞生长代谢有关;实时定量RT-PCR检测30例乳腺癌原发癌与配对的淋巴结转移癌中纤维粘连蛋白(FN)的mRNA表达,转移癌中FN的mRNA表达平均相对表达量较原发癌下调3.6倍,配对t检验差异有统计学意义(t=-3.188,P=0.003).结论 (1)单引物扩增标记靶标的方法灵敏度高、重复性好.(2)以乳腺癌的淋巴结转移癌作为原发癌的转移亚克隆进行基因表达的差异比较,筛选得到的基因涉及了细胞黏附和运动能力、细胞信号传导、细胞生长代谢等与转移相关的生物学过程.(3)FN可能参与乳腺癌的转移过程,是潜在的预测乳腺癌转移和预后的分子标志.
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新型Tet-On反式激活因子对GDNF基因腺相关病毒载体表达调控的研究
目的通过在胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因腺相关病毒(AAV)表达载体中插入改良的Tet-On调控因子,达到有目的调节GDNF的表达,避免基因过度表达或重组可能对宿主产生的危害.方法首先在pAAV-GDNFflag前病毒质粒的hHG部分插入寡核苷酸序列,通过含相应酶切位点的引物,聚合酶链反应(PCR)扩增反式激活因子rtTA2s-S2和四环素反应元件(TRE),并插入寡核苷酸序列,构建pAAV-rtTA2s-S2-TRE-GDNFflag.与辅助质粒共转染HEK293细胞完成重组腺相关病毒(rAAV)载体的包装,氯化铯梯度超速离心分离病毒裂解液,半透膜提纯病毒载体,实时定量PCR(RQ-PCR)检测病毒效价.rAAV感染HEK293细胞,荧光显色和Western印迹法检测rtTA2s-S2的体外调控;rAAV感染Wistar小鼠腓肠肌,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测GDNF基因表达的体内调控.结果体外实验强力霉素阳性组Western印迹可见明显GDNF条带,阴性组未见;体内实验强力霉素阳性组GDNF在2周内表达(32.6 pg/ml±2.6 pg/ml),高于强力霉素阴性组(10.1 pg/ml±2.4 pg/ml),差异有统计学意义.结论 Tet-On反式激活因子rtTA2s-S2、TRE和GDNF基因可构建在同一AAV载体,通过调节诱导剂强力霉素的浓度,rtTA2s-S2在体内和体外均能有效调控下游目的基因GDNF的表达.
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螺杆菌感染与原发性肝癌的相关性研究
目的探讨螺杆菌感染与人类原发性肝癌(PLC)的相关性.方法选取21例PLC患者的肝癌组织为研究对象(实验组),12例非肝癌手术患者的肝组织作对照组.参照文献设计螺杆菌属细菌16SrRNA基因特异性引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增,扩增产物经Southern杂交证实,并将PCR产物进行测序及同源性比较.同时,将两组标本制成病理切片用于螺杆菌属的cDNA-mRNA原位杂交实验.通过定性和定位测定评价肝组织螺杆菌感染与PLC的相关性.结果实验组62%(13/21)的肝癌组织中检出螺杆菌属16SrRNA存在,而对照组无阳性检出(P<0.01).所有PCR产物经Southern杂交得到证实.利用原位杂交技术检测实验组和对照组标本螺杆菌属16SrRNA-mRNA,实验组有13例阳性,对照组均为阴性(P<0.01).比较显示,肝癌组织中的螺杆菌属16SrRNA序列与幽门螺杆菌的16SrRNA序列有97.80%的同源性.结论 PLC患者肝组织中可能存在螺杆菌属感染且感染率较高,提示螺杆菌感染与PLC的发生可能存在某种相关性.
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宫颈癌癌前病变中人乳头状瘤病毒16整合状态的检测
目的探讨宫颈癌癌前病变中人乳头状瘤病毒(HPV)16 DNA整合入宿主基因组的发生情况.方法选取108例细胞学为宫颈癌癌前病变的患者,应用多重聚合酶链反应(PCR)同时检测液基细胞标本中的HPV16 L1、E2和E6基因.采用通用引物GP5+/GP6+扩增HPV L1基因保守区的一个长150 bp的片断,以检测HPV的存在.E2 PCR引物目标是HPV整合时常缺失的E2开放阅读框(ORF)的特殊区域,E6引物目标是E6 ORF.在游离型中,E2、E6拷贝数比例相等;在整合型中,E2缺失;在游离、整合的混合型中,E2的拷贝数少于E6.对E2、E6的PCR产物凝胶电泳条带的面积灰度值进行半定量分析,从而确定HPV16的整合状态.结果 HPV感染者62例(57.41%);HPV16感染者32例(29.63%),其中15例(46.88%)为纯游离型;13例(40.62%)为混合型;4例(12.50%)为纯整合型.HPV16 DNA整合和/或混合型的比例随宫颈病变级别升高而增加,不同病变之间差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPV16整合入宿主基因组在部分宫颈上皮内瘤变中即已发生.多重PCR同时检测HPV L1、HPV16 E2、E6基因以及E2/E6比值,是一种在宫颈细胞学标本中同时检测HPV感染、HPV16感染和HPV16整合状态的简便方法.它可以作为细胞学筛查的一种补充手段,以发现向宫颈高度鳞状上皮内病变、宫颈癌发展的高危患者.
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血管紧张素Ⅱ和醛固酮对肝星状细胞核因子κB信号转导通路的影响
目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮对肝星状细胞(HSC) 核因子κB信号转导通路的影响.方法体内研究部分: Wistar大鼠60只,分为4组,每组15只鼠.模型组:40% CCl4 油0.25 ml/100 mg皮下注射,每周2次;培哚普利治疗组:40% CCl4 油0.25 ml/100 mg皮下注射,每周2次;培哚普利2 mg/kg灌胃,每日1次.氯沙坦治疗组:40% CCl4 油0.25 ml/100 mg皮下注射,每周2次;氯沙坦10 mg/kg灌胃,每日1次.对照组:橄榄油皮下注射.于第4、6周取材.Masson三色染色检测胶原,进行纤维化分级.电泳迁移率变更分析(EMSA)检测肝组织核因子κB的DNA结合活性.Western印迹检测抑制性核因子κBα(IκBα)的表达.体外研究部分:采用HSC-T6 细胞株,分别予AngⅡ1 μmol/L和醛固酮1 μmol/L处理0.5、1、2、4 h,观察对核因子κB DNA结合活性的影响.另外,观察AT-1受体阻断剂irbesartan、细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂U0126、抗氧化剂-乙酰半胱氨酸(NAC)、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和肿瘤坏死因子α(TNFα)对核因子κB DNA结合活性的影响.Western印迹检测IκBα的表达;免疫组织化学检测核因子κB表达的核转移;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNFα mRNA的表达.结果培哚普利和氯沙坦对实验性肝纤维化具有抑制作用;培哚普利和氯沙坦可抑制肝组织核因子κB活性.AngⅡ和醛固酮可激活HSC 核因子κB活性,irbesartan、ACEI 和NAC可抑制核因子κB活性,U0126不能抑制其活性.AngⅡ和醛固酮可促进核因子κB调控转录基因TNFα mRNA的表达,irbesartan、ACEI 和NAC则抑制其表达.结论肝脏肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)促肝纤维化作用与核因子κB的激活有关.AngⅡ和醛固酮对核因子κB的激活作用不依赖ERK通路,而与IκBα的磷酸化和降解有关.
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乳腺癌组织中多形上皮黏蛋白1表达与肿瘤侵袭力的研究
目的探讨多形上皮黏蛋白1(mucin1)表达异常与乳腺癌细胞侵袭力的关系.方法应用免疫组织化学方法检测97例乳腺肿瘤组织中mucin1的表达.乳腺癌细胞株MCF-7转染反义寡核苷酸(ASODN)后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mucin1 mRNA,应用流式细胞术检测mucin1表达阳性率,细胞侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 mucin1在癌旁正常乳腺组织和乳腺良性肿瘤组织中均为细胞顶膜阳性表达,而在早期乳腺癌(30例)、乳腺浸润性癌(18例)、乳腺癌淋巴结转移灶(17例)中为整个细胞膜阳性表达.与乳腺原位癌相比,微小浸润癌的mucin1表达强度升高(P=0.04),而乳腺浸润性癌与乳腺癌淋巴结转移灶之间mucin1表达强度差异无统计学意义(P=0.56).转染ASODN的乳腺癌细胞株,其mucin1 mRNA 和mucin1蛋白表达率显著下降(P<0.05),细胞侵袭实验中,侵袭细胞数明显减少(P<0.05),正义组实验细胞无类似改变.结论乳腺癌细胞mucin1在细胞膜的异常分布及表达升高可促使癌细胞间相互排斥而易于向周围侵袭生长,但该异常表达可能与其淋巴道转移关系不大.针对mucin1 mRNA的ASODN 可抑制乳腺癌细胞的侵袭能力.
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利妥昔单抗治疗难治性特发性血小板减少性紫癜一例
患者女,41岁,因反复皮肤出血4年,加重10个月于2003年12月30日查血小板15×109/L,住我院.患者1999年5月因皮肤出血点,查血常规示血小板 15×109/L,白细胞、血红蛋白正常;骨穿诊为特发性血小板减少性紫癜(ITP).
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心房颤动非药物治疗的若干问题
心房颤动(房颤)在所有持续性心律失常中为常见,总人群发病率为0.15%～1.0%,其中年龄超过60岁的占8%～17%,79%的患者伴有二尖瓣病变.
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肝素治疗重度妊娠期肝内胆汁淤积症疗效观察
我们以往的工作显示,肝素钠治疗妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)疗效显著[1] .在此基础上我们继续探索肝素对未足月妊娠(<36周)重度ICP患者的治疗效果,探索佳的有效剂量及配伍方案,为避免重度ICP患者发生早产或死胎提供临床经验.
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氟伐他汀与氯沙坦合用防治大鼠心肌梗死左室重塑的对比研究
本研究观察他汀类药物氟伐他汀和血管紧张素Ⅱ受体(Ⅰ型)拮抗剂(ARB)氯沙坦合用防治大鼠急性心肌梗死(AMI)左室重塑的作用,并与单用对比.
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转化生长因子β1对原发和复发性卵巢癌细胞生物学行为的影响
转化生长因子β1(TGF-β1 )具有调节细胞的生长、分化和免疫功能的作用,可通过血管生成和免疫抑制活性而促进肿瘤生成.并且对细胞外基质(ECM)的合成具有明显的促进作用,通过诱导ECM沉积和减少降解的能力促进肿瘤的转移和随后的生长.本研究通过体外实验详细探讨了TGF-β1对原发和复发的卵巢癌细胞生长、黏附、侵袭和转移行为的影响,旨在探讨卵巢癌复发的细胞生物学机制和相关因素.
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药物过敏致唾液腺泪腺病变25例临床分析
我们在重症角结膜干燥症治疗的临床实践中发现,大量重症角结膜干燥症的患者由药物过敏引起.在本课题组经治的53例重症角结膜干燥症中,有25例由药物过敏引起.这类患者具有典型特点.现将我们的诊治经验总结如下.
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卡维地洛对心肌梗死后大鼠心肌IL-1β表达及胶原沉积的影响
细胞因子(cytokines)在心肌梗死后心室重塑中起着重要的作用.实验发现白细胞介素-1β(interleukine-1β, IL-1β)可抑制心脏纤维母细胞胶原合成,增加基质金属蛋白酶(metalloproteinase, MMP)活性,通过促进间质胶原重塑导致心室扩张和心力衰竭[1].本研究观察了卡维地洛是否可通过对IL-1β及胶原沉积的影响干预心室重塑进程,以阐明卡维地洛有益作用的更多机制.
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抑癌基因联合传统化疗治疗局部晚期乳腺癌
第27届乳腺癌专题研讨会于2004年12月在美国圣安东尼奥召开.会上,美国得克萨斯大学安德森癌症中心乳房肿瘤外科的Massimo Cristofanilli 医生报道,局部应用Advexin,同时加上两种化疗药物(阿霉素、紫杉萜),二者联合治疗局部晚期乳腺癌疗效显著.
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肺上皮样血管内皮细胞瘤
患者男,27岁,反复咳嗽、痰血10个月.经外院抗炎治疗无效,实验室检查:血常规正常,痰结核菌及脱落细胞均为阴性.因肺泡灌洗液中见真菌,菌丝,故予以抗真菌及止血治疗,临床症状无明显改善.
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产科臂丛神经损伤的防治(Ⅲ)
段涛教授:保守治疗的措施有哪些?理疗有作用吗?有没有什么效果特别好的药物可以用来治疗臂丛神经损伤?
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医学伦理学:医学研究中不可回避的问题
中华医学会杂志社通知各中华系列杂志编辑部在2005年的投稿须知中增加有关医学研究伦理方面的要求,其主要内容为:"当报道以人为研究对象的试验时,作者应该说明其遵循的程序是否符合负责人体试验的委员会(单位性的、地区性的或国家性的)所制定的伦理学标准并得到该委员会的批准,是否取得受试对象的知情同意".这是一个非常重要的事件,是一个非常重要的信号,预示着我国医学研究,尤其是以人为主要研究对象的公共卫生研究、临床研究、基础医学研究和药学研究等在伦理方面迈出了重要的一步.
