人内皮细胞一氧化氮合酶红色荧光蛋白报告基因载体的构建与表达

目的研究血管壁切应力诱导的人血管内皮细胞内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的调控机制,构建在哺乳动物细胞中表达的eNOS红色荧光蛋白报告基因载体. 方法从人脐静脉内皮细胞基因组DNA中克隆eNOS启动子,将其构建到红色荧光蛋白载体pDsRed1-1上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后将重组载体转染293细胞,在荧光显微镜下观察其在细胞内的表达和分布情况.结果 PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDseNOSRed的构建正确,该载体能在293细胞中高效表达.由eNOS启动子驱动表达的红色荧光蛋白大部分均匀分布于整个细胞中, 转染后12 h 开始出现,36～48 h为表达高峰,120 h后红色荧光几乎全部消失.结论成功构建了eNOS红色荧光蛋白报告基因载体,该载体能在哺乳动物细胞中高效表达,为研究血管壁切应力诱导血管内皮细胞eNOS基因表达的调控机制提供了一个重要而又方便的工具.

皮肤成纤维细胞构建组织工程化肌腱的初步研究

目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞的组织工程化肌腱体内形成. 方法取猪自体皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增,与可吸收生物材料聚羟基乙酸形成细胞-生物材料复合物,将该复合物植入手术缺损的右侧趾浅屈肌腱处,6周取材,对标本进行大体、组织学、电镜检查及生物力学评价. 结果新生组织在大体形态、细胞与胶原排列方式上与正常肌腱相似.新生组织的大张力和大应力分别为173.0±18.2与18.9±1.9 N/mm2,分别达到左侧同一部位正常肌腱的57.4%与51.9%. 结论应用组织工程技术以成纤维细胞作为种子细胞可在动物体内形成肌腱样新生组织并能修复肌腱缺损.

大脑半球切除术后远期体感诱发电位成分中N18神经发生源的相关研究

目的探讨人类体感诱发电位(SEP)中N18的确切神经发生源.方法分别对20例大脑半球切除术后远期的病例和12例正常人进行正中神经(MN)刺激的SEP.在SEP中,采用头参考点与非头参考点记录的方法.同时,所有病例进行MRI检查.结果所有20例大脑半球切除术后远期的病例,皮质下至脑干中段发生广泛萎缩.手术侧未引出N20,但P14的波峰潜伏期(LP)为12.5 ms±0.8 ms,而N18的LP为17.6 ms±1.6 ms,均在正常范围.结论 N18的确切神经发生源应在延髓节段.

支气管镜刷取细胞染色体异倍性的研究

目的探讨间期核荧光原位杂交(FISH)检测支气管镜刷取细胞染色体异倍体和将其应用于肺癌早期诊断的可行性.方法选取7、8、9和12号染色体特异着丝粒探针,用FISH技术检测14例肺癌患者支气管镜刷取细胞中上述染色体异倍体.结果在细胞诊断为癌或可疑癌细胞的7例中均发现染色体异倍体,主要特征为7、8和12号染色体增多及9号染色体丢失;而在细胞学未发现恶性证据的7例中,有3例存在7、8和9号染色体异倍体.结论间期核FISH可以检测出支气管刷取细胞中染色体异倍体,在传统细胞学诊断标准下不能定为恶性的细胞中发现染色体异倍体,可将这种方法用于肺癌的早期诊断.

正常偏高血压对心脑血管病发病危险的影响

目的探讨不同性别正常偏高血压对心血管病发病的危险.方法采用11省市队列人群(35～64岁)共27 739人,于1992年进行基线危险因素调查的资料.计算队列人群不同血压范围构成比、危险因素分布,以及在观察终点心脑血管病事件的人年标化发生率,用Cox回归模型对不同血压范围心脑血管病发病率的危险进行预测.结果 (1) 队列人群具有正常偏高血压者为13.4%(男性14.8%,女性11.8%);(2)具有正常偏高血压者多种危险因素显著高于具有理想血压者;(3) 具有正常偏高血压者心脑血管病人年标化发病率显著高于具有理想血压者;(4) 正常偏高血压者的心脑血管病发病危险为2.876 5(95%可信区间2.050 6～4.035 1,P<0.01),男性为3.234 6(95%可信区间,2.113 1～4.951 2,P<0.01),女性为2.335 0(95%可信区间1.318 3～4.135 9,P<0.01).结论具有正常偏高血压者的心血管病危险比具有理想血压者显著高,降低正常偏高血压以减少心血管病危险的必要性有待研究.

病灶切除植骨与椎弓根固定治疗脊柱结核

目的观察病灶切除植骨、经椎弓根内固定术治疗脊柱结核的临床疗效.方法 1996年10月至1998年11月,我院有34例胸腰椎结核患者接受椎弓根器械固定、一期或二期病灶切除植骨手术,术后随访3～5年.结果患者术后1周左右腰背部疼痛和结核中毒症状缓解,术后约4～6周时红细胞沉降率恢复正常,术后4～6个月椎间植骨全部融合,脊柱结核全部治愈.有12例患者术前脊柱后凸角度平均24度(10～32度),术后平均9度(5～13度).有9例患者术前合并脊髓功能损害(Frankel分级为C～D级),术后1年内脊髓功能恢复正常.结论病灶切除植骨经椎弓根内固定治疗脊柱结核,术后能立即恢复脊柱稳定性,免除了患者长期卧床之苦.此外,经椎弓根内固定还能够促进病灶愈合和缩短术后抗结核疗程.

皮下移植心钠素基因表达细胞胶囊对高血压大鼠的降血压效应

目的研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响. 方法借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分别导入SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中,制备可从孔中排出心钠素多肽的微孔胶囊,并将表达和不表达人心钠素的新生鼠皮肤成纤维细胞分别装入不同的胶囊中,封闭后分别植于实验组和对照组幼龄SHR(各10只)的皮下.移植后每周测定大鼠血浆心钠素水平、血压、尿量、尿液钾、钠浓度和体重,连续7周. 结果在逆转录病毒载体的介导下,人心钠素基因既可在逆转录病毒载体的包装细胞系中表达[(5.84±0.07)ng*10-6细胞*24 h-1],也可在SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中表达[(13.37±2.36)ng*10-6细胞*24 h-1].皮下移植胶囊后第1周,实验组大鼠血浆中的心钠素浓度(131 pg/ml±8 pg/ml)明显高于对照组(104 pg/ml±7 pg/ml,t=8.62, P<0.01).7周观察期间,两组大鼠的血压均随个体发育而逐渐升高,但实验组血压[(129±9)～(169±9)mm Hg]却始终明显低于对照组[(145±10)～(181±9) mm Hg, P<0.05～0.01)],其中第2周时的血压差异达28 mm Hg.实验组大鼠的尿量在第2、3周时均明显多于对照组.两组动物体重和尿液钾、钠浓度无明显差异.结论微孔胶囊介导的人心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄SHR血压的上升趋势具有明显的抑制作用.

血清降钙素原和白细胞介素6检测在感染和非感染性全身性炎症反应鉴别诊断中的作用

目的评价降钙素原(PCT)和白细胞介素6 (IL-6)对感染和非感染引起的全身炎症反应综合征(SIRS)的鉴别作用.方法共有20例感染性全身性SIRS及31例非感染性SIRS患者入选.患者临床出现炎症表现24 h内测定血清PCT、IL-6和C反应蛋白(CRP)水平.同时记录白细胞计数,中性粒细胞比例,中性粒细胞绝对计数和高体温.结果全身性感染患者血清PCT[3.6(1.8,27.5) μg/L]、IL-6 (810 ng/L±516 ng/L)、CRP(180 g/L±108 g/L)水平及高体温(38.6±1.2℃)明显高于SIRS患者[0.5(0.2,1.8) μg/L,235 ng/L±177 ng/L, 109 g/L±70 g/L, 37.9±0.9℃].所有炎症指标中,IL-6和PCT的敏感性(≥80%)和特异性(>70%)高.由IL-6和PCT构成的感染评分对全身性感染的辨别力佳(受试者工作特征曲线下面积为0.923).结论与传统炎症指标相比,IL-6和PCT有助于鉴别全身性感染和SIRS.

抗精神病药物致体重增加与5羟色胺2C受体基因启动子区多态性的关系

目的探讨首发精神分裂症患者抗精神病药物(APS)治疗过程中的体重增加与5羟色胺2C受体(HTR2C)基因启动区-759C/T单核酸置换多态性有无相关.方法采用PCR-RFLP技术分析117例首发精神分裂症患者(男58例,女59例)HTR2C基因-759C/T半合子(男性)或基因型(女性)分布频率,APS(利培酮或氯丙嗪)单药治疗10周,测定患者治疗前后的体重和体重指数(BMI),并分析半合子或基因型与BMI变化值的相关性. 结果治疗后患者平均体重增加(3.2±3.5)kg或基础体重的(5.7±6.2)%,体重变化范围为-7 kg～12 kg或-7.8%～32%.58例男性患者突变型半合子频率为19%,59例女性患者突变型纯合子频率为0%,杂合子频率为27.0%.-759T半合子(男性)或杂合子(女性)在体重增加>7%和体重增加<7%的患者组分布差异有非常显著意义(χ2=22.35,P=0.000 1;χ2=12.36,P=0.000 1);与携带-759T半合子或杂合子患者组相比,不携带者体重增加的危险度高5～6倍(OR=5.11,6.68). 结论 HTR2C基因启动区-759C/T单核酸置换多态性与APS治疗导致汉族精神分裂症患者体重增加相关联,而-759C→T单核酸置换是防止和限制体重增加的基因保护因素.

pcDNA3.1甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下症的实验观察

目的研究pcDNA3.1*PTH治疗甲状旁腺功能低下的治疗效果及佳剂量.方法手术切除家兔甲状旁腺,建立甲状旁腺功能低下症模型.将已构建的人甲状旁腺激素基因pcDNA3.1*PTH 以50 μg/kg、150 μg/kg、250 μg/kg剂量注射模型家兔的骨骼肌内,测定注射后不同时间的血钙及血PTH.结果注射pcDNA3.1*PTH后24h模型家兔的血钙及PTH升高,肌注150 μg/kg组的模型兔,血钙和PTH值在7d时达正常水平,各为:2.83±0.02(mmol/L)、11.303±0.025(pg/ml).肌注250 μg/kg组的模型兔,血钙和PTH值在7 d时达正常水平,各为:2.81±0.07 (mmol/L)、12.001±0.008 (pg/ml).并均持续2个月时间.结论人甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下是有效的,且以150 μg /kg和250 μg/kg 为佳剂量.

预测慢性阻塞性肺病患者子代肺功能的相关因素研究

目的探讨肺功能异常和慢性阻塞性肺病(COPD)是否具有家族聚集倾向及其可能机制.方法测定59例COPD患者的117例子女和28例非COPD患者的55例子女的肺功能,并调查他们的吸烟习惯、职业性粉尘接触史、临床表现等.对所有子代成员的第1秒用力呼气容积(FEV1)(ml)进行多元线性逐步回归分析;对所有子代成员的FEV1是否小于70%预计值(pred)进行Logistic回归分析.结果身高、男性性别与子代FEV1(ml)呈正相关;高龄、有临床症状、有职业性粉尘接触史、烟草消耗量、亲代中有COPD患者与子代FEV1(ml)呈负相关.在控制其他危险因素后,COPD患者子女的FEV1(ml)预计将比非COPD患者子女的FEV1(ml)低26.15 ml.COPD亲代的病情越严重,预计其子代的FEV1(ml)越低.男性性别(OR=0.012)与子代FEV1＜70% pred呈负相关;亲代中有COPD患者(OR=1.987),大量吸烟(OR=4.402)、有临床症状(OR=54.428)与子代FEV1＜70% pred呈正相关.结论亲代中有COPD患者是子女FEV1(ml)降低和FEV1＜70% pred的独立危险因素,这说明COPD和肺功能受损具有家族聚集倾向.

重组腺病毒介导的HSP70转染对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的防护作用

目的研究重组腺病毒介导的热休克蛋白70转染对肠上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用. 方法将重组含人全长HSP70基因的腺病毒载体(AdCMVHSP70)转染体外培养的肠上皮细胞株IEC-6,检测转染细胞HSP70的基因表达水平.对照组(转染空载体组)、转染HSP70 24 h、48 h及72 h组IEC-6细胞经缺氧再复氧处理后,分别对细胞的活力、凋亡及死亡水平进行检测分析. 结果AdCMVHSP 70转染组细胞HSP70基因表达为阳性,对照组无表达.经缺氧再复氧处理后,AdCMVHSP 70转染组细胞活力较对照组明显增强(P<0.01), Annexin-V-Flous试剂盒检测死亡细胞明显减少(P<0.01),凋亡有一定水平的抑制(P<0.05). 结论重组腺病毒介导的HSP70转染可保护肠上皮细胞抵抗缺氧再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.而其具体保护机制可能与抑制细胞凋亡有关.

血管内皮生长因子与脑膜瘤瘤周水肿的关系

目的探讨脑膜瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达与肿瘤血管生成和瘤周脑水肿的关系.方法采用免疫组织化学技术检测40例脑膜瘤VEGF表达和微血管密度,用双盲法对染色结果及术前MRI和脑血管造影资料进行评估.结果 VEGF表达强阳性组与表达阴性组相比,水肿指数(EI=4.6 与EI=1.5,P=0.003),脑水肿发生率(88.2% 与41.7%,P=0.023 68)、微血管密度(MVD=53.0 与MVD=26.5,P=0.018)的差异均有显著意义;有软膜供血组与无软膜供血组相比水肿指数差异有显著意义(EI=4.4 与EI=1.8,P=0.044);肿瘤与脑组织重度粘连组较轻度粘连的脑水肿发生率差异有显著意义(88.9% 与45.5%,P=0.004 17);肿瘤大小与水肿指数无相关关系(r=0.264,P>0.05).结论脑膜瘤的VEGF表达、肿瘤血管生成及瘤周脑水肿形成之间有重要关系;VEGF 能促进脑膜瘤的肿瘤血管生成及瘤周脑水肿的形成;肿瘤有软膜供血的、与脑组织粘连严重的脑水肿发生率高;肿瘤大小与脑水肿程度无相关关系.

人乳头状瘤病毒与促癌物协同作用诱发人胚宫颈细胞恶性转化研究

目的研究人乳头状瘤病毒(HPV)与促癌物协同作用在scid小鼠体内诱发人胚宫颈细胞的恶性转化. 方法包装制备含HPV16E6E7逆转录病毒,感染人胚宫颈细胞,按分组将所需细胞移植于scid小鼠右侧肩部皮下,共分4组:实验组为感染病毒的宫颈细胞+亚精胺+正丁酸组,共7只;病毒组为感染病毒的宫颈细胞组,共5只;促癌组为正常宫颈细胞+亚精胺+正丁酸组,共5只;对照组为正常宫颈细胞组,共4只.按实验要求于移植第3日起在小鼠左侧肩部皮下注射亚精胺和正丁酸,每周1次.观察12周后处死动物,如发生肿瘤,则对瘤组织行病理诊断,并作PCR检测HPV16E6E7基因.结果实验组成瘤比例为5/7,其他3组成瘤率皆为0,实验组肿瘤的病理学检查证实为肉瘤,应用PCR方法在肿瘤组织中检测到HPV16E6E7基因.结论宫颈细胞在感染含HPV16E6E7基因的逆转录病毒后,在亚精胺和正丁酸协同作用下发生恶性转化.

微创外科技术在耳鼻咽喉-头颈外科中的应用研究进展

微创技术(minimally invasive technique)是近年来随科技发展建立起来的一项新技术,它要求手术中尽可能少地损伤健康组织结构,在安全、准确、有效去除病变的基础上,减少创伤,保护功能,使患者尽快恢复健康.

积极行动起来提高我国高血压防治水平

高血压是我国人群常见的心血管病,目前估计总患病人数已逾亿人.高血压也是我国人群易患脑卒中和冠心病的重要危险因素,主要是造成心、脑、肾等靶器官的损害,进而引起发病,导致生活质量下降和早死.

第21例 脓涕-发热-咳嗽-右肺空洞型结节(Ⅱ)

本例的病历摘要见本卷第15期第1072页分析与讨论本例为中年女性,反复鼻窦炎20余年,近期临床无急性症状;呼吸道症状轻、起病时间短,影像学示肺内孤立结节影,手术病理不支持肿瘤,而怀疑血管炎,外院已加用激素治疗.患者韦格纳肉芽肿(WG)的诊断在转来我院时似乎已经"明确",因病理切片已"证实".

胃癌外科治疗与预后的临床观察

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,占全部恶性肿瘤死亡的23.2%,为恶性肿瘤死亡的第一[1].临床一旦确诊,70%以上的患者已是Ⅲ、Ⅳ期[2,3],外科手术治疗虽是目前主要的治疗方法,但其疗效特别是对Ⅲ、Ⅳ期患者仍不十分满意,因此急需探讨如何进一步提高胃癌外科治疗的方法.为此对我院28年间收治的2 613例胃癌进行回顾性的总结分析,以探讨提高胃癌外科治疗的方法.

急性主动脉夹层13例临床分析

急性主动脉夹层(AD)是心血管急重症,急性期病死率高.AD的临床表现多样、复杂,早期诊断较为困难,也容易出现误诊和漏诊.现将我院1995年以来收治的13例AD患者的诊治经验总结分析如下.

膀胱移行细胞癌患者外周血CK-20基因与癌组织端粒酶活性的表达及意义

我们通过检测91例膀胱移行细胞癌(TCCB) 患者外周血CK-20基因表达与癌组织端粒酶活性的情况, 探讨两者在膀胱移行细胞癌发生、发展过程中的关系及临床意义.

第10届世界绝经会议简况

糖皮质激素对严重感染及感染性休克的治疗作用

严重感染及感染性休克多年来一直是危重病人死亡的主要原因.虽然经过彻底的清除感染灶、合理应用抗生素、积极的血流动力学支持及提高氧输送,感染性休克的死亡率仍然大于50%.对糖皮质激素在严重感染及感染性休克中的治疗作用已经进行了多年的争论.