人骨形成蛋白-2和透明质酸对脑胶质细胞瘤侵袭性的影响

目的探讨人骨形成蛋白-2( rhBMP-2) 和透明质酸(HA)对C6胶质细胞瘤体内侵袭的影响.方法将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的pEGFP-N3质粒体外转染C6胶质瘤细胞,将C6阳性克隆以立体定向法植入SD大鼠脑实质内,建立大鼠胶质瘤移植模型.移植瘤区给予不同剂量的rhBMP-2 和HA,用病理检查、流式细胞计数、荧光显微镜及电子显微镜观察rhBMP-2和HA对胶质瘤侵袭的影响.结果稳定转染EGFP基因的C6瘤细胞于体内、外均可发出绿色荧光,在荧光显微镜下易于区分肿瘤与非肿瘤区,并能检测到少量C6瘤细胞的远处侵袭性生长.10 μl的5 μg/ml rhBMP-2可明显抑制肿瘤体内侵袭;而10 μl?00 μg/ml HA则具有相反的作用.结论 EGFP标记的C6瘤细胞移植于大鼠脑内,可建成稳定的脑胶质细胞瘤体内侵袭动物模型.rhBMP-2降低了C6瘤细胞的体内侵袭性,而HA则明显促进了其体内侵袭作用.档

丙型肝炎病毒及乙型肝炎病毒联合基因免疫实验研究

目的为HCV/HBV重叠或混合感染的防治寻求新的高效联合基因免疫策略.方法分别将与HCV核心区基因互补的cDNA 和HBV核心区基因克隆于真核表达载体(pRSC),构建pRSC-HBV/HCV ,转染小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),通过免疫荧光和Western印迹法检测蛋白的表达,免疫Balb/c小鼠, 用酶联免疫法、乳酸脱氢酶释放法及荷瘤试验观察小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答.结果 pRSC-HBV/HCV转染的SP2/0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞,相对分子质量14 000及21 000处均可见蛋白条带, Western印迹分析可见特异性的蛋白条带. 10只免疫鼠中全部出现抗-HCV及抗-HBV抗体,而对照组(n=10)全阴性.免疫组小鼠脾细胞对转染pRSC-HBV/HCV的SP2/0细胞的细胞毒活性明显高于对照组, 荷瘤试验显示免疫组小鼠注射转染pRSC-HBV/HCV的SP2/0细胞后肿瘤生长缓慢.结论 pRSC -HBV/HCV在Balb/c小鼠可同时诱导对HBcAg及HCV核蛋白的体液免疫应答及细胞免疫应答.

左髂静脉压迫综合征的外科治疗

目的探讨对左髂静脉压迫综合征患者外科处理的适应证、手术方法和围手术期的处理经验.方法左下肢静脉曲张或慢性肿胀46例,行介入治疗32例,进腹行髂静脉松解、右髂动脉后置吻合8例,髂静脉病变段切除、人工血管原位移植6例,同时或二期手术处理大隐静脉及股静脉瓣膜41例.急性左下肢深静脉血栓形成36例,取栓后行左髂静脉病变段切除、人工血管原位移植25例,髂- 下腔静脉搭桥11例.随访6～66个月.结果无手术死亡和急性肺动脉栓塞发生.效果良好.结论左髂静脉病变是左下肢静脉曲张或肿胀和急性左下肢深静脉血栓形成的重要原因,应尽早处理.介入治疗或外科手术治疗能取得良好的效果 .

白细胞介素10抑制枯否细胞诱导的肝星状细胞激活的研究

目的研究白细胞介素10(IL-10)对与枯否氏细胞(KC)共培养的肝星状细胞(HSC)激活的影响,并初步探讨其作用机制.方法采用肝脏离体胶原酶灌注消化,及密度梯度离心的方法来分离培养HSC和KC; 将原代培养2 d的HSC和KC分为HSC单独培养、KC单独培养和HSC与KC共培养3大组,分别加2 n g/ml和20 ng/ml的IL-10 处理.2 d后,分别采用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR) 掺入法检测HSC的增殖,Western印染法检测HSC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量. 结果 IL-10对单独培养的HSC的增殖(P>0.05)和α-SMA 表达(P>0.05) 无明显影响.共培养组HSC的增殖和α-SMA 表达分别增加了2.4倍和6倍;2 ng/ml和20 ng/ ml的IL-10分别使共培养组HSC的增殖降低了23%和33%,α-SMA 表达降低了35%和49%,均呈浓度依赖性,和HSC单独培养组相比,差异有显著意义(P<0.05或P<0.001).HS C单独培养组未检测出TNF-α;共培养组的TNF-α量比KC单独培养组增加了74%(P<0. 01);2 ng/ml和20 ng/ml的IL-10分别使共培养组的TNF-α量降低了27%(P<0.01) 和36%(P<0.01),使KC单独培养组的TNF-α量降低了29%(P<0.05)和42%( P<0.01),均呈浓度依赖性.结论 IL-10通过抑制KC分泌细胞因子而抑制KC诱导的HSC激活,在减轻肝纤维化中发挥作用.

降钙素基因相关肽诱导人单核细胞合成趋化因子白细胞介素8的研究

目的探讨神经肽对免疫细胞的神经免疫调节作用. 方法以人单核细胞株为体外实验模型,将降钙素基因相关肽 (CGRP)作用于脂多糖活化的单核细胞,用ELISA测定其分泌趋化因子白细胞介素8 (IL-8),采用逆转录多聚酶联链反应 (RT-PCR) 检测IL-8 mRNA的表达,利用48孔微型趋化小室分析单核细胞对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化活性,并通过受体拮抗剂CGRP8-37了解CGRP对人单核细胞趋化功能的调节作用. 结果 CGRP诱导活化的单核细胞分泌表达IL-8蛋白(1120 pg/m l±15 pg/ml)和IL-8mRNA增加(IL-8/肌动蛋白比值为1.845±0.587),用受体拮抗剂 CGRP8-37后IL-8减少(670 pg/ml±15 pg/ml), IL-8/肌动蛋白比值为1.339±0 .434.CGRP增加活化的单核细胞对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化活性,其趋化指数分别是C I＝3.78±0.08和CI＝3.4±0.27; 受体拮抗剂CGRP8-37则使趋化作用减弱. 结论外周感觉神经末梢的神经肽CGRP通过受体介导,作用于单核细胞,在一定条件下诱导其合成和分泌趋化因子IL-8, 促进中性粒细胞和淋巴细胞在局部炎症区域的定向迁移和集聚.

外源性转化生长因子β1与小鼠肝细胞Smad7 mRNA及蛋白表达的关系

目的探讨外源性转化生长因子β1(TGF β1)对鼠肝细胞株BRL细胞生长及其胞内信号传导抑制Smad7蛋白和mRNA表达的影响.[ HTH〗方法按照细胞与TGFβ1共同孵育的时间将实验分为TGFβ刺激0 min组、9 0 min组和24 h组;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和免疫组化技术分别检测Smad7 mRNA、蛋白的表达及其在细胞中的定位.结果 TGFβ1刺激0 min组、90 min组,24 h组的鼠肝细胞生长和形态学变化差异无显著意义;然而,3组间的Smad7 mRNA和蛋白质表达水平存在明显差异,90 min组强于24 h组,2 4 h组又强于0 min组;Smad7免疫反应阳性信号主要在细胞浆.结论 TGF β1在90 min至24 h内无诱导BRL细胞生长停滞作用,其诱导细胞产生的Smad7水平与其刺激有一种短时效关系.

白细胞介素4和10基因多态性与儿童哮喘的相关性及对细胞因子表达的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-4和IL-10基因启动子区多态性与我国儿童哮喘的易感性和临床表型的关系,以及对细胞因子产生的调节作用.方法用聚合酶链反应和限制性长度片段多态性(PCR/RFLP)方法检测IL-4和IL-10基因启动子区4个多态性位点,对168例哮喘患儿及53名正常对照儿童进行相关性分析,选择了各位点为纯合型的哮喘患儿33例进行体外外周血单核细胞(PBMC)培养, 用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定上清中的IL-4和IL-10含量.结果 (1 )我国儿童IL-4 基因-589(C/T)位点等位基因频率与白种人和美国黑人之间明显不同( P=0.001);IL-10基因-1 082(G/A)、-819(C/T)、-592(A/C)3个位点等位基因频率与英国人明显不同(P=0.001).(2)协方差分析显示:IL-10基因-1 082(G/ A)、-819(C/T)影响哮喘患儿血清总IgE水平,进一步分析显示-1 082 A 和-819 T等位基因与患儿高血清总IgE相关(P<0.01, OR=3.16; P<0.05, OR=1.84 ).(3)IL-10 基因-819 TT和ATA/ATA纯合型患儿的PBMC经刺激后,培养上清中IL-10含量升高程度明显低于其他型(P值均<0.05).(4)未获得IL-4基因启动子区-589(C/ T)位点与哮喘表型有意义的结果,哮喘患儿PBMC经刺激后,上清中IL-4含量升高程度在2 种纯合型间差异无显著性.结论 (1)IL-4、IL-10基因启动子区多态性位点与中国人哮喘易感性无明显相关性.(2)IL-10 基因启动子区多态性可能是影响我国儿童哮喘严重程度的重要候选基因,其中-819T等位基因通过削弱对IL-10基因表达的上调作用影响血清总IgE的水平,起到了重要作用.

自体骨骼肌星状细胞心肌成形的实验研究

目的通过不同途径在心肌梗死的不同时期移植自体骨骼肌星状细胞, 观察其移植后能否在心肌梗死区进一步增殖分化, 形成心肌样横纹肌组织. 方法采用冠脉结扎与C形环冷冻相结合于犬左室游离壁做心肌梗死Ⅰ区,在其邻近位置单纯冷冻法做心肌梗死Ⅱ区.A组:在心肌梗死后立即将二咪基苯吲哚(DAPI)标记的骨骼肌星状细胞悬液经冠状动脉及肌壁分别注射到自体犬的两个心肌梗死区.B组:在心肌梗死形成10～14 d后,二次开胸行自体骨骼肌星状细胞移植,方法同前.细胞移植后4周,取心脏标本行组织学检查. 结果冠脉结扎与半环形冷冻相结合及单纯冷冻法可成功制作小面积心肌梗死模型;冰冻切片荧光显微镜检查:组A心肌梗死Ⅰ区可见少量散在荧光,组B心肌梗死Ⅰ区未见荧光分布;两组实验动物心肌梗死Ⅱ区于注射部位均见线形荧光,但普通光学显微镜及透射电镜下均未见横纹肌组织.结论用骨骼肌星状细胞移植替代受损坏死心肌尚不成熟,其临床应用有待进一步研究.

新基因ANGPTL4的克隆及其在血管新生中的功能研究

目的克隆新基因ANGPTL4,并探讨其功能 .方法采用以细胞生长为基础的功能筛选方法筛选人胎盘cDNA文库,结合RACE-PCR方法克隆到一个人全长新基因ANGPTL4,用RH-PCR方法对其进行染色体定位; 用原核表达系统对重组ANGPTL4进行蛋白表达;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验、原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)体外迁移试验、PAEC体外浸润试验、PAEC体外管状试验及小鼠体内栓子形成试验探讨了新基因ANGPTL4对体内外血管新生过程的影响. 结果获取的人全长基因ANGPTL4定位于染色体19p13.3,其原核表达产物对PAEC 的体外增殖没有明显作用(P=0.050 4),但ANGPTL4的 2 μg/ml剂量组对PAEC的体外迁移和浸润均有明显的促进作用(P<0.05),对其管状结构形成也有程度不同的促进作用;对小鼠体内血管新生有较明显的促进作用.结论新基因ANGPTL4对血管新生有促进作用 .

双次自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床分析

目的分析双次自体造血干细胞移植(DAHS CT)治疗恶性血液病的临床疗效.方法对19例恶性血液病患者在确诊后 1年内进行第1次自体造血干细胞移植,以足叶乙甙或阿糖胞苷+环磷酰胺+分次全身照射进行预处理,其中9例加用卡氮芥;第1次自体造血干细胞移植术后4～10个月进行第2次自体造血干细胞移植,预处理方案为足叶乙甙或阿糖胞苷+环磷酰胺+马法兰.结果所有患者两次移植后均获造血重建,第1次自体造血干细胞移植的造血重建速度快于第2次 ,无1例移植相关死亡.中位随访时间1 078(579～3 821)d,存活12例(63.2%),复发、死亡7例(37.5%),DAHSCT后3年无病生存率为63%±10%;其中急性白血病患者第2次移植时骨髓原始幼稚淋巴细胞或原始粒细胞百分比高于第1次移植的患者易于复发.结论 DAHSCT移植患者相关死亡率低,无病生存率较高,可作为恶性血液病治疗的重要方法.

缺氧预适应鼠脑提取液对海马神经元ATP敏感性钾通道活动的影响

目的观测缺氧预适应的小鼠脑提取液对大鼠海马神经元ATP敏感性钾通道(KATP )的影响.方法用膜片钳全细胞记录优降糖(GLI)处理前后急性分离大鼠海马神经元外向钾电流(Ik)的变化.结果给予氰化钠(NaCN)时,Ik显著增加( 1448→2381 pA), 再给予GLI时 ,Ik增加受到抑制(2381→1725 pA); 给予腺苷(ADO)和GLI后, Ik的相应显著变化为139 9→2584→1703 pA; 给予4次缺氧预适应鼠脑提取液和GLI后, Ik亦产生类似的显著变化( 1 298→2413→1713 pA);1次缺氧未缺氧鼠脑匀浆提取液对Ik的作用未见显著影响. 结论缺氧预适应小鼠脑提取液, 通过腺苷样神经活性物质,.激活海马神经元K ATP, 参与缺氧预适应.

同型半胱氨酸和MTHFR基因多态性与缺血性脑血管病的关系

目的探讨同型半胱氨酸 (Hcy)和5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与脑血管病的关系及其影响因素.方法 [ HTSS〗比较49例缺血性脑血管病患者和56健康人血浆Hcy水平和MTHFR基因多态性.分析年龄、肝肾功能、吸烟、嗜酒、血浆维生素B12、叶酸水平的影响,及其与脑血管病和血管狭窄的关系.结果病例组与对照组血浆Hcy分别为17.0 μmol/L±9 .0 μmol/L和 12.6 μmol/L±5.2 μmol/L, 两者差异有非常显著差异(P<0.01) .病例组与对照组之间MTHFR基因677位点T等位基因率及T/T纯合子率分别为52.0%和 44.0 %, P>0.05; 26.5%和 20.0%,差异无显著意义(P>0.05).另外,各组组内T/T 纯合子与非T/T纯合子的Hcy差异有显著意义.颅内外血管狭窄与血浆Hcy水平未发现统计学有相关性.血浆叶酸和维生素B12水平与Hcy和脑血管病均无显著关系.血尿素氮增高和吸烟者与Hcy增高有显著关系(P<0.05).结论本组人群MTHFR基因 C677T 突变的纯合子引起血浆Hcy水平显著增高.血浆Hcy水平和缺血性脑血管病密切相关. 肾功能、吸烟等因素也与Hcy增高有关.没有发现MTHFR基因多态性和缺血性脑血管病有显著关系.

低温对兔心脏手术血管麻痹综合征的影响

目的探讨心脏手术血管麻痹综合征的机制.方法将24只白兔进行全身肝素化后静脉麻醉,分离肺动脉、肾动脉、颈动脉周围结缔组织,将动脉切成长为3.0 mm动脉血管环,将血管环随机分为4组, 每组8只,即对照组(常温组):实验温度37℃;实验1组:实验温度30℃;实验2组:实验温度24℃;实验3组:实验温度16℃(实验1～3组均为低温组).将血管环放在37℃的Kreb溶液中孵育1 h,检验血管环内皮的完整性,抛弃内皮破坏的血管环.利用血管张力计算机软件记录不同温度下血管张力变化.测量低温对去甲肾上腺素的影响时,各组血管环继续在对应温度的Kreb溶液中孵育30 min,依次从低浓度到高浓度加入人工合成去甲肾上腺素,低浓度去甲肾上腺素达到平衡后,依次加入高浓度去甲肾上腺素,依次记录每一浓度血管环张力 .结果各低温组与常温组相比,低温可引起肺动脉、肾动脉、颈动脉舒张(F肺动脉＝69.909,F肾动脉＝131.192,F颈动脉＝50.663,P <0.001),并且能抑制去甲肾上腺素引起的肺动脉(F=269.121,P<0.001) 、肾动脉(F=250.535,P<0.001)及颈动脉(F=212.585,P<0.001) 的收缩. 结论低温可能是心脏手术血管麻痹综合征的一个原因.

丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒准种及其临床意义

病毒准种是近年来病毒性肝炎研究的热点之一。由于病毒 准种的存在可能与患者持续性感染、肝损伤、抗病毒治疗和免疫预防有关,因此，对肝炎病 毒准种的研究受到国内外学者的关注。在5型肝炎病毒中，由于乙型肝炎病毒（HBV）和丙型 肝炎病毒（HCV）常引起慢性感染，因此，对该两型肝炎病毒准种的研究较多。甲型和戊型 肝炎病毒不引起慢性感染，至今尚未见关于该两型肝炎病毒准种的报道。

先天性中心核肌病二例

先天性中心核肌病是一种少见的肌病,国内报道极少.现将所见一家族史2例报道如下.例1 患者男,11岁,足月顺产,2岁会走,易跌倒,跑步不如正常儿童,逐渐上肢无力,提重物困难,蹲下站起需扶膝,登楼梯困难.体格检查:身高1.45 m,智力正常,行走鸭步,高卧征阳性,四肢近端肌力Ⅲ级,远端Ⅳ级,双腱反射对称性消失,病理反射阴性,无明显肌萎缩及假性肥大,血肌酸磷酸激酶(CPK) 16 2.5 U/L(正常19～107 U/L),低密度脂蛋白(LDH) 178 U/L(正常109～245 U/L).

加强对乙型肝炎和丙型肝炎病毒准种的研究

生物的变异是生物为了适应环境的不断变化,维持生存和种族繁衍的需要而采取的一种十分重要和必要的应对措施,也是生物进化的基础,这是生物界普遍存在的现象.

第13例 眼痛-鼻衄-双肺多发结节影(Ⅱ)

本例的病历摘要见本卷第1期第66页分析与讨论本例患者为中年男性,起病缓慢且逐渐加重,8个月病程.主要表现为多脏器损害,首先为眼痛、眼红、巩膜炎,后出现鼻部症状鼻衄,声音嘶哑,继之发现双肺多发结节病灶但无明显呼吸道症状,后出现肾脏病变,表现为腰痛、蛋白尿、管形尿,肾区叩击痛,血尿素氮、血肌酐增高,肌酐清除率降低.

抗肝炎病毒一类新药:双环醇片用于临床

对我国慢性病毒性肝炎防治与研究工作的建议

病毒性肝炎在我国发病率高,是严重危害人民健康的常见病之一.根据血清流行病学调查,甲型肝炎病毒(HCV)感染流行率为80.9%,乙型肝炎病毒(HBV)感染流行率为57.6%,乙肝表面抗原(HBsAg)阳性率为9.75%(约1.2亿人).丙型肝炎病毒(HC V)感染率为3.2%,丁型和戊型肝炎也有流行.病毒性肝炎在急性阶段,除丙型肝炎外,多为自限性疾病,尤其是甲型和戊型肝炎可以自愈.但乙型、丙型和丁型肝炎可以发展为慢性肝炎, 经过10～20年的病程,约有20%左右将发展为肝硬化,1%～5%会变成肝癌.目前约有 3 000万慢性肝炎病人在社会上流动.由于HBV可通过母婴传播途径,影响下一代,故危害极大.另外,重型肝炎是发生率不高但病死率极高的一型肝炎.因此,慢性病毒性肝炎的防治是亟待解决的重大问题.

呼吸机相关性肺炎

编者按:为普及危重病医学专业知识,中华医学杂志于2001年开辟了危重病医学继续教育讲座园地,先后分12讲介绍了下列两方面内容,即(1 )急性呼吸功能窘迫综合征与机械通气;(2)医院获得性感染与抗生素治疗.应广大读者的要求,2002年中华医学杂志将继续就下列问题进行介绍,包括休克与血流动力学监测;多器官功能障碍综合征患者的急性肾功能衰竭与持续性肾脏替代治疗.希望广大读者踊跃参加学习 ,并提出宝贵意见和建议.