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CD1d基因敲除小鼠拮抗DSS诱导结肠炎

李娇;陈永文;张庆镐

摘要: 目的 以葡聚糖硫酸钠 (dextran sulphate sodium, DSS) 诱导的CD1d-/-小鼠实验性结肠炎模型为研究对象, 探究CD1d分子在小鼠结肠炎进程中的作用.方法 取SPF级C57BL/6小鼠和CD1d-/-(C57BL/6背景) 小鼠, 每天给予2.5%DSS喂养, 连续6 d, 每天记录小鼠的体质量变化、粪便性状、活动情况等, 评估小鼠的疾病活动指数 (DAI), 记录小鼠的生存情况.第6天用FITC-dextran灌胃检测肠通透性, 测量结肠长度, 并用HE染色法观察结肠组织病理学变化, 免疫组化法与免疫荧光法检测肠上皮增殖情况, 免疫印迹 (Western blot) 检测小鼠结肠组织细胞炎性因子的表达.结果 与C57/BL6小鼠相比, CD1d-/-小鼠生存率高 (P<0.05), 体质量减轻缓慢、疾病活动指数 (DAI) 低 (P<0.05), 结肠长度长、肠通透性低 (P<0.01), 肠黏膜损伤轻, 结肠上皮细胞增殖明显 (P<0.05), 肠组织IL-1beta及IL-18表达高 (P<0.05) .结论 CD1d基因敲除小鼠拮抗DSS诱导的结肠炎, 可能是通过促进结肠表达NLRP3炎性小体及其底物IL-1beta及IL-18.

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    目的 构建小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33肝癌细胞的稳转细胞系并检测其对肝癌细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响.方法 通过PCR的方法克隆小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33基因并将其连接到慢病毒载体pRRL-Venus中.利用293T细胞包装慢病毒并分别感染小鼠肝癌细胞系hepa1-6, 经流式分选单个YFP阳性细胞, 培养得到稳定表达全长、分泌型、入核型IL-33的hepa1-6稳转细胞系.通过一系列体外实验研究小鼠全长, 分泌型, 入核型IL-33对hepa1-6细胞生物学功能的作用.包括CCK8检测细胞增殖, Annexin V和7AAD的流式染色检测细胞凋亡, PI流式染色检测细胞周期.结果 成功克隆了小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33基因并成功构建了hepa1-6稳转细胞系;全长IL-33促进肝癌细胞增殖, 分泌型和入核型IL-33抑制肝癌细胞增殖;全长IL-33能够抑制早期和晚期细胞凋亡, 分泌型IL-33对细胞凋亡无明显影响, 入核型IL-33对早期的细胞凋亡没有作用, 但是能够抑制晚期的细胞凋亡.分泌型IL-33稳转hepa1-6细胞的细胞周期G1期比例增加, 而小鼠全长IL-33和入核型IL-33对hepa1-6稳转细胞的细胞周期均无明显作用.结论 成功构建了小鼠全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33 hepa1-6稳转细胞系;小鼠全长IL-33促进肝癌细胞生长, 抑制肝癌细胞的凋亡;分泌型和入核型IL-33均能抑制肝癌细胞的增殖;分泌型IL-33稳转细胞增加G1期细胞比例, 入核型IL-33抑制晚期细胞凋亡.这些结果为进一步研究全长IL-33、分泌型IL-33、入核型IL-33在肝细胞肝癌发展中的作用及其机制奠定了基础.

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  • 白细胞介素-22预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌系统性感染小鼠肝脏炎症应答的影响

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    作者:董青青;陈慧;张建民;何维

    目的 筛选人外周血γδ T细胞识别的肿瘤相关蛋白配体,为阐明γδ T细胞的抗原识别机制及抗肿瘤免疫效应机制奠定基础.方法 以3种特异性结合肿瘤的CDR3δ序列合成肽为探针,通过人类全蛋白质组芯片筛选CDR3δ合成肽相互作用的蛋白;流式细胞术检测蛋白在肿瘤细胞系的表达;原核表达纯化肿瘤相关蛋白AGR2(前梯度2蛋白),ELISA验证其与探针肽的结合;固相化包被蛋白,检测人外周血单个核细胞中γδT细胞的活化相关分子的表达;乳酸脱氢酶释放法检测蛋白对γδT细胞体外细胞毒活性的作用.结果 生物素标记的CDR3δ肽,共筛选到与蛋白质组芯片结合的候选蛋白配体共6种,分别是PHF21A、LDB3、SYF2、PPP1R14A、AGR2和SYAP1;流式结果显示AGR2在几种肿瘤细胞系细胞中均有表达,但表达水平不一致;ELISA结果显示GST-AGR2能特异性地结合CDR3δ肽OT3;固相包被GST-AGR2,能显著促进γδ T细胞活化相关分子CD69、CD25的表达;与GST-AGR2预孵育能在体外显著促进γδ T细胞对MDA-MB-231和MCF-7细胞的细胞毒作用.结论 肿瘤相关蛋白AGR2能够在体外促进γδ T细胞的活化,增强γδ T细胞对乳腺癌细胞的细胞毒活性,可能是γδ T细胞识别的肿瘤相关蛋白配体.

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