中国中药杂志
China Journal of Chinese Materia Medica 중국중약잡지
- 主管单位： 中药通报
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.71
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-2272/R
- 国内刊号： 李禾
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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含何首乌的中药滋肾育胎丸对犬的慢性肝脏毒性研究
研究含药典推荐剂量制何首乌的中药滋肾育胎丸对正常比格犬的慢性肝脏毒性.给药组犬分别灌胃给予低、中、高剂量组(1.5,3.0,6.0g·kg-1)的滋肾育胎丸,同时给予同体积的去离子水作为溶媒对照组,每天1次,共39周.给药期间每天观察动物的一般状况,并于给药前、给药13,26,39,43周采血,测定犬血清肝脏毒性相关的生物标志;于给药13,39,43周后分别解剖雌雄各2/7,3/7,2/7只动物,观察动物脏器病变、称量主要脏器质量并对肝脏进行病理检查.结果发现与溶媒对照组相比,给药3,6,9个月和恢复期1个月,各给药组比格犬AST,ALT等11项肝毒性传统生物标志均未见与受试物有关的变化;肝脏脏器指数和肝脏病理学检查均未见明显异常.因此,正常比格犬连续9个月灌胃给予滋肾育胎丸,剂量分别为1.5,3.0,6.0 g·kg-1,未见明显慢性肝脏毒性.
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基于溶酶体介导巨噬细胞清除活力研究广藿香醇特异性抗幽门螺杆菌作用及其机制
探讨广藿香醇特异性增加巨噬细胞清除幽门螺杆菌Helicobater pylori作用及其机制,为进一步研究广藿香醇治疗H.pylori相关疾病奠定药理学基础.将巨噬细胞RAW264.7和H.pylori按照MOI=100的比例共孵育,同时分别予广藿香醇20,10,5 mg·L-1干预24h;应用琼脂稀释法测定巨噬细胞对H.pylori的吞噬率和清除率;荧光显色法观察细胞内溶酶体的稳定性;生化方法检测细胞上清液中NO和MPO的变化情况;RT-qPCR和ELISA法分别检测细胞内IL-6和TNF-α的基因和细胞上清液中蛋白表达变化.与正常组相比,模型组细胞内溶酶体完整性明显下降,细胞上清液中的NO含量、MPO活性、IL-6和TNF-α蛋白表达均显著上升,细胞内IL-6和TNF-α基因表达也明显增加(P＜0.01).经过广藿香醇治疗之后,巨噬细胞清除细菌的能力明显增强,同时细胞内溶酶体完整性恢复,细胞分泌的NO含量、MPO活性、IL-6和TNF-α蛋白表达均显著下降,细胞内IL-6和TNF-α基因表达也被有效抑制(P＜0.01或P＜0.05).广藿香醇可以增加巨噬细胞对H.pylori的清除率并且对被感染的细胞表现出抗炎和抗氧化应激的作用,可能与阻断H.pylori逃逸溶酶体结合步骤有关.
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附子理中汤通过激活AMPK通路及抑制NF-κBp65通路降低非酒精性脂肪肝大鼠肝脏损伤
探究附子理中汤(Fuzi Lizhong decoction,FZLZD)对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏的保护作用及相关机制.32只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为4组,对照组,模型组,易善复(Yishanfu,YSF)组(200 mg·kg-1 ·d-1),FZLZD组(10 g·kg-1 ·d-1),每组8只.采用脂肪乳持续4周灌胃制备大鼠非酒精性脂肪肝模型.确定造模成功后,各给药组大鼠持续给药4周.8周后处死各组大鼠,HE染色检测大鼠肝组织病理学变化;采用全自动生化分析仪检测各组大鼠空腹血清中血脂含量(总胆固醇,T-Chol;甘油三酯,TG;低密度脂蛋白胆固醇,LDL-C;高密度脂蛋白胆固醇,HDL-C)以及肝功能(丙氨酸氨基转移酶,ALT;总蛋白,TP;白蛋白,ALB);称重法计算各组大鼠肝指数;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测肝组织中炎症因子TNF-α,IL-6的分泌水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织中脂肪代谢相关因子SREBP-1c,FASN的mRNA水平;Western blot法检测肝组织中p-AMPK,p-NF-κBp65蛋白表达量.结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肝组织出现明显的病理学变化:肝小叶轮廓不清,肝细胞呈弥漫性脂肪样空泡病变,并呈炎性浸润,胞核固缩、着色深;与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织病变均出现显著缓解,尤其以FZLZD组缓解程度为显著.与对照组比较,模型组大鼠血清中血脂(T-Chol,TG,LDL-C,HDL-C)、肝功能(ALT,TP,ALB)及肝指数均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠血脂及肝功能各指标均显著降低(P＜0.01),FZLZD组大鼠肝指数显著降低(P＜0.05),而YSF组大鼠肝指数无显著变化.与对照组比较,模型组大鼠肝组织中炎症因子TNF-α,IL-6分泌水平及SREBP-1c,FASN的mRNA水平均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织中炎症因子TNF-α,IL-6分泌水平及SREBP-1c,FASN的mRNA水平均显著降低(P＜0.01);与YSF组比较,FZLZD组TNF-α,IL-6分泌水平及SREBP-1c,FASN的mRNA水平差异显著(P＜0.01).与模型组比较,FZLZD组大鼠肝组织中p-AMPK蛋白表达量显著升高(P＜0.01),而p-NF-κBp65蛋白表达量显著降低(P＜0.01).附子理中汤能显著改善NAFLD大鼠肝脏病理变化,降低血脂含量,改善肝功能,降低肝指数,这可能与其激活AMPK通路进而抑制SREBP-1c,FASN的表达以及抑制NF-κBp65通路进而降低炎症因子的释放密切相关.
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连翘含量测定方法优化及青(老)翘质量控制标准建立探讨
为了优化连翘含量测定方法,该文首先通过《中国药典》含量测定方法对各种连翘供试品的制备方法进行了评价,优选出了供试品的制备方法,即30倍70％甲醇超声提取0.5h.该方法可满足同时提取连翘酯苷A和连翘苷的要求,并能达到佳效果.其次,通过方法学考察建立了同时测定连翘酯苷A和连翘苷的HPLC方法,色谱条件乙腈(A)-0.4％冰醋酸溶液(B)梯度洗脱,0～33 min,15％A,33～43 min,15％ ～25％A,43～60 min,25％A;检测波长为277,330 nm.后,利用该文方法和《中国药典》方法对10份青翘和5份老翘的连翘酯苷A和连翘苷进行了含量测定.结果表明:该文所建立的HPLC测定方法有效、快速、简便,符合含量测定要求.同时发现连翘酯苷A和连翘苷的含量在青翘和老翘中具有显著性差异,因此,建议两者指标成分的限量值应分别制订.该研究结果为连翘药材含量测定方法的建立和青(老)翘质量控制标准分别建立提供了依据.
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艾叶挥发性成分对气候因子的响应研究
该研究利用顶空固相微萃取与气质联用结合的方法对产自甘肃崆峒、陕西黄龙、陕西安康、湖北蕲春及河南桐柏的艾叶的挥发性成分进行检测,并通过灰色关联分析的方法探究气候因子对主要挥发性成分含量的影响.从5个产地的艾叶中分别鉴定出54,52,57,47,55个成分,主要为单萜类、倍半萜类及其含氧衍生物、醛、烷烃及苯系化合物等,其中18种为共有成分.桉油精、樟脑、松油烯-4-醇、丁香酚和石竹烯是艾叶的主要挥发性成分.灰色关联分析显示,年极低温度和年日照时数对桉油精和樟脑含量的影响较大;年降水量和年有效积温对松油烯-4-醇和石竹烯含量的影响较大;而年日照时数和年极高温度则对丁香酚是较为主要的影响因子.长日照与极端温度条件可能更有利于艾叶挥发性物质的积累,可据此优化艾的栽培条件或选择适宜产区,提高艾叶品质.
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辣木叶中2个新的黄酮苷
采用多种色谱技术,从辣木叶中分离得到11个化合物,通过IR,UV,MS,NMR等波谱学方法鉴定了它们的结构,分别为槲皮素-3-O-(4-O-巴豆酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、槲皮素-3-O-[6-O-(2E)-戊烯酰]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、异槲皮苷(3)、黄芪苷(4)、槲皮素-3-O-(6-O-乙酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、山柰酚-3-O-(6-O-乙酰)β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-(6-O-巴豆酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、山柰酚-3-O-(6-O-巴豆酰)β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、牡荆素(9)、异牡荆素(10)和异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11).其中,化合物1和2为2个新的黄酮苷类化合物,化合物7和8为首次从该植物中分离得到.
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孟河医派特色猪心血丹参炮制历史沿革及现代研究进展
猪心血丹参是孟河医派特色炮制品种,已传承数百年,临床常用于治疗脑缺血引起的心神不宁、心悸怔忡及痰迷心窍等症.历代医家认为猪心血为养心药之向导,能增强丹参入脑补血安神之功,但其炮制物质基础和炮制机制并不明确.该文从猪心血丹参临床应用和临方炮制意图、炮制方法历史沿革及现代研究等方面进行初步探讨,并对猪心血丹参中药饮片炮制品研究开发的难题及重要意义进行思考与展望,以期为猪心血丹参炮制物质基础和炮制机制研究提供一定的依据,为传承和发展孟河医派临方特色炮制技术作出努力.
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草乌的安全性评价与风险控制措施的探讨
该文通过全面系统的国内外文献和信息研究,对草乌进行本草溯源及考证、追溯古今文献关于草乌的毒性记载、分析与草乌用药相关的临床不良事件案例报道以及近年来草乌相关的毒性实验研究,从而对草乌及其相关制剂的安全性进行了系统分析,初步总结了与草乌的安全性相关病例的临床特点及潜在风险因素;研究发现,76例草乌临床不良事件病例报道的患者,以心肌损害(占53.9％)、肾损害(占42.1％)为主,提示草乌可能存在心脏毒性和肝肾毒性的安全性问题;草乌成分复杂,研究证明其毒性成分主要取决于双脂型乌头碱的水解或分解程度,实验证明生草乌水煎剂在2h时毒性大,约4h时毒性显著下降.毒性试验研究发现,草乌可能存在心血管系统、神经系统、肾脏、胚胎、生殖毒性等,孕妇应禁用.乌头碱中毒目前还缺乏特效的解毒药,治疗的关键是及时、有效地纠正心律失常,维持生命体征平稳,同时予以洗胃、静脉补液等治疗措施.建议加强草乌毒理相关基础研究,进一步明确其毒性的物质基础、毒性机制和炮制配伍的增效减毒机制,明确量-效关系,充分发挥药物疗效的同时有效消除其安全隐患.
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药用植物硒多糖的研究进展
硒多糖是一种通过多糖与硒的结合且具备硒和多糖两者活性的有机硒化合物.硒多糖的生物活性普遍高于硒和多糖,且更易于被机体吸收和利用,因此硒多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老等方面具有广泛的应用.由于硒多糖独特的药理活性,药用植物硒多糖也因此逐渐成为研究热点.但是目前已发现的硒多糖种类较少,同时其多糖的结构十分复杂,对硒多糖化学结构以及体内作用机制尚不完全清楚,仍有待进一步的研究.该文系统的介绍了药用植物硒多糖的主要来源,以及已发现的药用植物硒多糖的主要结构及其生理活性,旨在为硒多糖的进一步研究和应用提供理论依据.
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雷公藤药材真伪鉴别及质量评价研究
随着雷公藤药材在临床应用比较广泛,其市场上的伪品较多,传统技术不能有效的鉴别该中药的真伪.该实验拟基于DNA条形码和化学指纹图谱方法对雷公藤属药材进行准确的鉴定及质量评价.采用DNA条形码技术、隐马尔可夫模型的HMMer注释方法和K2P模型进行遗传距离分析,并结合近距离法、相似性搜索法、构建NJ树等方法对雷公藤的DNA序列进行鉴定和评估;采用UPLC-PDA方法建立雷公藤药材指纹图谱,评价不同来源的药材指纹图谱的相似度;采用LC-MS/MS方法检测雷公藤主要成分的含量.结果表明:药材基原物种雷公藤的ITS2序列种内大K2P遗传距离均远小于其与混伪品的种间小K2P遗传距离;应用相似性搜索法分析结果表明ITS2序列初步鉴定雷公藤药材及其混伪品;在NJ聚类树上雷公藤药材及其混伪品聚类较为清晰,初步分析27份样品中有12种为雷公藤正品.化学指纹谱研究表明特征1区可以较为直观的区分雷公藤伪品;LC-MS/MS.HCA-热图分析表明不同产地雷公藤药材6种有效成分的含量差异显著,可评价雷公藤药材的质量.该实验对雷公藤属的药材准确鉴定及质量评价具有指导意义.
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镉胁迫对黄芪幼苗的生理学影响及凹凸棒粘土对镉胁迫缓解作用的研究
该文研究了镉胁迫对黄芪幼苗的生理学影响及在基质中凹凸棒粘土对镉胁迫的缓解作用.研究发现,随镉施加浓度的升高,黄芪幼苗叶片Y(Ⅱ)(PSⅡ实际光化学效率)、qP(光化学淬灭系数)、ETR(PSⅡ电子传递速率)、叶绿素含量下降,而叶中镉含量、叶片非光化学荧光猝灭系数(qN,NPQ)、根中镉与丙二醛含量、根质膜透性及根尖膜损伤程度上升;同时根APX(抗坏血酸过氧化物酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、POD(过氧化物酶)和CAT(过氧化氢酶)活性以及可溶性蛋白与可溶性糖含量呈现出先升高后降低趋势.在非镉胁迫条件下,基质中凹凸棒粘土的存在未对叶片的上述参数和根中镉含量、根质膜透性、根抗氧化酶(APX,POD,CAT)活性、根可溶性蛋白含量产生显著性影响;但显著提高了根SOD活性和可溶性糖含量并降低了根丙二醛含量和根尖膜损伤程度.在镉胁迫下,基质中凹凸棒粘土的存在能显著缓解镉胁迫导致的叶片Y(Ⅱ)、qP、ETR、叶绿素含量和根CAT活性、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量的降低以及叶片镉含量、qN、NPQ与根中镉含量、丙二醛含量、质膜透性、根尖膜损伤程度、SOD、POD、APX活性的升高;进一步观察显示,基质中凹凸棒粘土对黄芪幼根镉胁迫的缓解作用会随镉胁迫时间的延长而增加.上述结果表明,凹凸棒粘土对黄芪幼苗镉胁迫具有一定的缓解作用.
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决明子炮制过程化学研究
决明子炮制后,出现苷类成分含量显著降低,苷元类成分含量明显升高的现象,可能与其所含糖苷酶或炮制过程受热有关,为探明原因,采用高效液相色谱,研究决明子炮制过程中这2种因素对其主要化学成分含量的影响.结果显示,决明子中含有糖苷酶,在温度和水分适宜条件下可快速将决明子中的苷类成分水解为苷元.但在炮制过程中,其糖苷酶并未发挥作用.炮制过程中真正引起决明子中苷含量降低,苷元含量升高的原因是苷在高温条件下苷键断裂分解产生对应的苷元.该实验为进一步揭示决明子的炮制机制提供依据.
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不同浓度葛根芩连水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白及多药耐药蛋白转运体表达的影响
为了检测葛根芩连水煎液对人结肠腺癌上皮细胞Caco-2 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药蛋白(multi-drug resistanceprotein,MRP) mRNA表达的影响,将不同浓度的葛根芩连水煎液作用于Caco-2细胞,采用Real-time PCR检测不同浓度葛根芩连水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白及多药耐药蛋白转运体MDR1及MRP1-6 mRNA的表达量.药液作用12 h后,当质量浓度为5.00 g·L-1时,可显著下调MDR1和MRP1-6的表达;2.50 g·L-1时,可显著下调MDR1,MRP1,MRP2,MRP4,MRP5和MRP6 mRNA的表达;1.00 g·L-1时,仅对MRP2和MRP5 mRNA的表达有显著性影响.结果证明,葛根芩连水煎液可以显著下调Caco-2细胞MDR1及MRP1-6 mRNA表达,且有浓度依赖性.葛根芩连汤可能通过下调Caco-2细胞转运蛋白的mRNA的表达而降低药物外排,增加药物作用时间,从而增大化疗药物的生物利用度.
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基于药材光谱数据的前馈控制技术在三七醇提过程中的应用研究
该研究利用近红外光谱分析技术快速获取三七药材的质量信息,将三七质量信息与醇提工艺参数结合进行实验设计,建立了物料质量信息、工艺参数和产品质量之间的定量关系模型,实现了三七醇提过程的前馈控制.建立的定量模型具有较高的稳健性和较好的预测能力.在投入新批次三七进行醇提时,快速获取物料质量信息,结合已有模型,可根据预期的关键质量属性,对过程工艺参数进行调整优化,减少物料质量差异造成的提取液质量波动.
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淫羊藿总黄酮胶囊中黄酮类成分含量测定及抗骨质疏松活性研究
采用快速液相色谱法(RRLC)对淫羊藿总黄酮胶囊进行含量测定,建立了淫羊藿新苷A、朝霍定A1、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、淫羊藿次苷Ⅰ、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、宝藿苷Ⅰ等11个黄酮类成分的含量测定方法.同时,通过检测碱性磷酸酶(AKP)含量,考察了11个化合物诱导MC3T3-E1细胞增殖分化的效果,结果显示宝藿苷Ⅱ活性好,宝藿苷Ⅱ和淫羊藿次苷Ⅰ活性都大于淫羊藿苷.该研究建立了黄酮苷类成分的含量测定方法,并比较了每个单体抗骨质疏松的效果,为淫羊藿总黄酮胶囊药效物质基础和作用机制研究提供了技术支持.
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基于回顾性研究的何首乌风险因素分析与安全应用建议
近年来何首乌的肝毒性问题引起了国内外的高度关注,国内学者也针对何首乌的致肝损因素进行了多方面的探索,如中草药相关肝损伤临床诊疗指南的建立和何首乌肝细胞毒性与化学成分、溶剂、炮制、使用及患者病理基础的关系等.笔者通过回顾性分析何首乌相关性肝损伤的个案报道,尝试将新的理论研究成果结合到实际案例中,从理论到实践再次评估分析何首乌的致肝损伤风险因素及辨识特征,并从何首乌应用个体、药物选用及服用要求等方面提出相关建议,以进一步提高中药何首乌的临床应用安全提供参考.
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中药上市后临床有效性再评价技术规范(初稿)
中药上市后再评价是药品评价的重要阶段,由于中药的特殊性,在研究和收集临床实际使用情况下的长期/广泛人群的安全性的基础上,有必要对某些中药进行有效性再评价,确证上市后中药的有效性,但目前关于有效性再评价的相关临床试验技术规范缺如.该文围绕中药上市后临床有效性再评价的伦理学保护、研究计划制定、真实世界研究方法、随机对照试验方法、临床药理机制研究方法和中医理论升华方法等方面,撰写了初步技术规范.目的是为中药上市后有效性再评价工作提供一般性的方法学指导,使中药上市后有效性再评价过程及结果更加科学合理.
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中药资源评估方法探讨
2017年底,原国家食品药品监督管理总局颁布了《中药资源评估技术指导原则》,其目的是为了通过中药资源评估这项工作,让更多药品上市许可持有人或中药生产企业树立起“企业生产中成药、饮片等,应以保障中药资源产量和质量为前提”的理念,并终达到促进中药资源可持续利用的战略目的.该文在“总量不减,保障供应”的总体思想指导下,着重介绍了基于“总量不减”的中药资源“家底评估”和基于“保障供应”的中药资源“供需平衡评估”2种评估方法,通过论述全国中药资源普查与中药资源评估的区别与联系,终提出了基于“保障供应”的中药资源“供需平衡评估”基本策略,为业内开展相关工作提供参考依据.
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大鼠在体单向肠灌流模型研究冬凌草乙素的吸收动力学
为测定冬凌草乙素在大鼠体内的吸收参数,研究冬凌草乙素的吸收动力学.采用高效液相色谱串联质谱法结合大鼠在体单向肠灌流吸收模型,从药物吸收部位、质量浓度和灌流介质等方面研究冬凌草乙素的各肠段吸收特征并计算吸收参数.结果在pH 6.5的灌流介质中冬凌草乙素较为稳定,肠道酶对其代谢影响较小,吸收显著高于pH 8.0碱性条件(P＜0.05);不同质量浓度的冬凌草乙素在相同肠段吸收速率常数(Ka)、表观通透系数(Papp)无显著性差异,不同质量浓度的冬凌草乙素在大鼠十二指肠、空肠、结肠吸收速率常数(Ka)、表观通透系数(Papp)无显著性差异,但与回肠吸收参数具有显著性差异,均显著低于回肠吸收参数(P＜0.05).盐酸维拉帕米对冬凌草乙素各肠段吸收均无显著性影响.结果表明10～1 000μg·L-1冬凌草乙素在大鼠全肠道均有吸收,其中回肠为佳吸收部位,吸收特征为被动转运的线性动力学过程,无吸收饱和现象,弱酸性环境易于冬凌草乙素的肠道吸收,冬凌草乙素不是P糖蛋白的底物.
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无公害中药材生产技术规程研究
针对中药材生产过程中农残及重金属超标等问题,研究团队建立了以无公害中药材为目的生产技术规程,该规程涵盖了产地环境、生产过程、产品质量等控制中药材质量的关键环节.无公害中药材生产产地生态环境应依据《中国药材产地生态适宜性区划(第二版)》规定的生态因子进行产地的选择,空气环境质量应达到GB/T3095-2012一、二级标准值要求,种植地土壤必须符合GB15618和NY/T391的一级或二级土壤质量标准要求,灌溉水的水源质量必须符合GB5084-2005的规定要求.针对中药材生产情况,选择适宜当地抗病优质品种,加强优良种子及种苗的培育;无公害中药材合理施肥应符合使用肥料的原则和要求、允许使用和禁止使用肥料的种类等按DB13/T454执行.遵循“预防为主,综合防治”的植保方针,以改善生态环境,加强栽培管理为基础,优先选用农业措施、生物防治和物理防治的方法,禁止使用高毒、高残留农药及其混配剂,大限度地减少化学农药的用量,以减少污染和残留.此外产品质量达到无公害中药材质量标准,其中高毒性、高检出率的农药残留及铅、镉、汞、砷、铜重金属及有害元素限量达到无公害中药材质量通用标准.无公害中药材生产技术规程的应用保障社会、经济及生态效益.
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基于HS-SPME-GC-MS的不同产地彝药满山香挥发性成分比较研究
建立与优化了基于顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱技术(HS-SPME-GC-MS)的彝药“满山香”挥发性成分的定性与半定量分析方法.并利用该方法对4个不同产地满山香中挥发性成分进行了分析与评价,共鉴定出了54种成分,云南武定、云南罗平、贵州清镇与湖北神农架产地的样品分别鉴定出51,53,52和50种挥发性成分,其中46种挥发性成分为4个产地共有.采用主成分分析、聚类分析等化学计量学方法比较不同产地满山香挥发性成分的差异.结果表明,通过挥发性组分的分析可以区分4个产地的满山香,而地理位置接近的产地的满山香样品中挥发性成分组成具有一定的相似性.该文所建立的方法稳定可靠,适用于满山香中挥发性成分的快速分析,可以为彝药满山香的质量控制、药物开发和资源的科学利用提供重要依据.
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青蒿(黄花蒿)分子育种现状及研究策略
疟疾被认为是世界三大致死疾病之一,黄花蒿是抗疟一线药物青蒿素的唯一天然植物来源,因此培育高青蒿素含量的黄花蒿新品种具有重要战略意义.随着黄花蒿种质资源库的建立及基因组、转录组、遗传图谱等遗传信息的公布,通过解析遗传信息发掘黄花蒿优质、抗逆基因和遗传标记等分子育种手段来快速培育优良品种成为黄花蒿未来育种的主要方向.该文基于黄花蒿的遗传背景和分子育种领域的研究现状,探讨并制定了黄花蒿分子育种策略和技术路线,对未来黄花蒿分子育种提供了指导与科学参考.
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青蒿素生物合成关键酶CYP71AV1的表达纯化和晶体培养
疟疾是一种严重危害人类健康的世界性流行疾病,在青蒿素广泛应用之前,全世界每年约4亿人次感染疟疾,至少有100万人的死亡病例.因此疟疾被世界卫生组织列为世界三大死亡疾病之一.青蒿素的发现,开创了疟疾治疗新方法,全球数亿人因这种“中国神药”而受益.紫穗槐4,11-二烯氧化酶是一种植物细胞色素P450蛋白(CYP71AV1),参与催化紫穗槐4,11-二烯生成青蒿酸的三步氧化反应,是青蒿素生物合成途径上的关键酶.作者拟通过pCW Ori(+)-CYP71AV1重组质粒在原核表达系统中的可溶性表达及蛋白纯化,采用一氧化碳差式光谱分析和基于血红素辅基的生物活性测定,验证CYP71 AV1蛋白的活性,培养该蛋白的晶体.结果表明,构建的重组基因pCW Ori(+)-CYP71AV1在大肠杆菌中得以功能性表达,经过亲和层析和凝胶过滤层析纯化得到了毫克级、有活性的目的蛋白,筛选出了重组CYP71 AV1蛋白的晶体生长条件.这些研究为解析青蒿素生物合成关键酶CYP71AV1的晶体结构,以及通过合成生物学方法批量生产青蒿素奠定了基础,同时为其他植物来源的P450蛋白的表达纯化与结晶提供参考.
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青蒿琥酯复方组合对实验性脑型疟及其神经损伤的保护作用
脑型疟(cerebral malaria,CM)是非洲5岁以下儿童死亡的主要原因,且幸存儿童可出现严重的神经系统后遗症,青蒿琥酯对CM的临床治疗取得了突破性进展,但CM高死亡率、高致残率的临床问题仍未得到完全解决.该研究通过伯氏疟原虫Pb ANKA(Plasmodium berghei ANKA)感染C57BL/6小鼠建立实验性脑型疟(experimental cerebral malaria,ECM)模型,通过比较原虫血症水平、存活率、ECM昏迷及行为学评分、脑微血管阻塞、肝组织疟色素沉积及体温、体质量等,探讨青蒿琥酯复方组合的抗脑型疟作用.结果表明,青蒿琥酯复方组合能提高Pb ANKA感染小鼠的生存率,降低原虫血症水平,有效改善ECM神经损伤症状,减轻脑血管阻塞和肝脏疟色素沉积,对体温、体质量等基础指标也有明显改善作用.结果表明了青蒿琥酯复方组合对ECM所致病理改变和神经损伤的改善作用,有望为人类CM临床辅助治疗提供实验依据.
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3种青蒿素衍生物对神经病理性疼痛小鼠痛共情绪障碍干预效果的比较
该研究以机械痛、焦虑及抑郁为指标,在脊神经结扎小鼠(spinal cord ligation,SNL)中,评价并比较双氢青蒿素(DHA)、青蒿琥酯(ART)及蒿甲醚(ARTN)3种青蒿素衍生物对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的干预效果.实验以临床等效剂量的NP一线药物普瑞巴林(PGB) 25 mg· kg-1、阿米替林(ARP) 20 mg· kg-1为阳性对照;在造模后4～17d,以40 mg· kg-1 DHA,ART,ARTN灌胃给药;以Von Frey法,评价小鼠机械痛;以旷场、悬尾实验,评价小鼠焦虑及抑郁行为.结果显示,在SNL模型中,PGB具有迅速镇痛、部分缓解的特点,但对痛诱发焦虑及抑郁无效;而ARP在镇痛方面起效缓慢且仅部分缓解,而对焦虑的缓解不稳定,但抗抑郁效果好.在给药7～14d,3种青蒿素衍生物逐渐显现镇痛,抗焦虑及抑郁效果.给药14 d,在机械痛方面,灌胃后1.5h,3种青蒿素衍生物组均恢复到假手术状态;在3h,DHA及ART组小鼠机械痛阈值较1.5h无显著变化,而ARTN组机械痛阈值较1.5h显著下降;在24 h,3组青蒿素衍生物小鼠机械痛阈值均较1.5h显著降低,但高于PGB组.在焦虑及抑郁方面,DHA,ART组恢复到假手术组水平,显著优于ARTN组.该研究发现3种青蒿衍生物对神经病理性疼痛小鼠痛共情绪障碍均有抑制作用.其中,DHA和ART的镇痛持续时间、抗焦虑和抑郁作用显著优于ARTN.
