中国中药杂志
China Journal of Chinese Materia Medica 중국중약잡지
- 主管单位： 中药通报
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.71
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-2272/R
- 国内刊号： 李禾
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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活血化瘀方药血塞通胶囊调控CD117+造血干细胞“生新血”的实验研究
目的:探讨活血化瘀方药血塞通胶囊调控造血干细胞(hemopoietic stem cell,HSC)“生新血”的机制.方法:参照改良Zea-Longa法建立大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO).随机分为正常组、模型组、血塞通高、中、低剂量组;各组再随机按1,3,7,14,28 d时间点分为亚组.血塞通胶囊配置成20,40,60g·L-1灌胃.正常组和模型组生理盐水灌胃,每天1次,直到实验结束.ELISA法检测不同时间点血液和骨髓中干细胞因子(stem cell factor,SCF)表达情况;流式细胞仪检测外周血和骨髓中CD117的变化.结果:模型组外周血和骨髓中CD117+ HSC和SCF从1d开始升高,14 d到高峰,其后逐渐降低.血塞通高、中剂量组外周血和骨髓中CD117+ HSC和SCF在同一时间点上升的趋势明显优于模型组(P＜0.05).结论:活血化瘀生新层面之“生新血”是通过调控CD117+ HSC数量变化实现生新血目的.
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基于网络药理学的注射用血塞通抗视网膜静脉阻塞作用机制研究
视网膜静脉阻塞(RVO)是常见的致盲性眼病,糖尿病、动脉粥样硬化等均能诱导RVO的发生,临床应用表明注射用血塞通对RVO具有良好的治疗效果,但是其作用机制尚不明确.该研究采用大鼠RVO模型,实验证实了血塞通对RVO损伤的保护作用,并通过文献检索建立血塞通抗RVO的成分-靶点网络,并选择性实验验证了血塞通对网络中VEGF,IL-1β和IL-6的作用,阐述了血塞通治疗RVO的多成分多靶点整合调节机制.研究表明注射用血塞通可能通过调控炎症反应、血管生成、细胞凋亡和凝血过程发挥其抗RVO的作用.
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苦参碱对脂多糖诱导肠组织炎症小鼠血清和组织NO及ADMA代谢通路的影响
目的:探讨苦参碱对脂多糖(LPS)致肠组织炎症小鼠血清和组织一氧化氮(NO)及非对称性二甲基精氨酸(AD-MA)代谢通路的影响.方法:雄性昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、LPS组、苦参碱高、中、低剂量组(80,40,20 mg·kg-1·d-1),灌胃3d(正常对照和LPS组灌胃等量蒸馏水),末次灌胃lh后腹腔注射生理盐水或LPS(1 mg· kg-1),于12 h后取血清及组织,测定NO和ADMA水平,观察肠组织病理变化,采用Western blot方法检测小肠组织中蛋白精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)和二甲基二甲胺水解酶2(DDAH2)的蛋白表达.结果:与模型组比较苦参碱组(80,40,20 mg·kg-1)均降低血清和组织中NO含量并升高血清ADMA水平,增加肠组织PRMT1表达,但对DDAH2表达无影响.结论:苦参碱可抑制脂多糖诱导的小鼠肠组织炎症.该作用机制与降低血清和组织中NO水平,增加血清ADMA水平和肠组织PRMT1的表达有关.
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以鹿茸对去卵巢骨质疏松症模型大鼠的影响对不同规格鹿茸进行质量评价
目的:考察8种不同规格鹿茸对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响,并对8种不同规格鹿茸进行等级划分.方法:雌性SD大鼠100只,随机分为10组,分别为正常组、模型组、8组不同规格鹿茸组.采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时给予8种不同规格鹿茸,给药12周后,观察不同规格鹿茸对大鼠骨密度、血清生化指标的影响,并以不同组大鼠的骨密度,血清中ALP,BMP-2,BGP含量为影响因素,对8种不同规格鹿茸进行聚类分析.结果:给药12周后,不同规格鹿茸均能显著提高去卵巢大鼠血清中ALP,BMP-2,BGP含量,提高去卵巢大鼠的骨密度,且聚类分析结果与传统商品鹿茸药材质量划分相似.结论:不同规格鹿茸对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症均有拮抗作用,且作用强弱与商品药材质量相关.
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体外仿生消化-单层脂质体萃取分析连花清瘟胶囊中微量金属形态、生物可给性和毒性
该研究以药物消化和吸收体外模型取代耗时耗力的动物实验研究,用于连花清瘟胶囊微量金属分析前处理,即模拟人体消化环境,加入消化液所含有机物和无机物,模拟胶囊在胃肠中的消化和吸收机制.鉴于消化管和血管间生物膜为类脂质膜,以单层脂质体为生物膜模型,以单层脂质体亲和态、水溶态界定微量金属配合物的形态.以单层脂质体亲和态含量评价微量金属生物可给性,比较胃肠中单层脂质体亲和态金属浓度,确定微量金属的主要吸收部位.据微量金属营养日需求量、微量金属日允许摄入大值和国家《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中重金属总量,评价该胶囊的服用安全性.结果表明,胶囊中微量金属含量丰富,主要在肠被吸收,对病人体内缺乏的微量元素起补充和调节作用.重金属砷(As),镉(Cd),铅(Pb)总量分别为0.38,0.07,1.60 mg·kg-1,远低于《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中规定含量.
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基于随机森林算法的川芎成分-靶点-疾病网络的预测研究
该研究搜集KEGG数据库中小分子药物及其酶、离子通道、G蛋白、核蛋白等4类药靶数据作为训练集,建立基于随机森林法的药物-靶点相互作用模型;采用十折交叉验证评价模型精度,获得4类药靶模型的预测正确率分别为71.34％,67.08％,73.17％,67.83％.利用该模型对川芎26个化学成分进行靶点预测,并构建其成分-靶点-疾病网络,所得结果得到了较好的文献验证.该文所建模型具有较高的预测精度,可用于发现其他中药成分的潜在作用靶点.
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槲皮素对大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌的干预作用
该研究采用LPS 100 μg·L-1联合ATP 5 mmol·L-1建立大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌模型,考察槲皮素对心脏成纤维细胞炎症因子TNF-α,IL-6及IL-1β分泌的抑制作用,并进一步采用Western blot考察槲皮素对p-NF-κB p65 (S276)及p-Akt(S473)蛋白表达的影响,探讨槲皮素抑制心脏成纤维细胞炎症分泌的作用机制.研究结果发现:①槲皮素51.74 ～827.81 μmol·L-1对大鼠心脏成纤维细胞活力无明显影响;②槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP5 mmol·L-1作用36 h所致的TNF-α,IL-1β的水平升高(P＜0.01或P＜0.05);槲皮素82.78,41.39 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP5 mmol·L-1作用36 h所致的IL-6的水平升高(P＜0.05),而槲皮素20.70 μmol·L-1未见明显影响;③槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP 5 mmol·L-1作用15 min所致的NF-κB p65(S276)激活,以20.70 μmol·L-1明显;槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L-1均可显著抑制LPS 100 μg·L-1作用3h而后ATP5 mmol·L-1作用240 min所致的p-Akt(473)表达增加(P＜0.05).因此,该研究认为槲皮素可通过抑制NF-κB p65 (S276)和Akt(473)的激活而减少心脏成纤维细胞TNF-α,IL-6及IL-1β炎症因子的分泌.
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一测多评法测定山银花提取物中6种绿原酸类成分
以绿原酸为内标,测定新绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-双咖啡酰奎宁酸、3,5-O-双咖啡酰奎宁酸和4,5-O-双咖啡酰奎宁酸的相对校正因子,建立山银花提取物中6种绿原酸类成分的一测多评定量分析方法.通过考察不同色谱仪和不同色谱柱以验证相对校正因子的耐用性,同时采用外标法对4批山银花药材及20批山银花提取物进行分析,并将其含量测定结果与一测多评法测定结果进行比较.结果表明相对校正因子的耐用性良好,4批山银花药材及20批山银花提取物一测多评法与外标法所得结果无显著差异.所建立的含量测定方法可用于同时测定山银花提取物中6种绿原酸类成分.
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木通皂苷D在大鼠胃肠道内容物中的稳定性考察
为了考察木通皂苷D(akebia saponin D,ASD)在胃肠道内容物中的稳定性,建立了ASD的高效液相色谱含量测定方法,并将ASD分别溶解在人工胃液、人工肠液、胃内容物、大肠内容物、小肠内容物中,37℃恒温水浴,孵育一定时间后取样,测定ASD的浓度.结果ASD在大肠内容物中极不稳定,8h以内被全部降解.ASD在人工胃液、人工肠液、胃内容物和小肠内容物中非常稳定.上述结果证明ASD在酸性环境下、酶的存在下以及在小肠菌群中均稳定,而在大肠菌群的作用下极易降解.
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狭苞橐吾中一个新的艾里莫芬烷型倍半萜
利用各种色谱分离技术,从狭苞橐吾Ligularia intermedia地上部分75％乙醇提取物中分离得到4个化合物,通过理化数据和波谱数据鉴定化合物的结构分别为(3aR,4R,5S,7S,7aS)-2-acetyl-7,7a-dihydroxy-3a,4-dimethyl-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3H-inden-5-vl acetate(1),10β-羟基-艾里莫芬-7(11)-烯-12,8α-内酯(2),β-谷甾醇(3)和β-胡萝卜苷(4).其中化合物1为新的降二碳艾里莫芬烷型倍半萜.
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吊球草的化学成分及抑菌活性研究
研究吊球草Hyptis rhomboidea的化学成分,并对部分单体化合物进行抑菌活性测定.采用Toyopearl HW-40,Sephadex LH-20,MCI-Gel CHP-20,RP-18,PTLC及硅胶等色谱法对吊球草进行化学成分研究,根据理化性质和波谱技术鉴定化合物的结构,并评价部分单体化合物对8种植物病原菌的抑菌活性.从乙酸乙酯部位中共分离鉴定了11个化合物,分别为咖啡酸乙酯(1)、熊果酸(2)、齐墩果酸(3)、vanillactic acid(4)、迷迭香酸甲酯(5)、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、冬青素A(8)、β-香树脂醇(9)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(紫云英苷,10)和胆甾-5-烯-3β,4β-二醇(11).其中化合物1对核盘菌的抑制活性强,MIC为16.2 mg·L-1,化合物5对玉米大斑病菌和小核盘菌的抑制活性强,MIC分别为8.1,16.2 mg·L-1.所有化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物1,5具有较强的抗真菌活性.
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猫眼草化学成分研究
为了研究猫眼草的化学成分,采用硅胶柱色谱和制备HPLC等分离纯化方法,从猫眼草无水乙醇浸提液的正己烷萃取物中分离得到14个化合物.经波谱数据分析及理化性质鉴定其结构分别为羽扇豆醇(1),大戟醇(2),cassipourol(3),24-methylenecycloartan-3β-ol (4),24-hydroperoxycycloart-25-en-3β-ol(5),25-hydroperoxycycloart-23-en-3β-ol(6),白桦脂醇(7),熊果醇(8),(23E)-25-methoxycycloart-23-en-3β-ol(9),(23E)-cycloart-23,25-dien-3β-ol(10),24-methylenecycloartan-3β,28-diol(11),sal-icinolide(12),2α,3β,5α,9α,15β-pentaacetoxy-11,12-epoxy-7β,8 α-diisobutyryloxyjatropha-6(17)-en-14-one(13),3β,5α,15β-triace-toxy-7β-isobutyryloxy-9α-nicotinoyloxyjatropha-6 (17),11 (E)-dien-14-one (14),化合物1～11为首次从该植物中分离得到.
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HPLC同时测定不同产地茄根中2种苯丙酰胺类成分的含量
建立同时测定茄根中2种苯丙酰胺类成分N-反式-对香豆酰基去甲辛弗林和N-反式-对香豆酰基酪胺含量的高效液相色谱方法.采用Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);以甲醇-0.1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;柱温30℃;检测波长300 nm.结果表明,N-反式-对香豆酰基去甲辛弗林和N-反式-对香豆酰基酪胺色谱峰分离良好,分别在2.84 ～68.16,3.10～74.40 mg·L-1呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为99.30％,102.8％.该方法快速、准确、重复性好,可用于茄根药材的质量控制.
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连翘苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定
基于高特异性,高灵敏度的小分子单克隆抗体的免疫分析方法的建立,对中药小分子化合物的的研究具有重要的意义,其中,小分子人工抗原的合成是中药小分子抗体制备的关键步骤.采用高碘酸钠氧化法分别合成连翘苷免疫抗原(FRn-BSA)和包被抗原(FRn-OVA),通过紫外光谱和薄层色谱法检测到连翘苷成功与BSA/OVA偶联,小鼠经FRn-BSA免疫后,体内可产生抗连翘苷抗体,效价在1∶8 000左右,线性范围为1～100 mg·L-1.成功合成的连翘苷人工抗原,可为下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础.
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马兜铃酸毒性研究进展及风险因素分析
马兜铃酸(aristolochic acids,AA)的肾毒性和致突变性,以及其对泌尿系统上尿路移行上皮的致癌性已广为人知.2003年以来,药品监管部门先后取消了青木香、关木通、广防己等含AA药材的质量标准,并对其他含AA的药材如朱砂莲、马兜铃、寻骨风等采取了加强监管、修订说明书或质量标准等措施,以控制其安全性风险.近年来,国内外对AA的研究内容主要包括AA毒性的作用机制及临床表现、早期诊断及治疗方法.该文对使用含AA药品的风险因素做了简要的归纳与评述,并提出了预防及控制AA毒性发生的措施及建议.
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蚂蟥不同月龄口器组织学及组织化学研究
利用石蜡切片、HE及AB-PAS染色法研究不同月龄蚂蟥口器组织结构的变化.结果显示1～3月龄口径与口宽增加幅度较小,分别为0.6,0.3 mm;3～4月龄增幅大,为1.2 mm;4～6月龄口径、口宽达到大值,基本不再增加.口唇位于口部前端的外缘,外被薄的保护膜,随着生长口膜上皮细胞由立方上皮细胞到柱状细胞再到长柱状细胞.口腔深处共有3个颚,较大1个居背面,另外2个较小的分居左右腹侧,与肌肉质的咽相连,颚从外到内由角质层、上皮细胞层、肌层、颚腔组成,颚上均存在具有分泌酸性颗粒的乳突,从2月龄开始存在大量酸性颗粒状物质;口腔由内向外由黏膜层、黏膜下层、肌层组成,周围有着丰富的围口神经.咽由内向外由黏膜层、肌层、浆膜层构成,黏膜褶皱随生长增高增厚,黏膜上皮由复扁平上皮变为柱状上皮,肌层发达且随着生长逐渐增厚,4月龄厚度大.蚂蟥黏液细胞主要由管状、梨状2种形态4种着色类型构成,不同时期AB-PAS染色变化不大,口唇1月龄黏液细胞少,2,3月龄黏液细胞增多且主要为Ⅱ型黏液细胞,口腔中含有较多Ⅰ型黏液腺细胞,咽部肌层下的结缔组织层分布着较少的Ⅱ型黏液细胞.
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天山雪莲悬浮培养细胞中紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的生物合成调控
紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸为野生天山雪莲中的3种活性化学成分,具多种药理活性,在药材中含量较低.研究在筛选得到天山雪莲上述3种化学成分高产细胞系的基础上,通过外源添加碳源和生物合成前体的方法调控紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸在天山雪莲培养细胞中的生物合成,极大地提高了其含量和产量.仅需培养16 d,紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的质量浓度即可以分别达到339.0,225.3,512.7 mg·L-1;三者的含量分别为野生药材的67.9,1.9,10.6倍.研究为终实现通过天山雪莲细胞培养同时规模化生产以上3种活性成分打下了坚实基础,具有理论和实际应用意义.
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新疆紫草AP2/ERF转录因子的电子克隆和生物信息学分析
应用电子克隆技术,以紫草AP2/ERF序列为探针,获得了新疆紫草的1条876 bp AP2/ERF的序列,包含1个1 077 bp的开放阅读框编码205个氨基酸,命名为AeAP2/ERF.采用生物信息学方法,对该基因所编码的蛋白从氨基酸组成、理化性质、亚细胞定位、跨膜结构域、疏水性/亲水性、高级结构及功能域等方面进行预测和分析,结果显示该基因编码蛋白定位于细胞核,为水溶性蛋白,可以调控代谢、转导信号.
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降香黄檀种子和离体胚超低温保存研究
以降香黄檀的成熟种子和离体胚为材料,探讨了含水量对其存活的影响,以及快速冷冻法和玻璃化冷冻法对种子和离体胚超低温保存的影响.结果发现,种子含水量由15.04％降至8.14％时,其发芽率和生活力分别由82.67％,85％降至18.35％,25％;种子含水量由15.04％降至9.37％时,经玻璃化冷冻和快速冷冻后其发芽率由82.67％分别降至37.50％,25.37％,其中含水量12.35％的种子发芽率为63.58％,50.45％,较其他含水量的高;含水量为26.32％的种胚,经玻璃化冷冻和快速冷冻后,其发芽率由95.67％分别降至58.31％,33.82％,含水量在14.17％ ～ 21.34％时,其发芽率有所下降,但下降幅度不大.实验结果表明,种子超低温保存佳条件为含水量12.35％,玻璃化冷冻;离体胚超低温保存佳条件为含水量15.04％,玻璃化冷冻.结论是含水量对超低温保存后降香种子和种胚的发芽率影响显著;玻璃化冷冻法显著优于快速冷冻法.
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胰高血糖素与2型糖尿病及糖调节异常的相关性研究
目的:分析不同阶段的2型糖尿病患者,在空腹、糖耐量(OGTT)、左旋精氨酸(L-Arg)实验中胰腺αβ细胞分泌的胰高血糖素(GC)、胰岛素,游离脂肪酸(FFA)的变化;通过对胰高血糖素(GC)、游离脂肪酸(FFA)与血糖(BG)、胰岛素(INS)、胰岛素稳态模型(HOMA)、糖代谢激素分泌曲线等指标之间的关系的研究,来探讨胰腺αβ细胞在糖尿病发病机制中所起作用,为糖尿病的治疗提供理论依据.方法:3组研究对象,包括T2DM组45例、IGR组28例、NGT组30例,分别行糖耐量(OGTT)、次日行左旋精氨酸(L-Arg)实验.检测空腹状态下的血糖(FBG)、胰岛素(F)、胰高血糖素(FGC)、游离脂肪酸(FFA),计算各组的胰岛素稳态模型(HOMA-β),胰岛素敏感指数(ISI),HOMA-IR;同时计算OGTT,L-Arg试验中检测的不同时间段并计算曲线下面积AUCBG,AUCINS,AUCGC.结果:3组研究对象中的FGC和FFA均有总体差异;各组的FGC均与HOMA-β,ISI负相关,与HOMA-IR正相关;在所有的103例研究对象中,FGC与FBG,HOMA-IR正相关,与FINS无相关性,与HOMA-β,ISI负相关;FFA与FBG,HOMA-IR正相关,与FINS,HOMA-β,ISI负相关;FGC与FFA之间,在T2DM组和IGR组正相关,在NGT组无统计学相关.3组研究对象在OGTT中GC曲线下面积表现为T2DM＞ IGR＞ NGT,L-Arg实验中GC曲线下面积表现为T2DM＞ IGR＞ NGT;AUCGC与AUCBG显著正相关、与AUCINS显著负相关.结论:发现T2DM和IGR患者胰高血糖素和游离脂肪酸水平升高,其升高的程度与血糖、HOMA-IR正相关,与INS,HOMA-β,ISI负相关.在T2DM和IGR患者,胰高血糖素升高,提示2型糖尿病人不仅存在胰腺β细胞分泌异常,且存在α细胞的分泌异常.
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玉屏风滴丸治疗持续性变应性鼻炎的疗效评价
为了比较玉屏风滴丸和单用西药治疗持续性变应性鼻炎的临床疗效,选取2011年4月2012年5月北京世纪坛医院就诊的持续性变应性鼻炎76例患者随机分为治疗组44例和对照组32例,治疗组采用玉屏风滴丸加西替利嗪片治疗,对照组采用西替利嗪片治疗,28 d后观察2组疗效,结果显示治疗后2组患者的症状及鼻甲体积与治疗前相比均有明显改善,治疗组显效率及总有效率为84.09％,95.45％,对照组显效率及总有效率为46.87％,56.25％,经统计学处理,差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组疗效优于对照组,玉屏风滴丸治疗持续性变应性鼻炎有效,效果优于单纯口服西替利嗪片.
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UPLC-MS/MS同时测定大承气汤大鼠血浆中9种活性成分的含量
该研究建立了大鼠血浆中大承气汤9种活性成分同时测定的UPLC-MS/MS方法.采用Aglient C18色谱柱(2.1mm ×50 mm,1.7 μm)进行色谱分离,利用甲醇-5 mmol·L-1甲酸铵流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1.实验过程血浆的前处理不仅考察了甲醇、乙腈等有机溶剂蛋白沉淀法,同时考察了液-液萃取法中不同萃取溶剂、不同涡旋时间、萃取次数及不同体积萃取溶剂等因素对各活性成分回收率的影响.终确定以布洛芬为内标,采用乙酸乙酯液-液萃取法进行血样前处理,N2吹干复溶,离心后上清液进行UPLC-MS/MS分析,在电喷雾电离(ESI)负离子模式下,采用多重反应监测模式进行检测.大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、厚朴酚、和厚朴酚、橙皮苷及橙皮素的线性范围分别为0.33～ 660,0.40～ 792,0.41～ 827,0.34～ 680,0.45～ 907,0.46～ 927,0.43～ 867,0.34～ 683,0.39～787 μg·L-1,且线性关系良好;提取回收率均＞69.39％;日内和日间的RSD＜ 15％.该方法符合生物样品分析的要求,可用于研究大鼠灌胃大承气汤后,血浆中该9种活性成分的同时测定,为其量-效物质基础提供了理论依据.
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UPLC-MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学研究
为了建立UPLC-MS/MS同时测定大鼠脑中栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷酸灵敏可靠的分析方法,并对这3种环烯醚萜苷在脑中风大鼠口服醒脑静后的脑药动力学进行研究.该实验中脑浆样品沉淀蛋白2次;采用Acquity BEH C18柱,流动相为乙腈-1％甲酸-水梯度洗脱,质谱采用电喷雾电离源(ESI),多反应监测(MRM)进行负离子检测,样品分析时间为3.5 min.结果表明3种环烯醚萜苷成分在大鼠脑中的线性关系良好,提取回收率在99.6％ ～ 114.3％,日内、日间精密度和准确度良好,稳定性等均符合要求.各物质在中风大鼠脑中的t1/2和MRT相似,栀子苷与京尼平龙胆双糖苷有双峰现象,而栀子苷酸为单峰.表明该方法特异灵敏、准确可靠,可用于醒脑静口服制剂的脑药动力学研究.
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基于ITS2序列鉴别牡丹皮药材及其混伪品
该研究应用ITS2序列鉴别牡丹皮药材及其混伪品,以期探索牡丹皮药材准确鉴别的新方法.提取牡丹皮及其混伪品的DNA,目标片段经PCR扩增后测序,通过CodonCode Aligner V3.7.1对测序序列进行质量分析和拼接,基于MEGA5.0中的K2P模型计算牡丹皮与其混伪品的种内、种间遗传距离及构建系统聚类树.牡丹皮ITS2序列长度为227 bp,种内大K2P距离为0,它与各混伪品的种间小K2P距离为0.041,种间平均K2P距离为0.222.由NJ树可知:不同产地来源的牡丹皮药材个体聚为一支,自展支持率为99％,呈现出明显的单系性,能很好地与其混伪品芍药、川赤芍、白鲜皮、朱砂根区分开来.应用ITS2序列可以准确鉴别牡丹皮药材及其混伪品,该方法可以作为传统鉴别方法的有效补充.
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木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材的ITS2条形码分子鉴定
通过分析木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材的ITS2(internal transcribed spacer 2)条形码序列,探讨木香类药材鉴定新方法.对60份样品提取基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,采用MEGA5.0软件进行序列比对,计算种内和种间遗传距离(K2P),构建邻接树(neighbor-joing tree,NJ Tree).结果表明,无论是菊科的木香、川木香、土木香,还是马兜铃科的青木香和五味子科的红木香,ITS2序列种内变异均小于种间变异,ITS2序列所有单倍型比对后长度为272 bp,变异位点达到162个;遗传距离显示物种种内平均K2P远远小于种间平均K2P;NJ树结果显示木香、川木香、土木香、青木香和红木香药材可明显区分,且能鉴别川木香的2个基原物种.因此,ITS2序列可用于鉴定木香、川木香、土木香、青木香、红木香药材,为临床安全用药提供依据.
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中药材蜈蚣及其混伪品DNA条形码鉴别研究
利用DNA条形码技术对蜈蚣药材进行鉴别,为蜈蚣药材鉴定提供新的方法.该研究以COI条形码序列为基础,对蜈蚣实验样品进行DNA提取,PCR扩增和双向测序,用MEGA6.0软件对所有5个物种的50份样品进行序列比对和邻接(NJ)树构建.结果显示实验样品均可以获得COI序列,蜈蚣药材与其混伪品COI序列种间平均K2P距离为0.222,种间小K2P距离为0.190,基于COI序列构建的邻接(NJ)树中少棘巨蜈蚣单独聚在一枝,与其混伪品可以相互区分.因此基于COI条形码序列可以准确鉴定蜈蚣及其混伪品.
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应用ITS2条形码鉴定中药材合欢皮、合欢花及其混伪品
为准确鉴别中药材合欢皮、合欢花及其混伪品,该研究应用ITS2条形码对46份药材及其混伪品进行鉴定研究.通过对样本进行基因组DNA提取,PCR扩增和双向测序获得ITS2序列.所得序列经CodonCode Aligner拼接后,基于隐马尔可夫模型的HMMer注释方法去除两端5.8S和28S区段,用软件MEGA5.0对序列进行分析比对,并基于K2P模型进行遗传距离分析.采用相似性搜索法、近距离法、构建NJ树对序列鉴定能力进行评估.结果表明,药材基原物种合欢的ITS2序列种内大K2P遗传距离均远小于其与混伪品的种间小K2P遗传距离;应用相似性搜索法分析结果表明ITS2序列可准确鉴定合欢药材及其混伪品;NJ树显示合欢药材与其混伪品可明显区分开,表现出良好的单系性.因此,应用ITS2条形码可稳定、准确地鉴别合欢药材及其混伪品.
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基于ITS2序列鉴定中药材升麻及其混伪品
该研究选用ITS2序列对升麻及其混伪品进行分子鉴定,从而确保用药安全.实验采用DNA条形码技术,对升麻及其混伪品的ITS2核基因片段进行扩增并双向测序,经CodonCode Aligner V3.7.1拼接后,利用MEGA 5.0软件对相关数据分析,构建邻接(NJ)系统聚类树进行鉴定分析.结果表明升麻药材的3个基原物种:大三叶升麻Cimicifuga heracleifolia、升麻C.foetida、兴安升麻C.dahurica,其ITS2序列长度分别为217,219,219 bp,3个基原物种ITS2序列与混伪品的种间平均K2P距离大于其种内平均K2P距离,ITS2系统发育树显示,升麻的3个基原物种均各自聚为一单系分支,并与其他混伪品明显分开.ITS2序列能够有效准确地鉴别中药材升麻及其混伪品.
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蒲黄、松花粉等花粉类药材及其混伪品的DNA条形码鉴定
目前市场上花粉类药材品种较多,由于在外观形态均呈粉末状,很难区分,加之市场价格较高等因素,故混用和掺伪的情况时有发生,因此花粉类药材的准确鉴定对公众的用药安全显得尤为重要.该研究采用DNA条形码技术,对蒲黄、松花粉及其混伪品的基原植物及药材共60份样本进行研究.通过primer premier 6.0设计出蒲黄ITS2特异性引物PhF-R,其扩增效率高达100％,实验结果表明蒲黄药材的ITS2序列长度为234～ 249 bp,种内K2P平均距离与同属种间K2P平均距离十分接近,但远小于其与混伪品的种间K2P平均距离;松花粉药材的ITS2序列长度均为247 bp,ITS2序列种内平均K2P遗传距离远小于其与混伪品种间平均K2P距离.利用ITS2序列构建的邻接(NJ)树表明蒲黄、松花粉及其混伪品可明显区分,并呈现出良好的单系性.因此,DNA条形码可对该实验材料准确鉴定,有助于花粉类药材的监管及市场流通.
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基于ITS2和psbA-trnH序列对细小种子类药材车前子的鉴定比较
为考察ITS2序列和sbA-trnH序列对车前子药材及其常见混伪品的鉴定能力,该研究对车前子2个基原物种及7种混伪品共71份样本进行了研究.采用MEGA 5.1对获得的ITS2和sbA-trnH进行序列比对,计算种内和种间kimura2-parameter(K2P)遗传距离,并构建系统发育树.结果显示,车前和平车前的ITS2序列长度分别为199,200 bp;两者的ITS2序列种内大K2P遗传距离均小于与混伪品的小种间K2P遗传距离;基于ITS2序列构建的NJ树中,车前、平车前及其混伪品都表现出良好单系性,都能相互明显区分.表明ITS2序列能将车前子药材与混伪品进行很好的区分.车前和平车前的psbA-trnH序列长度均为340 bp,两者的psbA-trnH序列种内大K2P遗传距离小于与混伪品的小种间K2P遗传距离;基于psbA-trnH序列构建的NJ树结果显示,除大车前外,车前子药材与其余混伪品可以明显区分.因此,ITS2序列作为DNA条形码,车前子及其混伪品具有良好的鉴别能力,对保障车前子用药安全具有重要意义.
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凉茶药材鸡蛋花及其混伪品的DNA条形码鉴定
该研究应用ITS2序列作为DNA条形码鉴定凉茶药材鸡蛋花及其混伪品,共收集48份药材和基原植物样本,提取基因组DNA,通过PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,经CodonCode Aligner拼接注释获得序列,然后应用MEGA5.0比对ITS2序列,计算种内和种间遗传距离,构建系统进化NJ树进行鉴定.结果表明,鸡蛋花ITS2序列长度为244 bp,种内遗传距离为0 ～0.016 6,远小于其与混伪物种间的遗传距离0.320 8 ～0.650 4,NJ树结果显示鸡蛋花与其混伪品均可准确区分.因此,应用ITS2条形码能够准确、有效地鉴别凉茶药材鸡蛋花及其混伪品,为鸡蛋花药材的鉴定提供了一种新的分子手段,为其使用安全提供了有力保障.
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传统中药金钱草ISSR-PCR反应体系的正交优化研究
建立稳定、可靠的金钱草ISSR-PCR反应体系,为金钱草遗传多样性分析、优良品种选育、药材分子鉴定奠定基础.该研究在7水平单因素实验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,应用SPSS 19.0进行方差分析,对影响反应体系的5个主要因素在4个水平上进行优化.利用优化的反应体系,筛选引物适退火温度,以23份不同产地金钱草材料检测体系稳定性.结果显示模板DNA,引物,dNTP,Mg2,Taq酶5个因素对金钱草ISSR-PCR反应结果均有极显著影响,影响大小依次为引物＞ Taq酶＞模板DNA＞ Mg2+＞ dNTP,确定优反应体系为总体积25μL,模板DNA 60 ng,引物0.3μmol·L-1,dNTP 0.2mmol·L-1,Mg2+1.8 mmol·L-1,Taq酶1.25 U.经不同产地样品检测,该优化体系稳定、可靠.该研究为其他物种ISSR-PCR体系的优化提供参考.
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基于COI序列的紫河车药材及其混伪品的DNA条形码鉴定研究
利用COI序列对紫河车及其常见混伪品进行DNA条形码分子鉴定,探究准确、快速鉴定紫河车及其混伪品的方法.该研究共收集6个种41份样品,以COI作为条形码序列,对紫河车的正品及其混伪品提取基因组DNA,通过PCR扩增和双向测序,运用CodonCode Aligner进行序列拼接后,采用MEGA6.0软件进行序列比对,分析比较种内、种间序列差异,并构建正品紫河车及其混伪品的NJ树.结果表明紫河车COI序列种内平均K2P距离为0.001,种内大K2P距离为0.008,紫河车的正品来源人与其混伪品种间存在较多变异位点.由所构建的NJ树显示紫河车与其混伪品均可明显区分.基于COI序列的DNA条形码技术可以鉴定紫河车及其混伪品,为紫河车的鉴别提供了新的工具.
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中药鉴定与标准研究
中药材品种繁多,习用品、代用品以及多基原、同名异物、同物异名等混乱问题一直是影响中药安全有效的主要问题之一,如何鉴定复杂的中药材是相关企业及监管部门关注的难题.基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定等传统鉴定方法存在一定局限性,而且此类人才已远远满足不了中药现代化的市场需求.因鉴定方法缺失导致多起安全性事件,给中药临床应用带来极大挑战,如:2000年的马兜铃酸肾病事件,主要由含马兜铃酸的关木通和广防己误当不含马兜铃酸的木通和粉防己使用造成;有毒土三七误当三七使用引起肝损害;亚香棒虫草混入冬虫夏草会引起头晕、呕吐、心悸等;有剧毒的东莨菪根混入苍术中制造了“苍术造假”事件;含土大黄苷的土大黄误当大黄使用造成制售假药;山银花冒充金银花、西洋参中混入人参、桃仁中掺上苦杏仁,鸡冠花籽代替青葙子等混伪品问题时有发生.目前,中药安全性已引起全民关注,成为中药产业化和国际化的主要挑战之一.
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蕨类药材石韦及其混伪品的psbA-trnH序列鉴定
为考察sbA-trnH序列鉴定蕨类药材的可行性,该研究以蕨类药材石韦及其混伪品作为研究对象,对其106份样品提取基因组DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其叶绿体sbA-trnH序列,并采用Mega6.0软件进行多序列比对,计算种内及种间K2P遗传距离,采用大似然法(ML)构建系统聚类树.结果表明:石韦药材3个基原植物的psbA-trnH序列种内大遗传距离均小于其与混伪品的种间小遗传距离;ML树显示石韦药材可与其混伪品明显分开;psbA-trnH序列可作为蕨类药材的DNA条形码,能准确、稳定鉴定蕨类药材石韦及其混伪品.
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基于形态特征和DNA条形码技术的维吾尔药材沙枣基原鉴定
该研究从形态学及分子生物学角度研究新疆维吾尔医常用药材沙枣的基原是否为胡颓子属3种沙枣.随机选择不同产地3种沙枣的叶片、花、果实,通过形态学比较外观差异;使用DNA条形码ITS2序列对新疆3种17份沙枣ITS2序列进行PCR扩增和测序,比较17份样品ITS2序列种内和种间变异、采用NJ树法及ML法对其亲缘关系进行分析,结果表明新疆胡颓子属3种沙枣叶片、花、果实均无明显区别特征,肉眼不易区分;沙枣、尖果沙枣、东方沙枣ITS2序列长度变化范围为220 ～223 bp,平均GC质量分数为61.9％,单倍型数分别为4,3,3,NJ树及ML树均不能将三者区分.因此,从分子生物学角度看,新疆胡颓子属3种沙枣可能为同一起源,均可作为维吾尔药材沙枣的基原植物,但需进一步结合其分布、化学成分和药理药效等因素进行综合深入的研究.
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中国动物药材DNA条形码数据库
课题组联合相关研究者开展动物药材DNA条形码分子鉴定研究,并结合分析GenBank序列,采用BLAST分析防错、系统树分析防错和Barcoding Gap检验防错等方法核验序列的可靠性,构建了中国动物药材DNA条形码数据库.该库由样品数据库、序列数据库和文献数据库组成,包含800余种动物药材和大量动物药材混伪品及密切相关物种.中国动物药材DNA条形码数据库可以通过中药材DNA条形码鉴定系统(www.tcmbarcode.cn)进行网络访问并实现未知动物样本的DNA条形码鉴定.该研究首次构建统一的中国动物药材DNA条形码数据库,对动物药材鉴定、资源可持续利用和濒危物种保护均有重要意义.
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基于ITS2条形码的中药材天南星及其混伪品DNA分子鉴定
该研究收集天南星及其混伪品7种,共58份样品,通过DNA提取和PCR扩增,经注释后获得其ITS2条形码,然后进行序列变异分析和NJ树聚类分析.结果表明天南星3种基原天南星、异叶天南星和东北天南星的种内K2P距离均小于其种间K2P距离,在NJ聚类树上天南星3种基原分别聚为独立的支.天南星3种基原与天南星混伪品聚为不同的支.因此,ITS2作为DNA条形码可以鉴定天南星3种基原及其混伪品,DNA条形码技术可为天南星及其混伪品的鉴定提供新的方法.
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白术与苍术及其混伪品DNA条形码鉴定研究
药材白术与苍术为苍术属植物,为常用健脾之要药,但二者功效不完全相同,古代对二者未进行区分,现代用药也容易将其混用,为了确保用药安全,该文采用ITS2序列对药材白术与苍术及其混伪品进行DNA条形码鉴定研究.白术与苍术的3个基原物种(苍术、关苍术和朝鲜苍术)ITS2序列均为229 bp.13条白术的序列仅在98 bp处有C-G变异,平均GC含量为69.42％;4条苍术序列无变异位点;关苍术与朝鲜苍术的种内大K2P距离均为0.013.白术、苍术、关苍术和朝鲜苍术种内大K2P距离均小于与混伪品的种间小K2P距离.邻接(NJ)法构建的系统聚类树,白术、朝鲜苍术序列能各自聚为一支,关苍术与苍术聚为一支,但都能与混伪品明显分开.ITS2序列在药材白术与苍术及其混伪品的鉴定方面具有很好的鉴别效果.
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金银花品种的本草考证
金银花是中国传统的药用品种.该文通过系统地梳理中国历代本草文献中所记载的药用金银花的植物形态,指出传统中医使用的金银花具有缠绕藤本;茎微紫色,有被毛;叶对生,卵状心形,两面皆有被毛;一蒂双花,单花唇形,花冠长3.2 cm左右,花蕊长,花开先白后黄,总花梗单生于小枝叶腋且总苞片叶状卵形,花期3月中旬到5月中旬等特征.在忍冬科各种植物中,仅忍冬科忍冬Lonicera japonica Thunb.一个品种符合传统药用金银花的植物学特征,应作为正品药用金银花的品种使用.
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基于ITS2条形码鉴定柴胡与大叶柴胡
为准确鉴定柴胡与大叶柴胡,该研究共48份柴胡、大叶柴胡药材,扩增ITS2序列并进行测序,采用CodonCode Aligner软件进行序列拼接,用软件MEGA5.0分析比对确定不同的单倍型,并基于K2P模型进行遗传距离等分析.采用相似性搜索法、近距离法、构建邻接树(NJ树)法对柴胡与大叶柴胡进行鉴定.结果显示柴胡与大叶柴胡种间小K2P距离为0.049,远远大于柴胡种内大K2P距离0.013.NJ树显示大叶柴胡独自聚为一支,可明显与柴胡区分.因此应用ITS2条形码可以准确鉴定柴胡及大叶柴胡.
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名贵动物药材穿山甲的DNA条形码分子鉴定研究
利用COI序列作为DNA条形码对名贵珍稀动物药材穿山甲及其混伪品进行鉴定,为穿山甲药材分子鉴定提供科学依据.该实验采用试剂盒法提取穿山甲及其混伪品的基因组DNA,通过PCR扩增和双向测序,应用CodonCode Aligner软件进行校对拼接,采用MEGA 6.0软件对所有7个物种的56份样品进行序列比对,构建邻接(NJ)树.结果表明穿山甲药材COI序列扩增成功,所构建的NJ树结果显示穿山甲及其混伪品均可明显区分.因此,基于COI序列,应用DNA条形码技术可有效鉴定名贵动物药材穿山甲及其混伪品,为其市场监管提供了新的技术手段.
