中国应用生理学杂志
Chinese Journal of Applied Physiology 중국응용생리학잡지
- 主管单位：
- 主办单位： 中国生理学会,军事医学科学院,卫生学环境医学研究所
- 影响因子： 0.80
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-6834
- 国内刊号： 12-1339/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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金属硫蛋白在心肌细胞保护中与抗氧化酶的关系
目的：探讨金属硫蛋白(MT)在心肌细胞缺氧／复氧损伤(H／R)和预缺氧(HPC)保 护中与抗氧化酶的关系。方法：建立培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧模型，检测 HPC、锌诱导、外源MT和MT抗体等处理下，心肌细胞MT含量变化及抗氧化酶(SOD，CAT，GS Hpx)活力的相应变化。结果：HPC和锌诱导组MT含量及抗氧化酶的活力均显 著高于H／R组P<0．05、P<0.01)：外源MT处理后 SOD活力显著高于对照组（ P＜0．01)，CAT和GSHpx活力虽然显著低于对照组但显著高于H／R组(P＜0．01)；使用M T抗体后，酶活力低。结论：MT参与HPC的心肌细胞保护作用，并通过保护 抗氧化酶的活力的机制减轻H／R所致的心肌损伤。
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FLT3配基在人骨髓基质细胞系中的基因转移与表达
目的：研究逆转录病毒介导的 FL在骨髓基质细胞系 HFCL中的表达。 方法：采用脂质体法将重组质粒 pLFSN／HFCL和空载体 pLXSN／HFCL转染包 装细胞PA317，G418筛选抗性克隆，用抗性克隆上清液感染 HFCL。RT-PCR和基因组 DNA-P CR检测外源基因mRNA水平的表达及染色体的整合，小鼠CFU-GM集落法检测FL生物学活性。 结果：在mRNA水平有FL的表达，染色体基因组中整合有标记neo基因和FL基 因。活性测试结果显示转染的骨髓基质细胞分泌FL。结论：提示骨髓基质细 胞可作为基因治疗的靶细胞。
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缺血再灌后血管内皮空泡的形成与内皮的损伤
目的：在活体上探讨缺血再灌后血管内皮细胞损伤及白细胞、血小板 与内皮之间粘附的变化。方法：用失血及再回输血液造成缺血再灌流模型， 在高倍显微镜下观察肠系膜微血管内皮损伤及血细胞粘附的变化。结果：缺 血再灌后1～3 h细静脉、集合毛细血管内出现白细胞、血小板的粘附，血管内皮水肿、管 壁增厚。有的血管内皮细胞的胞浆形成圆丘形的空泡。空泡从血管内皮突入管胺、空泡直径 10～30 μm多出现在细动脉内，在同一根血管内可同时出现几个空泡，大的空泡几乎占据血 管腔的2／3。结论：缺血再灌后血管内皮水肿及空泡形成，显示内皮细胞的 严重损伤。
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甲低对新生早期大鼠海马及齿状回Goα mRNA的影响
目的：研究甲状腺功能低下(甲减)对围生早期大鼠海马及齿状回 Goα mRNA 表达的影响。方法：采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术，观察7 d 龄围生期甲减及正常Wistar大鼠海马CA1-4区及齿状回Goα mRNA的表达状况。结 果：7 d龄甲减鼠脑海马各区及齿状回 Goα mRNA的表达明显高于对照组，以 CA3 、CA4为显著。结论：在鼠脑发育过程中，甲状腺激素对围生早期海马及齿 状回Goα基因的表达具有负调节作用。
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强啡肽A1-13对谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀的影响
目的和方法：探讨脑水肿发病的细胞机制，采用［3H］OMG摄取的方法测 定细胞含水量，观察DynA对谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀的影响。结果：①给予0．5，1．0，10．0 mmol／L的谷氨酸作用1 h均可引起细胞的含水量增加；②Dy nA可显著降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠 C6胶质瘤细胞含水量；③κ阿片受体拮抗剂nor-BNI 可阻断 DynA1-13降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠C6胶质瘤细胞含水量的作用。结论 ：谷氨酸可诱导大鼠 C6胶质瘤细胞肿胀；DynA1-13可通过激活κ阿片受体抑制 谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀。
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肿瘤坏死因子致肺微血管内皮细胞单层通透性损伤的实验研究
目的和方法： 用针头式滤器检测肿瘤环死因子(TNF)作用前后及三 种药物干预时大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)单层通透性的变化，并用免疫组化的方法检测 TNF作用前后细胞F-肌动蛋白的改变。结果：TNF作用30 min、60min、90 min通透系数Kf值较致伤前显著增高；分别加福莫特罗(FOR)、山莨菪碱或霍乱毒素(CTX)干 预时Kf值均显著低于TNF组。而TNF作用90 min，RPMVEC F-肌动蛋白发生明显解聚：分别加 POR、山莨菪硷或CTX干预时F-肌动蛋白无明显变化。结论：TNF诱导RPMVEC 单层通透性增高的机制与细胞F-肌动蛋白解聚有关，FOR、山莨菪碱和CTX可能通过抑制F- 肌动蛋白解聚而抑制TNF诱导的RPMVEC单层通透性增高。
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丹参注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹NOS活性的影响
目的：研究丹参注射液(SM)对庆大霉素(GM)耳中毒豚鼠耳蜗血管纹一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响及其与听阈的关系，探讨SM对GM耳毒性损伤的保护作用。方法：应用NADPH-黄递酶(NADPH-d)组织化学染色及图象分析技术，并结合听性脑干反应(ABR) 测试。结果：SM+GM组耳蜗血管纹NOS活性和ABR阈值均明显低于GM组(P＜0． 01)；且各组NOS活性变化与ABR阈移高度相关(rcontrol＝-0．9464；rG M＝-0．9117；rSM+GM＝-0．8958，P＜0．01)。结论：SM可通过降低耳蜗血管纹NOS活性以减轻GM的耳毒性损伤，从而改善听功能。
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脑内P物质在谷氨酸兴奋腹内侧核引起的升压反应中之作用
目的：分析谷氨酸兴奋下丘脑腹内侧核(NVM)引起升压反应的机制。[ HTH 方法：大鼠脑内或静脉注射不同药物，记录血压和心率的变化。结果 ：①L-谷氨酸(Glu)兴奋NVM、P物质(SP)注入背内侧核(NDM)室旁核(NPV)或延髓头 端腹外侧区(RVL)均引起升压反应；②NVM升压反应可被双侧NDM、NPV或RVL内预先注射［D- Pro2,D-Phe7,D-Trp9］-P物质(SP拮抗剂)衰减，但RVL内注射阿托品无此效应；③ 酚妥拉明(i.v.)也能使NVM升压反应减小，而心得安或甲基阿托品(i.v.)对该升压反应无 影响。结论：兴奋NVM可通过NDM(SP受体)，作用于NPV(SP受体)升压区和RV L(SP受体)-交感缩血管神经系统产生升压反应。心交感和心迷走神经不参与该反应。
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过量皮质酮致原代培养的大鼠海马神经元死亡方式的研究
目的和方法:以体外原代培养的大鼠海马神经元为研究对象，采用原 位染色的方法，对不同剂量的皮质酮（CORT）致海马神经元死亡的方式进行研究。结果：在CORT作用下，海马神经元不仅会发生快速的坏死，而且还会发生慢性的 凋亡；并且，随着CORT剂量增大和作用时间延长，海马神经元坏死和凋亡的发生率会随之增 高。结论：海马神经细胞坏死和凋亡的发生，可能与CORT抑制神经元能量代谢的 程度和增高神经元对谷氨酸神经毒性的敏感性有关。
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大鼠旁巨细胞外侧核呼吸神经元的类型及其对某些递质类药物的反应
目的和方法:用细胞外记录法和多管微电极微电泳法在36只麻醉自主呼吸的SD大 鼠，系统探查旁巨细胞外侧核尾半侧(cPGCL)呼吸神经元(RNs)的类型及该区的递质受体情况 。结果:在14只大鼠系统探查，记录到39个RNs，包括吸气神经元24个、呼气神经 元12个和跨时相神经元3个。在另22只大鼠，观察到微电泳谷氨酸钠(L-Glu)使12／14个RNs 兴奋，γ-氨基丁酸(GABA)使全部受试RNs抑制(n=22)；对NMDA受体拮抗剂DL-2-氨基 -5-磷酸戊酸(AP5)、GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱(BIC)有兴奋、抑制和无作用三类 效应；AP5部分阻断大部分受试神经元(6／9个)对L-Glu的兴奋反应，BIC部分或完全阻断大 部分受试神经元(9／11个)对GABA的抑制反应。结论：PGCL是呼吸调控的重要中 枢部位之一，该区可能存在起神经递质作用的内源性L-Glu和GABA及兴奋性氨基酸(包括NMD A和非NMDA)受体和GABAA受体，它们可能介导PGCL对呼吸的调控。
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高压氧对脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡作用的研究
目的和方法：应用TUNEL检测技术，对沙土鼠前脑缺血20 min后再灌注3 d模型， 用HBO治疗连续3 d。观察HBO作用下海马CA1区神经元凋亡变化，研讨HBO对脑缺血再灌注 损伤的疗效及其机理，为临床应用HBO治疗疾病提供理论依据。结果：沙土鼠脑 缺 血再灌注3 d后海马CA1区大量神经元凋亡，HBO治疗组凋亡细胞数明显减少(P<0．01 )，并以0．25 MPa HBO治疗组为佳。结论：HBO治疗对海马神经元损伤有保 护作用，减少神经元凋亡，为高压氧治疗缺血性损伤的疗效机理之一。
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温度对下丘脑神经元膜上延迟整流性K+通道活动密度的影响
目的:探讨温度对下丘脑神经元延迟整流性K+单离子通道(Ik）活动密度的影 响。方法:采用膜片钳细胞贴附式技术观察和记录32℃、37℃和39℃时下丘脑神 经元Ik的活动。结果：温度升高，记录到封接膜片上Ik活动的机率增大，由 32℃时的34．6％升至39℃时的51．0％，而且出现多通道活动；Ik通道活动密度明显增 高（P<0．05），32℃、37℃和39℃时膜上的通道活动密度分别为0．71、1．22和1．52 channels/μm2。 结论：温度升高，下丘脑神经元上Ik通道更多地处于活动 状态，这可能有利于下丘脑神经元对体温活动的调节。
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切割延髓、酸碱度及温度对新生大鼠离体延髓-脊髓标本呼吸节律性放电的影响
目的和方法：在新生大鼠离体延髓--脊髓标本上，用吸附电极记录 膈神经根-颈4、颈5腹根(C4v，C5v)和舌下神经根(Ⅻ)节律性放电活动(r hythmical discharge activity，RDA)，并观察其在对延髓微切割、改变灌流液pH值及温度 后RDA的变化。结果：①新生鼠离体延髓一脊髓标本在正常灌流条件下，可 存活6～8 h，持续4 h可稳定记录到C4v、C5v和Ⅻ的RDA，且两者完全同步，为 呼吸节律性放电(respiratory RDA，RRDA)；②从延髓头端向尾端切割(每次100 μm)，切至 闩前500 μm水平时，RRDA不变，进一步切割，至闩水平，RRDA消失；③从尾端向头端切割 ，切至舌下神经根下缘水平，RRDA不变，进一步向头端切割，RRDA逐渐消失；④从延髓背侧 向腹侧水平切割，切割至背→腹一半水平时，RRDA不变，进一步向腹侧切割，RRDA逐渐消失 ；⑤灌流液的pH值从7．35降至6．85，RRDA逐渐增强，而从6．85降至4．5时，逐渐减弱至 消失。pH值从7．45上升到7．85，呼吸频率逐渐减漫，放电幅度增强；⑥温度由27℃上升到 37℃，RRDA逐渐增强；由38℃上升到41℃，RRDA逐渐减弱；温度由27℃降23℃，RRDA逐渐减 弱。温度为42℃或22℃时，RRDA消失。结论：面神经后核内侧区可能是呼吸 节律起源的部位，且此区域的神经元对温度及酸碱度变化敏感。
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低氧对培养的不同内径的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的和方法：分离培养三种不同内径的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)，用3H-T dR掺入速率和细胞计数作为细胞增殖的指标，观察低氧对其增殖作用的影响。结果 ：低氧对三种不同内径的PASMCs(内径分别为＞1000 μm、500～800 μm、300～400 μm)增殖促进作用显著不同，其3H-TdR掺入速率和细胞计数分别增加23．5％和 11．1％ 、60．0％和33．8％、141．4％和52．0％。选择对低氧敏感的PASMCs(内径为300～400 μm),进一步探讨低氧促PASMCs增殖作用的细胞机制：钙拮抗剂verapail、蛋白激酶C抑制 剂staurosporine(Stau)和细胞Na-H交换抑制剂amiloride可显著降低低氧情况下PASMCs3 H-TdR掺入速率和细胞计数。结论：低氧对三种不同内径的PASMCs增殖促进 作用显著不同；Ca2+、蛋白激酶C和Na+-H+交换的激活，可能是低氧促PASMCs增 殖的重要胞内信息转导机制。
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卡托普利防治心肌肥厚的效应及其机理探讨
目的和方法： 应用大鼠腹主动脉狭窄心肌肥厚模型，观察血管紧 张素转换酶抑制剂卡托普利防治心肌肥厚的作用，以及该作用与心肌组织内儿茶酚胺、氧自 由基、相关离子代谢之间的关系。结果：①应用卡托普利后，大鼠HW、LVW 、HW／BW、LVW／BW各指标与心肌肥厚组比较均明显降低；②卡托普利可明显抑制心肌NE、D A含量的降低，E含量的增高；③卡托普利可增强心肌组织SOD和GSH-Px活性，减少LPO的生 成；④卡托普利可明显抑制心肌Na+、Ca2+含量的升高和心肌K+含量的降低。结论：卡托普利能有效防治心肌肥厚的发生。其作用机理不仅与卡托普利直接 抑制体内RAS代谢有关，而且还与它调整和改善了心脏局部儿茶酚胺、氧自由基、相关离子 代谢密切相关。
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微囊化胰岛B细胞系体外生长和分泌功能的研究
目的：研究海藻酸钠-多聚赖氨酸-海澡 酸 钠（APA）微囊化胰岛B细胞系BTC6-F7的生长和分泌规律，探索其作为生物人工胰岛的可能 性。方法：以微囊静电液滴发生器制作APA微囊化BTC6-F7细胞，体外培养并定 期测定微囊化细胞的生长和胰岛素分泌。结果：在实验观察的90 d内，BTC6-F 7细胞可在 微囊内以细胞团的形式生长、存活。囊内细胞总数随培养时间的延长而增加,但细胞活率呈 下降趋势,胰岛素分泌与囊内活细胞数的变化规律一致,初呈上升趋势,然后较长时间维持 在相对恒定的水平。结论：本研究所制备的APA微囊化胰岛B细胞可在较长时间内 保持生长、存活和分泌功能，为进一步发展生物型人工胰岛奠定了基础,并可用于糖尿病的 发病机理和治疗研究。
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低氧预处理对低氧／复氧心肌能量代谢的作用
目的：研究低氧预处理(HPC)对心肌的保护作用。方法：借助 31 P-NMR图谱技术，在模拟Langendorff离体灌流大鼠心脏的正常生理条件下 ，跟踪心肌高能磷酸化合物含量的动态变化。结果：在30 min低氧期，PCr、ATP 相对含量及PCr／Pi值逐渐减小，但HPC组减小的速度比对照组慢；而在复氧期， HPC组能 提高心肌高能磷酸化合物含量的恢复程度，特别在复氧初期， HPC组PCr、 ATP相对含量及P Cr／Pi值立即有了恢复；在本实验中，HPC对pHi的改善不显著。结论： HPC能降 低后续长时间低氧及复氧阶段的心肌能量代谢，对心肌的低氧／复氧损伤具有保护作用。
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间歇性低氧对大鼠海马长时程增强电位的影响
目的：研究间歇性低氧对大鼠海马神经元突触可塑性的影响。 方法：大鼠受间歇性低氧处理后，用脑立体定位仪定位，观察海马长时程增强电位( LTP)的变化。结果：间歇性低氧大鼠LTP幅值显著低于对照组。结论：间歇性低氯可影响LTP幅值，提示间歇性低氧可能使大鼠海马神经元的突触可塑性发生变化。
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高原移居者红细胞滤过指数的变化及其机理
目的：探讨不同海拔和同一海拔高度低氧环境不同血色素范围对高 原健康人红细胞流变学特性的影响及其可能发生的机制。方法：检测不同 海拔高度(2 260 m、3 300 m、4 080 m)对320健康人EFI、SOD和MDA的影响。结果： 随海拔高度的升高，高原健康人EFI和MDA含量明显升高，而红细胞SOD活性明显降 低；EFI与MDA呈正相关，而与红细胞SOD活性呈负相关。同一海拔低氧环境Hb增高者，EFI和 MDA升高，而红细胞SOD活性降低；随海拔升高，EFI和MDA含量明显升高，而红细胞SOD活性 明显降低。结论：不同海拔红细胞流变学和氧自由基代谢差异性的形成， 低氧环境起核心作用；而随海拔高度升高和同一海拔低氧环境自由基代谢异常加重者是导致 高原健康人红细胞流变学异常的中心环节。
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运动训练对小鼠心肌线粒体能量转换功能增龄性改变的影响
目的和方法：以C57BL／6J雄性小鼠跑转笼为运动方式，研究从5月龄开始进行为 期8个月或15个月的运动训练对小鼠心肌线粒体能量转换功能的影响。结果：以 α-酮戊二酸为底物时，线粒体RCR、 ADP／O均呈现随年龄的增加而下降，尤其以衰老晚期 (小鼠20月龄)下降明显。结论：衰老过程中氧化磷酸化偶联程度降低，能量产出 减少。长期运动训练的小鼠心肌线粒体出现适应性变化，表现为线粒体功能随增龄而下降的 程度减小。
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急性运动所致线粒体某些功能的改变及胆红素的保护作用
目的：探讨急性运动所致疲劳的机理以及胆红素的保护作用。方法：将Wistar大鼠随机分为对照组、运动组、运动恢复组、胆红素处理运动组 、胆红素处理运动恢复组，共5组，分别灌胃1 μmol/Kg体重的胆红素或生理盐水4周，负重 (体重的5％)游泳2 h后处死，测定有关指标。结果：急性运动后即刻大鼠腓 肠肌胞浆、线粒体Ca2+含量明显升高，恢复12 h后线粒体Ca2+含量呈继续升高 的趋势；线粒体Ca2+-Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性明显下降，12 h后有 所回升；胆红素处理后可以明显抑制这些指标的改变，但线粒体Mg2+-ATP酶活性的 变化在胆红素处理组和未处理组间无明显差异，均明显低于对照组，只是胆红素组的恢复相 对较快。结论：生理浓度的胆红素可能通过抑制线粒体某些功能的改变而保 护细胞免受急性运动所致的损伤，从而延缓疲劳的发生，加速恢复。
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胰岛素促进血管内皮细胞产生一氧化氮的实验研究
目的：探讨胰岛素对血管内皮细胞增殖、 NO产生和 NOS基因表达的影响。方法：培养牛主动脉内皮细胞，测定培养上清液中NO氧化产物NO-2的水平 并应用定量RT／PCR技术检测内皮细胞 NOS mRNA的表达水平。结果：①胰岛 素对大血管内皮细胞无细胞毒作用，也不影响细胞增殖;②在1～15 μg／ml浓度范围内，胰 岛素加强内皮细胞释放NO，且呈剂量依赖的方式，NOS特异性抑制剂L-NAME可阻抑之;③胰 岛素轻度增加 NOS mRNA表达水平，但无统计学意义。结论：胰岛素既不影 响大血管内皮细胞增殖，也不影响内皮细胞 NOSmRNA表达水平，但以剂量依赖的方式加强内 皮细胞产生NO,推测其诱导NO产生的机制可能是通过酶活性的诱导，加速NO的合成。
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NO和ANP对内皮素引起大鼠肾神经传入放电增加的阻抑作用
目的和方法：采用电生理学技术观察一氧化氮(NO)和心房钠尿肽(A NP)对肾动脉内注射内皮索(ET)所致麻醉大鼠肾神经传入放电(RANA)的影响。结 果：①肾动脉内注射ET-1后平均动脉压(MAP)先有短暂的降低随后为较显著的持 久增高，RANA明显增加；②肾动脉内分别注射NO前体L-Arg和ANP后，ET-1的上述效应 即被阻抑。结论：肾动脉内注射ET-1引起RANA明显增加，而此效应可 被同一途径注射NO和ANP所消除。
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脑缺血／再灌对海马磷酸酪氨酸蛋白含量的影响及其机制的研究
目的和方法：采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎（BCAO）前脑缺血模型，研究N -甲基D-门冬氨酸（NMDA）受体（NR）非竞争性拮抗剂氯胺酮（ketamine，KT）、L-型电 压门控钙离于通道（L-type voltage gated calcium channel，L型VGCC）拮抗剂硝苯吡啶 （Nifedipine ND）及非NR拮抗剂 6，7-二硝基喹恶啉上卫四（6，7-dinitroquinoxaline -2，3dione DNQX）对沙土鼠脑缺血及缺血／再灌海马可溶性（S3）、突触体（P2）和 颗粒性（P3）部分中磷酸酪氨酸蛋白（p-tyr-pr）含量变化的影响。结果： ①缺血15 min，三部分（P2,P3,S3）p-tyr-pr含量均下降，而S3部分p-tyr-pr 含量下降更明显；随着脑缺血再灌时间的延长，三部分P-tyr-Pr含量均逐渐升高。S3部 分恢复快，P2与P3部分相比，升高的速度较慢，但升高的幅度较大，且再灌后期变化不大；②脑缺血前腹腔注射KT或ND，均可部分地拮抗缺血再灌引起的p-tyr-pr含量的升高， 而DNQX对此无影响。结论：缺血／再灌引起的p-tyr-pr变化与NR通道及L型VGCC有关，而与非NR无关。
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蝎毒中枢镇痛机制的初步探讨
目的：研究BmK蝎毒是通过何种受体实现其中枢镇痛作用的;外侧隔核是否是 B mK蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部位之一。方法：用辐射热一甩尾法测定痛阈, 用玻璃微电极记录束旁核的单位放电；通过不锈钢套管向侧脑室和外侧隔核内微量注射0．0 1％ BmK蝎毒。结果：向大鼠侧脑室注射2 μl 0．01％蝎毒可明显升高痛阂。该 效应可被侧脑室注射2 μl 0.25％纳洛酮完全翻转；向隔核内注射0．5 μl 0．01％ Bmk蝎 毒，分别对束旁核中的71％(15／21)痛兴奋单位和83％(5／6)痛抑制单位对痛刺激的反应减 弱，而对痛无关单位的电活动无明显影响。结论：BmK蝎毒的中枢镇痛作用可能 主要是通过吗啡受体实现的;隔核是Bmk蝎毒产生中枢镇痛作用的重要部位之一。
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谷氨酸对海马神经元钙信号的影响
细胞内游离钙作为一种重要的第二信使，与细胞功能、细胞代谢和信号转导密切相关， 细胞内钙信号的失调会引起细胞功能异常。这也是某些神经系统疾病的重要环节，如癫痫、 Alzheimer病、脑水肿、细胞凋亡等。谷氨酸的毒性作用诱发的Ca2+跨膜内流和细胞 内游离钙平衡的失调可能参与癫痫的病理过程。本实验应用单细胞Ca2+显微荧光测量 技术，对其进行了初步研究。1 材料和方法 (1)试剂 胎牛血清、HEPES、EGTA、Fura-2／AM、胰蛋白酶、MK-801(Sigma产品)，1 640培养基(Gibco产品)，其它的试剂为国产分析纯。 (2)细胞制备 从新生1～3 d的Wistar大鼠无菌取出海马，在Hanks液内剪碎、吹打，在 37℃下0．1％胰酶-EDTA消化 10 min，离心、洗涤3次，接种于培养板中涂过0．01％poly -lysine的盖玻片上，贴壁后加入1 ml 1640培养液，置CO2培养箱，每隔3 d换培养液一 次。 (3)单个细胞［Ca2+］i的显微荧光测量 用 Hanks液冲洗细胞两次，加入荧光 染料Pura-2／AM(终浓度1．6 μmol/L)孵育15～30 min(37℃)。细胞外液为Hanks液，无 钙细胞外液则将Hanks的CaCl2以MgCl2代替。 实验用的显微荧光测量系统包括：倒置显微镜(Zeiss Axiovert100)、单色光系统(TILL 公司)、计算机(Macintosh Quadra 650)、X-CHART软件(HEKA公司)。用计算机控制氙光源 以提供340 nm和380 nm波长的激发光。荧光信号由光电倍增管转化为电信号送入计算机进 行处理。钙浓度由以下公式计算：［Ca2+］i＝Keff*(R-Rmin)／(Rmax- R)，R=F1/F2。 其中Keff为有效结合常数，F1、F2分别为340 nm和380 nm波长单色光激发的荧光 强度。Rmin、Rmax分别是在零钙浓度和高钙浓度(10 mmol/L)时的荧光比值。
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抗氧化剂和糖皮质激素抑制缺氧／复氧时肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达
细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-l，ICAM-1)主要在内皮细 胞表达，作为白细胞β2整合素家族的配体在中性粒细胞与内皮细胞紧密结合和随后进入 缺血组织中起重要作用。通过降低ICAM-1的表达会减轻缺血／再灌注损伤，这点已在多个 脏器的动物实验中得到证实。已有研究发现糖皮质激素和抗氧化剂，能降低细胞因子刺激下 升高的ICAM-1，本研究旨在探讨抗氧化剂二硫代氨基甲酸吡 咯烷(pyrrolidine dithiocar bamate，PDTC)和糖皮质激素中的地塞米松(Dexamethasone，Dex)对缺氧／再给氧(hypoxia ／reoxygenation，H／R)条件下对体外肾小球血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。1 材料与方法 (1)试剂 纯化抗鼠CD54单克隆抗体(IgG)和FITC标记抗鼠IgG二抗(深圳晶美生物工程有限 公司)，Dex和PDTC(美国SIGMA公司)，RPMI 1640细胞培养基(美国GIBCOBRL公司)，小牛血清 (杭州四季青生物公司)。 (2)细胞培养 小鼠肾小球血管内皮细胞株ESDO由长征医院肾内科提供。复苏后，加入 含20％灭活小牛血清的1640培养液，25 cm细胞培养瓶生长，待1～2 d细胞长满瓶底后，以1 08/L浓度接种传代。细胞存活率用台盼蓝染色判断。 (3)方法 向氧分压可调控的Queue细胞培养箱中注入95％的氮气和5％的CO2混合气体 ,使氧分压为零，为缺氧条件。注入空气和5％CO2混合气体为再给氧。缺氧时间为l0 h， 再给氧时间为6 h，PDTC的浓度为50 μmol/L、5 μmol/L，Dex为l00 μmol/L、1 μmo l /L，分别在缺氧前30 min和再给氧时加入。ICAM-1表达的测定：将生长成单层的内皮细 胞用0．2%EDTA在37℃消化l0 min，PBS洗涤后，调整浓度为108/L。取调整好的细胞悬液l 00 μl,加入CD54单克隆抗体20 μl，混匀后室温避光孵育30 min，加FITC标记IgG二抗2 μl 孵育30 min，PBS洗涤2次，固定。阴性对照以FITC标记的同型抗体代替。24 h内EPICS-XL 型流式细胞仪(美国Coulter公司产品)检测。每个样本分析5000个细胞，结果以阳性细胞的 百分率(％)表示。
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活体部分小肠移植受体围术期营养支持及其评估
由于小肠属高免疫源性器官，因此小肠移植被视为所有大器官移植中困难的一种。1 999年5月20日，我们为一例短肠综合症患者成功地实施了国内首例活体部分小肠移植术至今 己存活17个月。现将受体术前及术后2个余月的营养支持情况及其效果作一简介。1 材料与方法 (1)一般资料 患者男，18岁，身高185 cm，因肠扭转致肠坏死于98年9月在当地医院行小肠 大部分切除术，残余小肠40 cm，术后并发空回肠吻合口瘘，于同年9月26日以“短肠综合症 ”收住我科，11月行肠瘘修补术，但进食后出现腹泻5～10次／d，体重降至 37.5 kg。经近 二个月的肠外营养支持，使术前体重增至47.5 kg，遂于99年5月20日在全麻下行活体部分小 肠移植。供体为患者的父亲，44岁，自愿为其子提供部分小肠。供体和受体分台同时进行手 术。取供体带蒂末段回肠150 cm，UW液灌洗后，低温保存备移植。受体开腹显露下腔静脉及 腹主动脉，将移植肠的动脉、静脉分别与受体腹主动脉和下腔静脉行端侧吻合。移植肠近端 与受体空肠近端行端端吻合，移植肠远端与受体小肠远端行侧端吻合，移植小肠末端作造瘘 术，并经胃造瘘管置入空肠营养管，用于术后胃肠道给药和营养。手术顺利，历时10 h。术 后31 d脱离肠外营养，进普食。 (2)围术期营养支持 ①术前营养支持采取以肠外营养为主，肠内营养为辅的原则，肠外营 养热量从25 kcal／(kg.d)开始，逐渐增加至40 kcal/（kg.d)，其中脂肪约占非蛋白热 卡的40％，非蛋白热卡总量［cad］：氮［g］约为130∶1。肠内饮食选用低脂高蛋白、易消 化吸收的食物，约800 kcal/day。肠内、肠外总热卡约为3000 kcal／d。②术后营养支持依 据肠功能恢复状况，按五个阶段不断调整肠内、肠外营养的成份和热量，从全肠外营养支持 ，逐渐过度到肠内营养支持。第一阶段(术后第1～10 d)：按代谢支持原则给予全肠外营养 支持，总热量约2000 kcal，每日静脉输注白蛋白、球蛋白、8.5％乐凡命以及25％糖、20％ ～30％脂肪乳剂。同时经胃造瘘管术后第1 d肠内灌注生理盐水 200 ml/d；自第 3 d起，逐渐替换给米汤50～350 ml／d，果汁40～240 ml／d和菜汁100～200 ml／d，以及 谷 参肠胺0．6 g口服3次／d。自第8d起，每100 ml米汤加1个鸡蛋清(约5 g蛋白质)。第二阶段 (术后第11～30 d)：系肠外和肠内营养混合使用期。先以肠外营养为主，肠内营养为辅，由 微量输注泵向肠内灌注3％～20％低脂类要素(美国，美赞臣公司)200～1000 ml／d。自第21 d起，以肠内营养为主，逐渐添加半流饮食，减少肠外营养，每日热量降至25 kca/(kg.d) 。第三阶段(术后31 d起)：于术后第31 d起完全脱离肠外营养，顺利过度到全肠内营养支持 。随着移植小肠功能恢复、营养状况改善和体重增加，适当减少氮源的供给，依非蛋白热卡 与氮的比例130 kcal:1g供给，每日提供总热量达60 kcl/kg，其中脂肪约占非蛋白热卡的38 ％。
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大鼠同种异体肾上腺髓质植入蛛网膜下腔抗伤害性感受作用的实验研究
肾上腺髓质嗜铬细胞具有分泌功能，植入中枢神经系统有可治疗巴金森氏病的报道。本实验 旨在对大鼠进行同种异体肾上腺髓质移入蛛网膜下腔，观察其存活和分泌情况及对疼痛的影 响，为临床用类似方法，有效地治疗慢性痛提供基础。1 材料与方法 (1)动物和试剂 体重200～300 g健康雌性大鼠100只，由山东医科大学动物实验中心提供。 安全弗氏佐剂由山东医科大学免疫教研室配制。其余药剂为国产分析纯。 (2)移植手术 用1%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉，动物取俯卧位固定。取出肾上腺后迅 速放入0℃的Hank's液中，在解剖显微镜下迅速分离出肾上腺髓质，再用无菌眼科剪剪成体 积小于0.5 mm3的小块，让其悬于Hank's液中。然后迅速对另一只大鼠在T12-L 2处进行椎板切除术，暴露出2～3 mm的硬脊膜。在解剖显微镜下轻轻划开硬脊膜下腔。把悬 于0℃的Hank's液中的肾上腺髓质组织块通过划开的小口移植入蛛网膜下腔。移植组(n= 40）移植2个肾上腺的髓质组织块。假手术组(n=20)移植同等量的肌肉块(直径<0.5)。 缝合肌肉和皮肤，观察其运动，异常者丢弃。 (3)动物分组 将动物分为两组：①假手术组；②移植组。为进一步确定移植组大鼠尼古丁 刺激后，释放了哪些镇痛物质，又将移植组分为：①尼古丁+纳络酮组：注射尼古丁2 min后 注射纳络酮(2 mg/kg s.c)；②尼古丁+酚妥拉明组：注射尼古丁2 min后注射酚妥拉明(10 m g/kg s.c)。
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烫伤对大鼠下丘脑视上核、室旁核、垂体和血浆内皮素-1含量的影响
内皮素(endothelin，ET)在下丘脑含量很高，大鼠下丘脑ET主要形式是ET-1，也含有E T-3。Yoshizawa及蒋应明等报道下丘脑神经元能自身合成和表达ET-1，主要集中在视上核 (Supraoptic nucleus，SON)和室旁核(paraventricular nucleus，PVN)部位，但其功能意 义尚不清楚。ET对下丘脑-垂体-肾上腺轴具有调节作用，可促进应激情况下AVP的释放。 烫伤是一种强烈的应激刺激，同时又可引起体内渗透压的升高，因此推测重度烫伤可能影响 下丘脑ET-1合成和分泌。本实验应用放射免疫测定法，观察大鼠烫伤后不同时间下丘脑SON 和PVN、神经垂体、腺垂体和血浆中ir-ET-1含量的动态变化，以了解烫伤对下丘脑和垂体 中ET-1含量影响和下丘脑ET-1的功能。1 材料和方法 雄性Sprague-Dawley大鼠96只，体重280～320 g，随机均分为烫伤后即刻、15 min、60 min、180 min四组及相应的4个对照组。经20％尿酯腹腔麻醉(5 ml／kg)后，背部剃毛，实 验组用沸水烫背部7 s，造成20％体表面积的Ⅱ度烫伤，对照组动物背部浸入37℃水中假烫7 s。各组动物分别按上述烫后不同时间断头，收集躯干血于预冷的含抑肽酶(每ml血加500 k IU)和Na2 EDTA(每ml血加10 mg)的指形管中，4℃离心(3 000 r/min，10 min)，取血浆 置 于-40℃冰箱保存待测；同时迅速取全脑和垂体，置沸生理盐水中煮10 min，分离神经垂体 和腺垂体；自前连合平面至乳头体尾端取下丘脑，双侧包括下丘脑外侧部。用4％多聚甲醛 溶液固定24 h。用震动切片机行下丘脑冠状切片，片厚200μm，依据大鼠脑立体定位图谱 ，用不锈钢针管行打孔法取下丘脑SON和PVN组织，称重，将SON和PVN组织混在一起，加1 mo l/L醋酸匀浆提取，2 h后加入1 mol/L NaoH中和，低温离心取上清液行放射免疫测定。ET- 1放免测定试剂盒由北京解放军总医院放免研究所提供，小检出量为0．5pg。
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实验性心肌肥厚大鼠左室c-fos表达及卡托普利的作用
心肌肥厚时，心肌细胞作出适应性反应发生结构改建，这种重构与压力超负荷早期心肌细胞 原癌基因表达过盛密切相关。本文应用大鼠腹主动脉缩窄模型结合血管紧张素转化酶抑制剂 卡托普利(Cap)，研究心肌肥厚早期c-fos表达及六周后血压、心功能及酶学指标的改变， 以探讨Cap抑制心肌肥厚的可能机制。1 材料与方法 (1)动物模型复制 采用体重(250±20) g的健康、雄性SD大鼠(由本校动物室提供)，按腹主 动脉缩窄法制备压力超负荷性心肌肥厚模型，使腹主动脉残留管腔直径为0.7 mm。 (2)动物分组 动物分成两部分：第一部分：大鼠19 只，其中4只，在腹主动脉缩窄前及缩 窄后1 h、3 h、12 h分别处死，留取心脏。另15只随机均分成手术组、伪手术组、Cap治疗 组(n=5)。复制心肌肥厚模型后3 h处死动物，留取心脏，提取总RNA，检测左室c-fos mRNA表达。第二部分，大鼠30 只，随机均分成手术组(LVH，n=10，腹主动脉缩窄后未 用Cap治疗)，伪手术组(sham,n=10，行伪手术)及Cap治疗组［LVH+Cap,n=10，腹 主动脉缩窄后用Cap50 mg/(kg*d)治疗］。建立模型6周后，右颈总动脉插管，记录动脉血 压后，进一步插管入左室，测取并计算左室内压力大上升、下降速率及等容舒张期左室压 力下降的时间常数(T值)。处死动物，留取心脏标本备用。 (3)左心室c-fos mRNA表达 取左室心肌组织50 mg,一步法抽提RNA。用地高辛随机引物法 标记的c-fos探针(华美生物试剂公司，cDNA片段，1.3kb)进行斑点杂交，IBAS图象分析仪 测定杂交信号的相对光密度(IOD)。 (4)心肌重量及质膜Na+-K+ATPase活性测定 称量左室重量(LVW)及体重(BW)，计算LVW /BW。制备10%心肌匀浆，差速分离质膜及线粒体。通过检测反应液中ATP水解释放的无机磷 含量来确定酶活性。
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沈阳地区运动员冬训后全血微量元素含量与肺通气功能相关性研究
微量元素Zn、Cu、Fe及常量元素Ca、Mg在应激状态时的代谢具有重要作用。Cu在维 持机 体内环境的稳定、电子传递以及氧化磷酸化过程有重要的功能。Zn可涉及多种酶的活性。冬 训后肺通气功能的加强，会导致Hb携带O2，CO2能力增加，同时有全血微量元素的改变 ，但肺通气功能的改善与全血微量元素之间的关系尚未见报道。本文旨在探讨冬训后运动员 全血微量元素的变化及其与肺通气功能主要指标的相关性。
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模拟急性低氧大鼠血清T3，T4和下丘脑TRH含量变化
高原急性影响中，出现体重暂时性下降，食欲减退等现象。随习服的产生，代谢变化明 显减弱或消失。人类在5 000 m以上时代谢变化变得更为明显并不断发展则体脂和蛋白储备 明 显减少，血液中红细胞大量增加、血液粘稠度增大等。与此同时也产生一系列神经内分泌改 变。下丘脑-腺垂体-甲状腺轴是调节体内代谢的重要因素之一，因而HPT轴低氧应答的研 究对低氧习服和内环境的适应性反应有着重要价值。1 材料和方法 健康雄性Wistar大鼠体重(140±10)g，鼠源系中国科学院上海实验动物中心，在中科院 西北高原生物研究所动物饲养室繁殖多代。实验温度18℃。低氧模拟：使用减压舱模拟高原 高海拔低气乐低氧的方法，以实验地西宁海拔2 300 m为对照，观察两种高海拔即5 000 m(5 4．02 kPa)，7 000 m(41．04 kPa)对大鼠的影响。实验动物随机分组，放入减压舱，以140 m／min速度升至所需海拔高度：动物于舱内可自由取食和饮水。各低氧组大鼠在减压舱中 分别暴露在两种模拟海拔的持续时间分别为1 h、3 h、24 h。上午10时左右迅速断头取血， 分离下丘脑放入液氮。血清T3，T4 RIA测定使用中国原子能科学院北京同位素研究所 放免药盒。组织TRH RIA测定使用北京北方生物技术研究所放免药盒。组织TRH提取：参照Br ownstein等方法，0．01 mol/L磷酸缓冲液和0．15 mol/L NaCl中匀浆，95％甲醇提取，10 000 r／min低温离心30 min。上清液加温去甲醇，提取物放入0．25％牛血清白蛋白，0．01 mol/L磷酸缓冲液和0．15 mol/L NaCl中-40℃保存。下丘脑蛋白定量使用Lowry法。质控所 用TRH购自Sigma公司，其它试剂均采用国内产品。所有实验数据以均数±标准误( ±s)表示，采用t检验(t-test)检验差异显著性。
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豚鼠耳蜗外毛细胞外向钾电流的研究
哺乳动物耳蜗具有超常的敏感性和频率分析能力，这依赖于感觉细胞基底膜的微机械反 应。豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜存在电压依赖性K+通道、 Ca2+激活K+通道和内向 钙通道等。文献报道牛蛙壶腹嵴毛细胞有瞬息 K+电流(IA)，然而豚鼠耳蜗外毛细胞是 否存在IA，迄今未见报道。来自脑干的内侧橄榄耳蜗束传出神经纤维大量分布于外毛细胞 ，调控着外毛细胞的功能，一般认为乙酰胆碱是耳蜗传出神经递质，此外三磷酸腺苷(ATP) 对外毛细胞具有神经递质和神经调质双重作用，那么是否还有其他的递质发挥作用呢?我们 应用全细胞膜片钳技术观察了豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜的外向钾电流及乙酰胆碱和去甲肾上 腺素对Ca2+敏感的外向K+电流(Ik(ca))的影响。1 材料与方法 (1)豚鼠耳蜗外毛细胞的分离 选用耳廓反射正常的杂色豚鼠25只，雌雄不限，体重200～31 0 g。单离外毛细胞的制备参照Ashmore等的方法，将豚鼠迅速断头，取出两侧骨大泡，在人 工外淋巴液中打开听泡，剔除耳蜗骨壳，切下二至顶转耳蜗，放入含木瓜蛋白酶(Papain，0 ．5 g／L)的无钙人工外淋巴液中，在室温20～25℃条件下消化20 min，人工外淋巴液反复 冲洗二次以终止消化。在解剖显微镜下用不锈钢针将基底膜从蜗轴分离，此时单离毛细胞即 坠入液体中，静置20 min细胞贴附于浴槽底的盖玻片上。 (2)溶液及药品 人工外淋巴液(mmol/L)：NaCl 137；KCl 5．4；MgCl2 1．8；CaCl2 1．3；HEPES 5．0；Glucose 5．0。KOH调pH至7．2。 电极内液(mmol／L)：KCl l35；CaCl 2 0．1；HEPES 10；Glucose 10。用KOH调pH至7．3。实验在室温20～25℃进行。Papai n(Wako Pure Chemical lndustries，LTD)，tetraethylammonium(TEA，sigma公司)，4-a minopyridine(4-AP，sigma公司)。
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运动性和高血压性心肌肥大大鼠血浆生物活性肽含量变化的对比研究
探讨内皮素(endothelin，ET)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptid e，CGRP)、神经肽Y(neuropeptide，NPY)等生物活性肽在运动性和病理性心肌肥大形成中的 调节作用目前尚未见资料报道，因此，本课题具有重要意义。1 材料和方法 (1)材料与药品 选用wistar雄性大鼠30只，体重240～320 g，随机分为3组。动物室内温 度17～23℃。放免试剂均由北京东亚免疫技术研究所提供。 (2)实验动物模型的建立 ①运动组：wistar大鼠9只，先进行3天适应性训练，之后每日 游泳运动1次，每次2 h，共8周。游泳池50×60×70 cm，水温20～22．5℃。 ②高血压组：wistar大鼠9只，腹腔注射戊巴比妥钠(35 mg／kg)麻醉。参照Anderson法复 制腹主动脉部分缩窄大鼠高血压模型。术后30 d 取材。③对照组：wistar大鼠12只，正常 笼内生活状态。
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分光光度法检测心肌线粒体渗透性转换
目的：线粒体渗透性转换(mitochondria permeability transition ，MPT)是反映线粒体膜完整和功能的重要指标。它的测定是根据MPT增大时线粒体膜内外渗 透失衡，导致吸光度明显减少的原理。我们参照国外文献资料，结合本实验室的条件，采用 UV-240分光光度计，建立了分光光度法测定心肌线粒体渗透性转换。方法：以其在540 nm波长下吸光度减少的幅度及达到平衡所用的时间ΔA／min值反映MPT的变化 。结果和结论：通过观察测定体系中不同pH值，不同线粒体蛋白量，以及不 同温度条件下对线粒体PT的影响，认为pH7．4、0．5 mg pro/ml线粒体以及25℃为佳条件 。
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 |
| 2010 | 01 |
| 2009 | 01 02 03 04 |
| 2008 | 01 02 |
| 2007 | 01 02 03 04 |
| 2006 | 01 02 03 04 |
| 2005 | 01 02 03 04 |
| 2004 | 01 02 03 04 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
