中国实验血液学杂志
Journal of Experimental Hematology 중국실험혈액학잡지
- 主管单位: 实验血液学杂志
- 主办单位: 中国科学技术协会
- 影响因子: 0.98
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 11-4423/R
- 国内刊号: 陈潮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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再生障碍性贫血的免疫抑制治疗
免疫抑制疗法是再生障碍性贫血的主要治疗方法,本文简要综述其主要药物的作用机制、应用方法,合理用量及疗效、相互之间的协同作用.所综述的药物包括抗人胸腺球蛋白/抗淋巴细胞球蛋白(ATG/ALG),环孢菌素A(CsA),ALG/ATG与CsA联合应用,强化免疫抑制治疗联合造血生长因子(ⅡST+HGFs),抗T淋巴细胞单克隆抗体(McAb-T),大剂量环磷酰胺(HD-CTX),大剂量甲基强的松龙(HD-MP)和大剂量免疫球蛋白(HD-ⅣIG).本综述目的是指导再生障碍性贫血患者的临床治疗.
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rhG-CSF在动员外周血造血干/祖细胞过程中对T细胞的影响及机制
重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对人体具有广泛的免疫调节作用.在动员外周血造血干/祖细胞过程中给予的rhG-CSF可以使外周血T淋巴细胞数量和功能发生改变,并影响移植后GVHD的发生.rhG-CSF主要通过对单核细胞和树突状细胞的作用而间接影响T细胞,其中单核细胞分泌的大量IL-10对调节T细胞的细胞因子分泌、增殖和细胞毒效应具有重要作用.IL-10作用于T细胞后引起的SOCS3表达显著增高可能在相关的信号转导机制中具有重要作用.本综述重点阐述rhG-CSF在动员过程中对T细胞的影响及相关机制.
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红细胞生成素:新的神经营养和神经保护因子
红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾脏产生的特异性刺激红细胞生成的造血生长因子.近年来的研究发现EPO不仅仅只作用于造血系统,作为一种多功能的营养因子,它还对整个机体稳态的维持发挥作用.在中枢神经系统和脑脊液中均发现有特殊的EPO及EPO受体系统,该系统独立于造血系统中的EPO及其受体系统而存在.EPO在不同种类的神经损伤(如脑缺血、缺氧及蛛网膜下腔出血等)中具有神经营养和保护功能,重组人红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)疗法将很快用于临床实践去修复上述疾病引起的神经损伤.
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HOXB家族基因与造血干/祖细胞的功能
近许多研究证明,同源盒基因(homeobox gene,HOX)家族在正常的造血过程中起着重要的作用.作为一类转录因子,HOX基因产物通过结合到特异的DNA序列来调控靶基因的表达.HOX家族成员之一--HOXB,尤其是HOXB4引起了人们的极大兴趣.研究发现,HOXB4的表达与造血干细胞的自我更新和祖细胞高效增殖功能密切相关,本文就有关这方面的一些新的研究进展作一综述.
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用α-半乳糖苷酶制备可供输注的人通用型O型红细胞
研究的目的是将人群中28%的B型血改造成通用O型血,提高O型血的储存和使用比例,以缓解战争、恐怖袭击、突发事件等紧急状态下对O型血的大量需求.用α-1.3半乳糖苷酶作为B→O血型改造的工具酶,摸索改造一个使用单位B型血红细胞(100ml)的佳条件.结果实现了在密闭、无菌条件下使用50 U/ml工具酶,pH5.6,26℃2小时,进行B→O的血型改造.结论:改造后的通用型O型血红细胞符合生物制品检定规程的要求,并可在4℃存放21天.
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Cobe Spectra与Fenwal CS 3000 Plus血细胞分离器外周血造血干/祖细胞的采集效能比较
为了评价Cobe Spectra(Version 6.1)和Fenwal CS 3000 Plus两种血细胞分离机在造血干/祖细胞采集中的采集效能,对36人64次外周血造血干/祖细胞的采集进行了回顾性分析.20人42次使用Cobe Spectra采集,16人22次使用Fenwal CS 3000Plus采集.对CD34+细胞采集量、采集效率以及红细胞与血小板的采集量进行比较.结果表明:Cobe Spectra和Fenwal CS 3000Plus在CD34+细胞采集量和采集效率上无显著差异.CD34+细胞采集量与供者白细胞、单核细胞、造血祖细胞、CD34+细胞的动员情况呈正相关,在多因素stepwise线性回归模型中,采集前外周血干/祖细胞浓度是唯一有意义的影响因素.FenwalCS 3000 Plus的采集效率与外周血单核细胞量呈负相关.Fenwal CS 3000 Plus对红细胞的收集量显著高于Cobe Spectra,并且采集后供者外周血血小板降低程度较CobeSpectra更严重.结论:Cobe Spectra(Version 6.1)和Fenwal CS 3000 Plus在CD34+细胞的采集能力上无显著差别.当外周血单核细胞数量高,或是血型不合移植的及血小板减少的供者,推荐使用Cobe Spectra血细胞分离机.
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54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析
本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究脐血移植的相关影响因素.脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量.结果表明:1998年6月至2003年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例.其中同胞脐血移植11例.对54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6%,非恶性病患者11例,占20.4%,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107/kg,移植后60天植入43例(ANC>500/μl的中位时间为17天),植入率为79.6%.脐血移植有核细胞重建时间与输入的有核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关.急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6%,慢性GVHD发生率为5.4%.6例患者出现自体恢复(11.1%).存活率42.6%.结论:非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小儿白血病方面具有良好的应用前景.
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慢性髓性白血病人源树突状细胞的细胞毒作用及其体外扩增
本研究观察来源于慢性髓性白血病患者的CD34+细胞经两步培养扩增后产生的树突状细胞的抗白血病免疫功能.从慢性髓性白血病患者骨髓或外周血中分离出CD34+细胞或外周血单个核细胞分别进行两步培养.首先将其与rhFlt3-L和rhTPO共育7天,再与rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4共同培养14天,以诱导树突状细胞产生;同时以rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4直接诱导体系作对照.获得的DC通过流式细胞仪检测免疫表型,电镜分析细胞超微结构及G显带法进行的染色体分析后,并用MTT法检测DC刺激T细胞增殖能力及T细胞对CML细胞的杀伤作用.结果表明:慢性髓性白血病的CD34+细胞经过rhFlt3-L和rhTPO的初始扩增培养7天后,CD34+细胞总数扩增77±5倍.用rhGM-CSF、rhTNF-α及rhIL-4诱导培养14天,DC产率达到(39±8)%,细胞扩增倍数及DC比例均明显高于直接诱导产生的培养方法(P<0.01),且此DC能刺激自体或异体T细胞增殖,进而杀伤CML细胞.结论:两步法体外扩增培养可明显提高DC前体总数及产率,优于直接诱导培养;CML细胞来源的DC可诱导产生抗白血病免疫反应.
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免疫磁珠正负筛选在分离外周血CD8+和 CD4+T细胞亚群中的应用
为了探讨免疫磁珠分离技术及其正、负筛选策略在人外周血T淋巴细胞亚群分离提纯中的应用,应用补体细胞毒法和正负筛选策略相结合的免疫磁珠法分离健康人外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞;用流式细胞术法比较两种分离方法分离的靶细胞纯度;台盼蓝染色染色法和细胞培养后平板计数法检测免疫磁珠法分离的CD4+T细胞、CD8+T细胞的活力和生长情况.结果表明:补体细胞毒法分离后CD4+T细胞纯度、CD8+T细胞纯度分别为(76.0±2.8)%和(77.0±3.0)%,明显高于分离前的(34.6±3.7)%和(32.0±3.7)%(P<0.05);免疫磁珠法分离后CD4+T细胞和CD8+T细胞纯度为(94.2±1.4)%和(93.8±3.0)%,显著高于补体细胞毒法(P<0.05).磁珠分离法获得的CD4+T细胞、CD8+T细胞细胞活力分别为(96.0±2.4)%和(95.0±3.6)%;细胞计数法表明磁珠分离法获得的CD4+T细胞、CD8+T细胞对植物血凝素(PHA)的刺激保持了良好的增殖能力.结论:免疫磁珠法较补体细胞毒法分离效率高,不影响细胞的活力和增殖能力;正负筛选策略相结合的免疫磁珠法在同时获取高纯度的CD4+T细胞、CD8+T细胞时可获得满意效果,尤其适应于只有较少量血标本的情况,为进一步研究CD4+T细胞、CD8+T细胞的生物学特性创造了条件.
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抗CD47单克隆抗体(B6H12)对人树突状细胞成熟及其功能的影响
为阐明可溶性的抗CD47单克隆抗体(B6H12)对树突状细胞(DC)的免疫调控作用及分子机理,联合应用rhGM-CSF、IL-4、细菌脂多糖(LPS)在体外诱导扩增人外周血单核细胞来源的DC,并在培养体系中添加抗CD47单克隆抗体(B6H12);采用透射电镜观察DC形态,流式细胞术检测DC膜表面分子的表达;ELISA法检测DC释放的IL-12P70水平;BrdU-ELISA法检测DC刺激同种异型淋巴细胞增殖,凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)检测NF-κB结合活性变化.结果发现:①经抗CD47单克隆抗体(B6H2)处理的DC,膜表面标记(CD80、CD86、CD1a、CD83、DR)的表达显著地低于未加B6H12单克隆抗体DC组(P<0.05);其释放IL-12P70蛋白质的能力及刺激同种异型淋巴细胞增殖的能力也显著低于对照组(P<0.01).②与未加B6H12单克隆抗体DC组相比,B6H12单克隆抗体处理DC组的NF-κB活性显著降低(P<0.05),并且这种抑制作用随单克隆抗体浓度增大而增强.结论:可溶性的抗CD47单克隆抗体通过抑制NF-κB的结合活性,影响着DC向成熟发育及功能.
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非生长因子依赖的MDS细胞系的建立及其生物学特性研究
本研究的目的是从骨髓增生异常综合征-慢性粒-单核细胞白血病(MDS-CMML)病人获取骨髓细胞,建立非生长因子依赖的细胞株.该细胞株在不添加任何生长因子的含15%胎牛血清的RPMI 1640和DMEM混合培养液中进行了培养,并分别从细胞株的形态、细胞表面抗原分子、细胞增殖、分化、凋亡等方面检测其生物学特性.结果表明:在不添加任何生长因子的培养条件下该细胞株可以长期存活和生长,并能向单核及巨核细胞分化.结论:成功建立了一株非生长因子依赖的MDS-JSN04(MDS-江苏南京04)细胞株,并阐明了其部分生物学特性.
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绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白αⅡb C端不影响αⅡbβ3复合物在CHO细胞正常表达
本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ3复合物生物合成过程和表达的影响.从人αⅡb表达载体p3.1-2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA,插入表达载体pEGFP-M中构建αⅡbGFP融合蛋白表达载体,测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白β3亚基的真核表达质粒p3.1-3a共转染CHO细胞,对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合蛋白的细胞内定位.结果表明:经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达,融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网转运至高尔基体.结论:成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体;GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物在CHO细胞的正常表达.
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LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系
为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动子区CpG岛甲基化与基因表达的关系.结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态,并抑制了该基因的表达.单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态,并诱导该基因的表达.这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关.结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一定的价值.
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TSA诱导MOLT-4细胞中p21WAF1/Cip-1表达的功能机制研究
为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAF1/Cip-1的表达及其功能,以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21WAF1/Cip-1的表达.结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导MOLT-4细胞发生G2/M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过程中,p21WAF1/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降.p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达规律与TSA诱导的细胞G2/M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂MG-132提升p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2/M阻滞反应而延缓凋亡.结论:蛋白酶体途径参与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAF1/Cip-1分子的降解调控;p21WAF1/Cip-1在TSA诱导的MOLT-4细胞G1/M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用.
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2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖与凋亡的影响
为了探讨2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖及凋亡的影响,并观察其与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠等药物联合时的协同作用,采用台盼蓝染色法检测细胞活力,应用BrdU掺入法检测浆细胞标记指数(PCLI),DNA片段原位末端标记(TUNEL法)检测凋亡细胞.药物协同作用判断标准按金氏公式计算Q值.结果表明,7株骨髓瘤细胞系NCI-H929、HS-sultan、KM3、SK0-007、CZ-1、U266、LP-1经1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时后细胞活力明显受抑制,呈现时间剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P<0.05).各细胞系对2-甲氧基雌二醇敏感性不同,其IC50介于(20.8±0.27)μmol/L与(34.1±0.57)μmol/L之间.1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时可诱导骨髓瘤细胞系凋亡,凋亡率介于9%-33%之间,呈现时间和剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P<0.05).经12 μmol/L 2-甲氧基雌二醇作用24小时后浆细胞标记指数(PCLI)由作用前平均(30.14±4.28)%下降到作用后的(14.71±6.27)%,差异显著(P<0.05).2-甲氧基雌二醇与药物联合作用后计算Q值介于1.13-1.43之间,具有协同作用.结论:2-甲氧基雌二醇可抑制骨髓瘤细胞生长,并可诱导骨髓瘤细胞凋亡,与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠联合使用具有协同作用.
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频繁单采血小板影响献血员巨核细胞的生成
为了探讨血小板单采对献血员巨核细胞生成的影响,于末次单采血小板5周后,检测42名频繁单采血小板献血员(连续24个月内单采血小板≥1次/月,1次/治疗剂量≥2.5×1011血小板)和62名少量单采血小板献血员(连续24个月内单采血小板<1次/月)以及40名未单采过血小板的健康无偿全血献血员(末次献血6个月后)的外周血血小板计数和血浆血小板生成素(TPO)、IL-3、IL-6及NO水平.结果表明:频繁单采血小板献血员的血浆TPO水平显著低于少量单采血小板献血员(P<0.01)和全血献血员(P<0.01);3组间的血小板计数、血浆IL-3、IL-6和NO水平均无显著性差异.上述结果显示,频繁单采血小板献血员的骨髓巨核细胞数量明显增加.
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广州脐血库3 605脐血供者6个月后随访
本研究回顾分析了脐血库对库存3605份脐血所进行的脐血供者6个月后的随访情况,探讨供者随访制度在脐血库运作过程中的作用.1998年6月至2004年2月间,通过电话、信函方式对捐献脐血满6个月的母亲进行了母婴健康调查随访,对脐血的质量作出了评估.结果表明:有3 195人接受了电话随访,18人婉拒.对于无法通过电话随访的,则采用信函调查形式,共发信392封,回信15封.电话随访每例平均耗时12分钟.随访资料显示婴儿染色体异常2例、先天性甲状腺功能低下1例、粒细胞减少症1例、白化病1例、不明原因死亡5例.所有这些被查明为非正常婴儿供者的脐血均被废弃.总之:脐血库进行脐血供者6个月后的随访工作,能有效地提高库存脐血的质量.
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B型全血加入不同剂量O型全血后游离血红蛋白变化
为了解B型全血加入不同剂量O型全血后在37℃与室温条件下游离血红蛋白的变化,随机抽取4℃保存24小时B型全血两人份,分别分装为60 ml,按不同比例加入O型全血9、12、15、18 ml置入100ml塑料血袋内混匀后,分别放置在37℃孵箱和室温条件下,间隔15分钟摇动1次.分别在1、2、4、8和12小时留取标本做游离血红蛋白检查.结果表明:B型全血加入不同剂量O型全血,在12小时内游离血红蛋白量的变化无显著性差异.随着保存时间的延长不管是室温还是37℃条件下,1 小时以后均有显著性差异,一袋B型全血在室温与37℃条件下放置1-8小时无明显差别(P>0.05),到12小时P<0.001.另一袋在室温与37℃条件下放置1小时P>0.05,2-8小时P<0.001,有明显差别.结论:在B型全血中加入O型全血,放置12小时不会引起游离血红蛋白升高.在室温与37℃存放8小时后接近和超过存放2天的水平170.4 mg/L,这提示血液采集后应尽快置入2-4℃冷藏,减少红细胞的分解代谢、衰老裂解而释放更多的FHb及其它代谢物质对机体的损害.
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G-CSF动员的异基因外周血干细胞和骨髓联合移植治疗白血病
为了探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的异基因外周血干细胞和骨髓联合移植治疗白血病的疗效,给予供者G-CSF 8-10μg/(kg·d),皮下连续注射5天,以动员外周血和骨髓干细胞,在第4,5天采集外周血干细胞,第7天采集骨髓;预处理采用氟达拉宾,白消安和环磷酰胺组成的新方案.结果表明,12例全部成功植入,中性粒细胞>0.5×109/L的时间为10.2(9-12)天,血小板>20×109/L的时间为12.5(12-14)天.移植后观察100天,4例(33.3%)发生Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGVHD),10例出现慢性移植物抗宿主病(cGVHD),中位随访时间5个月,2例死亡,余10健康生存.结论:G-CSF动员的和外周血造血干细胞骨髓联合移植是安全有效的治疗方法,可以获得长期稳定的植活并不增加aGVHD和cGVHD等并发症.
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急性白血病流式细胞术免疫分型中系相关抗体的敏感性和特异性分析
为了评估急性白血病流式细胞术免疫分型中系相关抗体的敏感性和特异性,参考St Jude研究医院的急性白血病免疫分型方案对184例急性白血病患者进行流式细胞术免疫分型.结果表明:AML系相关抗体CD13和CD33的敏感性较高(95.5%和91.2%),特异性不足(72.5%和62.2%);MPO敏感性低(69.1%),特异性高(100%);CD117敏感性、特异性都高(88.2%和100%).CD14、CD15敏感性低(18.4%和27.2%),CD14对单核细胞特异性高.B细胞系ALL系相关抗体CD19具有高敏感性(100%),而特异性(83.4%)差;CD79a、CD22(CyCD22)敏感性(96.4%和100%)和特异性(100%和100%)都高;CD10和CD20的敏感性(53.6%和70.4%)、特异性(82.5%和87.5%)均低.T-ALL系列相关抗体CD3(CyCD3)高特异性(97.5%),而敏感性(80.0%)欠佳;CD7敏感性高(100%),特异性低(77.9%);CD5、CD2、CDla敏感性、特异性均不理想.结论:184例急性白血病系相关抗体的敏感性和特异性分析与St Jude免疫分型方案基本一致,只是在确定AML时CD¨7似乎优于MPO;确定B细胞系ALL时CD22和CD79a具有相似的敏感性和特异性,所以可以任选一个.
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急性白血病免疫治疗的研究现况和前景
要进一步延长急性白血病治疗后缓解期和消灭残余微量白血病细胞,重要方法之一是开展免疫治疗.在研究中的免疫治疗方法有4种:①单克隆抗体(单抗),其中Mylotarg(抗CD33单抗接上细胞毒抗生素利东霉素)用于治疗复发和难治急性髓性白血病(AML)及急性早幼粒细胞白血病(APL)分子复发,取得良好效果;Campath-1H(抗CD52单抗)治疗幼淋细胞白血病(PLL),美罗华治疗B-PLL,缓解率高.其他研究的单抗尚有IL-2单抗治疗急性T细胞白血病、抗220KD单抗6G7治疗急性白血病、重组免疫毒素BL22(抗CD22)治疗毛细胞白血病以及一些用同位素标记的单抗治疗各种急性白血病;②过继性细胞免疫治疗,用细胞因子诱导的杀伤细胞、同种反应NK细胞、同种或自身白血病特异的CD8+细胞毒T淋巴细胞和其他免疫效应细胞;③细胞因子及其他免疫调节剂,诸如IL-2,IL-12,GM-CSF,CD40L,FLT-3L,沙利度胺及其衍化物;④白血病疫苗,有抗原特异的、白血病细胞为基础的、负载白血病抗原的树突状细胞(DC)和白血病来源的DC疫苗等几种不同剂型,以后两者剂型更受重视.总之,到目前为止,急性白血病免疫治疗中有效的方法是应用单抗,其他大多数方法也已显示应用前景,值得进一步研究.
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薄片法血小板聚集实验对服用抗血小板药物患者的监测
为了监测血小板功能和评价薄片法血小板聚集试验(SPAT)检测阿司匹林(ASA)、波立维、华发林、潘生丁等抗血小板药物对血小板的抑制效应,研究了8名服用ASA的健康志愿者服用ASA前后SPAT时间以及ADP、AA和阳离子没食子酸丙酯溶液(c-PG)诱导的血小板50%聚集率的时间(T50);随机检测了41例心血管内科口服ASA、波立维、华发林、潘生丁等抗血小板药物进行抗凝治疗的患者和327健康捐血者SPAT值;观察了健康志愿者服用ASA前后的静脉血室温放置1,2,3,4小时SPAT值的变化.结果表明:①ADP诱导的健康志愿者服药前后T50无显著性差异(P=0.147);AA诱导的服药前后T50有显著性差异(P=0.000);健康服药前后c-PG诱导的志愿者T50有显著性差异(P=0.000);健康志愿者服药前后SPAT值与c-PG诱导的T50呈显著的直线相关(r=0.998,P=0.000).②服药前健康志愿者的SPAT值与健康献血人群比较,无显著差异(P=0.853);与服药前比较,健康志愿者服药后SPAT时间明显延长,有极其显著的差异(P=0.000);心血管内科患者SPAT时间与健康献血人群、健康志愿者服药前和服药后均有显著差异(P=0.000);健康献血人群SPAT cut-off值为44.6±11.7秒,参考值范围为21.1-68.0秒.③血小板标本室温放置1,2,3,4小时SPAT值无显著差异(P=0.815).结论:SPAT具有与c-PG诱导的T50相似的临床意义,可高效快速检测出所有服用抗血小板药物的患者.
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血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究
为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂,利用基因重组技术体外表达GPⅥ胞外区片段.采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GPⅥ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA Resin纯化、复性;使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质;采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力.结果表明,经测序证明PCR扩增产物与GPⅥ胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量32 kD蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合;胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能.结论:正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性.
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中国汉族人群HLA-B*40组的多态性研究
为了研究中国汉族人群HLA-B*40等位基因的分布特点,探讨其可能对临床供者选择的影响,从中华骨髓库深圳分库中随机抽取381名志愿供者,用PCR-SSO方法进行HLA-B基因分型;另从已分型的1 270例供者中选出低分辨率结果为B*40纯合子的样本.所有B*40阳性标本采用PCR-SBT及PCR-SSP方法进行高分辨率分型.结果表明:随机抽取的381例样本通过Hardy-Weinberg平衡检验,HLA-B*40的基因频率为0.1692.在实验中仅检测到B*4001,B*4002,B*4003,B*4006,其血清学特异性分属B60,B61.各等位基因相对频率B*4001为0.1192,B*4002为0.0154,B*4003为0.0038,B*4006为0.0308.B*40纯合子在高分辨水平上检测,其等位基因表现出一定的规律性,低分辨结果为B*40XX(B*4001组),-,高分辨都是B*4001;低分辨为B*40XX(B*4002组),-,高分辨则为B*4002或B*4006或二者杂合子.结论:中国汉族人群B*40基因家族中B*4001占绝对优势.为了选择适供者,建议临床配型中使用高分辨率基因分型.
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中国南方汉族急性淋巴细胞白血病与 HLA基因相关性研究
为了研究中国南方汉族急性淋巴细胞白血病与人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1基因的遗传相关性,找出ALL的易感基因,对以DNA作HLA基因分型的南方汉族人群的201例ALL患者进行甄选,并以4 707例南方汉族的志愿捐献造血干细胞的健康供者作为正常对照组,对两组间HLA等位基因多态性分布,通过HLA等位基因频率(GF)分布的x2检验、显著性差异进行比较,计算疾病的危险率(RR)、病因分数(EF)和预防分数(PF),研究ALL与HLA等位基因相关性.结果表明:南方汉族ALL患者的HLA-A26(GF=4.32%,x2=4.90,RR=1.774,EF=0.036),B56(GF=1.92%,x2=4.65,RR=2.116,EF=0.023),DR9(GF=1.29%,x2=3.99,RR=1.349,EF=0.092)3个基因频率显著高于正常对照组(P<0.05);HLA-A30(GF=1.25%,x2=3.92,RR=0.415,PF=0.081),A33(GF=1.78%,x2=4.842,RR=0.612,PF=0.110)和B58(GF=1.83%,x2=7.21,RR=0.516,PF=0.149)3个基因频率显著低于正常对照组(P<0.05).结论:HLA-A26、B56、DR9 3个HLA基因与ALL有较强的相关性,对南方汉族ALL患者可能有遗传易感作用;HLA-A30、A33、B58 3个基因可能是保护性基因.
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RHD基因3'-非编码区序列分析
RHD基因下游包括3'-端非编码区、下游Rh盒子和SMP1基因等,3'-端非编码区的具体序列目前尚不清楚.本研究目的旨在测定3'非编码区序列.根据近的文献报道和EMBL/GenBank/DDBJ记录的基因序列,设计1对引物,建立聚合酶链式反应(PCR)方法,特异性扩增10名Rh阳性表型和10名D放散型(Del)表型个体的DNA样品的RHD基因3'-端非编码区全长序列,PCR产物纯化后进行直接测序.结果表明:10份Rh阳性和10份Del DNA样品的测定结果完全一样,显示RHD基因终止密码子与RHD基因的下游Rh盒子首位碱基之间相距103bp,无重复序列等特殊片段;D放散型等位基因的3'-非编码区与正常Rh阳性个体一致.结论:D放散型D抗原减弱与3'-非编码区无关.
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正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR 细胞凋亡易感性的影响
为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60/VCR凋亡易感性的影响,先建立HL-60或HL-60/VCR细胞与HFCL细胞共培养体系;采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙/溴化乙啶(A0/EB)染色,分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察;TUNEL检测晚期凋亡细胞,流式细胞术检测细胞周期、凋亡峰和annexin Ⅴ阳性的早期凋亡细胞;Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化.结果表明,经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60/VCR细胞,在光镜和荧光显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变,这些改变具有时间和剂量依赖性;annexin Ⅴ染色后能检测到早期凋亡细胞;细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期减低,并有明显凋亡峰;TUNEL能检测到许多阳性细胞;同时出现活化的caspase-3,伴有Bcl-2的表达下调,但与HFCL细胞共培养后,经TPT处理的HL-60和HL-60/VCR细胞中早期和晚期凋亡细胞有所减少,凋亡峰减低,而且活化的Caspase-3表达减弱,Bcl-2蛋白表达上调,且以直接接触组为甚.结论:正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60/VCR细胞对TPT的凋亡易感性,并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与.
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抗CXCR4单克隆抗体12G5对阿糖胞苷杀伤 HL-60细胞效应的影响
本研究通过观察抗CXCR4单克隆抗体12G5对Ara C杀伤HL-60细胞效应的影响,评价其在白血病骨髓残留病变中的治疗价值.培养并共培养HL-60细胞,在共培养体系中采用12G5(10μg/m1)阻抑基质细胞SDF-1的生物作用后,通过MTT法及细胞形态学观察检测不同浓度Ara C对HL-60细胞杀伤作用的变化.药物杀伤效应曲线显示,在20μg/ml Ara C组,对照组中前2天A540值明显下降,但从3-4天开始出现上升,而加12G5实验组中A540值虽然下降平缓,但持续下降,并于观察第5天后低于对照组,整个观察期中未出现反弹.在40μg/ml Ara C组,对照组A540在0-3天明显下降,从第4天开始回升,于第5-6天与实验组曲线交叉,从7-12天对照组A540值总体呈上升趋势,并明显高于实验组,而加12G5实验组曲线在整个观察期间虽然在7-9天有小幅度攀升,但总的趋势是下降.细胞形态学观察显示,在两个浓度组,对照组HL-60细胞数量初明显减少,随着培养时间延长,细胞数量逐渐增多,实验组结果正相反.结论:12G5减弱Ara C对HL-60细胞的早期杀伤作用,但12G5增强Ara C总体杀伤作用,同时,延缓HL-60细胞对Ara C的耐药性,因此12G5有助于白血病骨髓残留病变的治疗.
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急性白血病患者DNA甲基转移酶基因的表达其及临床意义
为了探讨DNA甲基转移酶(DNMT)基因在成人急性白血病(AL)患者中的表达及其与临床预后之间的关系,对72例AL患者和20例正常人的骨髓采用RT-PCR方法进行DNMT、p15INK4B、mdr1 mRNA水平的检测;对56例AL患者和14例正常人p15INK4B基因启动子区域CpG岛甲基化率,采用甲基化特异性PCR方法进行检测.结果表明:AL患者组所有3种DNMT表达均明显高于对照组(P<0.01),改用细胞增殖核抗原(PCNA)为内对照,差别仍有统计学意义.AL患者3种DNMT基因表达之间呈明显正相关,表现为协同的高表达;p15INK4B、mdr1与DNMT表达呈明显负相关.DNMT基因同时阳性患者组完全缓解(CR)率明显高于DNMT基因部分阳性或阴性患者组(P<0.01).p15INK4B基因在56例AL患者中,31例(55.4%)完全甲基化,12例(21.4%)部分甲基化,14例正常人在同一条件下则无1例甲基化.结论:DNMT基因在成人AL患者有异常高表达,其可能通过促使抑癌基因启动子区域过甲基化,而使其转录失活,从而导致白血病恶性克隆的形成.对于高表达DNMT的AL患者,可能对化疗更敏感,提示DNMT基因高表达可能是临床预后较好的指标.
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细胞色素C对柔红霉素诱导AML细胞凋亡的影响
为了研究细胞色素C体外作用急性非淋巴细胞性白血病(AML)细胞的效应及其对柔红霉素(DNR)诱导AML细胞凋亡的影响,分别采用瑞氏-姬姆萨染色和硝基四氮唑蓝还原试验观察细胞色素C引起AML细胞的分化效应;用流式细胞术检测和荧光染色方法检测AML细胞的凋亡效应.结果表明:①不同浓度的细胞色素C单独作用AML细胞产生的效应不同:浓度为10μl/ml的细胞色素C作用AML细胞可产生分化效应;浓度为20μl/ml的细胞色素C作用AML细胞,产生明显的凋亡效应;浓度为40μl/ml的细胞色素C作用AML细胞,可导致细胞的坏死.②浓度为10.0μg/ml的细胞色素C预先作用AML细胞导致DNR诱导的细胞凋亡率明显降低(P<0.01),浓度为20.0μg/ml的细胞色素C预先作用对DNR诱导的细胞凋亡率影响不大(P>0.05).③如果DNR预先作用AML细胞后再经细胞色素C处理,两种浓度的细胞色素C均可使DNR诱导的细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论:细胞色素C对柔红霉素(DNR)诱导AML细胞凋亡可能有一定的影响.
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细胞周期蛋白G2 mRNA在急性白血病患者中的表达及临床意义
为了探讨急性白血病(AL)患者中细胞周期蛋白G2(cyclin G2)的mRNA表达及其临床意义,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测74例急性白血病患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin G2、G1和P53的mRNA表达,对cyclin G2的阳性扩增产物进行序列分析.结果表明:①AL患者中cyclin G2的阳性率及mRNA表达水平(52.7%,0.552±0.498)明显低于正常人(100%,1.953±0.675)(P<0.01).②在初治的AL患者中,cyclinG2阳性表达患者的完全缓解(CR)率高于阴性者(分别为69.2%和40%;P<0.05).③耐药组AL患者cyclin G2的阳性率(43.6%)明显低于敏感组(68.6%)(P<0.05).④对初治28例CR的AL患者进行随访14.3个月(11-18.5个月),11例cyclin G2低表达患者中有10例复发(90.9%),而17例cyclin G2高表达患者中有7例复发(41.2%),两者之间有显著性差异(P<0.05).结论:Cyclin G2是影响AL患者CR的因素,其高表达可能是AL患者良好预后的指标之一.
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SDF-1及其受体CXCR4在急性白血病与淋巴瘤表达的初步研究
为了探讨血液肿瘤患者外周血基质细胞源因子-1(SDF-1)及其骨髓细胞表面特异性受体CXCR4的表达及其临床意义,对28例血液肿瘤患者及12例正常人的骨髓及外周血指标进行了检测,采取流式细胞术检测骨髓梃细胞表面CXCR4的表达,用ELISA法检测血清中的SDF-1表达.结果显示:28例血液肿瘤患者外周血SDF-1和骨髓细胞表面CXCR4的表达均高于正常对照组(P<0.01),且SDF-1和CXCR4两因子之间的表达有相关性(r=0.831,P<0.01).部分存在明显的髓外转移和多个淋巴结浸润的血液肿瘤患者CXCR4的表达较高.不同类型的血液肿瘤之间CXCR4的表达可能存在差异(P<0.01).结论:骨髓细胞与外周血清CXCR4和SDF-1的高表达可能作为一种特异性的血液肿瘤标志,CXCR4的高表达可能与血液肿瘤的浸润程度相关.
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原代白血病细胞存活蛋白(Survivin)基因表达与化疗敏感性
为了研究存活蛋白(survivin)基因表达的原代急性白血病(AL)细胞对不同化疗药物的敏感性差异,采用RT-PCR方法检测AL细胞survivin mRNA的表达,用MTT法检测AL细胞的杀伤率.结果表明:原代AL细胞体外与不同药物共同孵育15小时后,survivin mRNA(+)AL细胞对DNR、HHT、Acla、AraC、DA(DNR+AraC)、HA(HHT+AraC)的敏感性与survivin mRNA(-)AL细胞无明显差异;survivin mRNA(+)的AL细胞对AA(Acla+AraC)联合的敏感性显著高于survivin mRNA(-)者[(37.24±18.36)%vs(24.32±9.33)%,P=0.032].结论:survivin基因阳性表达的AL细胞可能对某些化疗药物(如Acla+AraC)敏感.
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天花粉蛋白诱导NB4人白血病细胞凋亡研究
为了研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)诱导人类白血病细胞株NB4细胞的凋亡及增长抑制的影响,采用流式细胞术分析NB4细胞经TCS诱导后细胞膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ)表达及线粒体膜电位(△ψm)的改变;用MTT比色法测定TCS对NB4细胞的增长抑制率,用琼脂糖凝胶电泳做细胞凋亡DNA分析.结果表明:①TCS对NB4细胞具有明显的增长抑制作用,并随TCS浓度的升高及作用时间的延长,抑制现象愈加显著;②NB4细胞经TCS诱导后,annexin Ⅴ呈阳性表达,随作用时间延长阳性率进一步升高;③线粒体△ψm随着凋亡细胞的增加而逐渐降低;④DNA电泳呈梯状条带,表明TCS对NB4细胞确实存在诱导凋亡作用.结论:天花粉蛋白在体外能够明显抑制NB4细胞的增长,并诱导细胞凋亡,为今后TCS应用于急性早幼粒白血病的临床治疗提供重要的实验依据.
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115例急性髓细胞白血病多参数流式细胞术免疫表型分析
免疫表型检测已成为白血病诊断和分类的重要手段.为了解急性髓细胞白血病(AML)免疫表型特征,利用三色流式细胞术CD45/SSC参数散点图设门方法,对115例AML患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析;结合FAB分类,比较AML不同亚型中抗原表达的差异,并对其诊断价值加以探讨.结果显示:在AML患者中,CD33、CD38和CD13的表达常见,分别达94.8%、91.3%、89.6%.在淋系抗原中,CD7的表达为常见(20.2%),其次是CD19(16.5%)和CD2(15%).某些免疫表型特征与FAB分类具有相关性,包括M3中缺乏表达HLA-DR、CD34和CD56,但CD2的表达增加;M2中CD19,M5中CD14和CD56的表达增加,而M0中未见MPO的表达.结论:多参数流式细胞术是诊断AML的一项可靠技术,AML某些免疫表型特征与FAB分类具有明显相关性.
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脐血CD34+CD38-早期造血祖细胞的体外增殖和凋亡
为了从适龄产妇脐血中分离出CD34+CD38-细胞,在体外较长时间培养后观察分析CD34+CD38-细胞分裂增殖、凋亡以及干细胞因子对CD34+CD38-细胞增殖的影响,用流式细胞仪从10例健康产妇脐血中分选出CD34+和CD38-标记的脐血原始细胞,在添加IL-3、IL-6、GM-CSF、EPO、IGF-1和SCF 6种混合因子的干细胞培养基中培养6个月,观察细胞并绘制生长曲线,用单细胞凝胶电泳检测干细胞因子对CD34+CD38-细胞生长的影响和用流式细胞仪检测CD34+CD38-细胞凋亡情况.结果表明:脐血CD34+CD38-细胞可在体外较长时间培养增殖,无异常或过度的细胞凋亡发生.结论:通过控制培养条件,脐血CD34+CD38-早期造血祖细胞可在体外较长时间培养增殖,以作为大量脐血原始细胞移植的细胞来源.
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人类胚胎干细胞向造血细胞和内皮细胞诱导分化的初步研究
胚胎干(ES)细胞是一种能够自我更新、长期增殖并且具有多向分化潜能的干细胞.近年来的研究表明,小鼠胚胎干细胞体外分化能够模拟体内造血发育的过程.为探讨诱导人类胚胎干细胞向造血细胞和内皮细胞的分化的方法,将人类胚胎干细胞去饲养层,形成拟胚体(EB)培养3天后消化;采用基质细胞条件培养基联合细胞因子的诱导体系,诱导8天后,种植到半固体培养基中培养7-14天.应用RT-PCR检测诱导细胞flk-1、BMI-1、scl、Zeta-globin造血相关基因的表达;流式细胞术检测KDR、CD34等造血细胞表面抗原的表达;免疫组织化学检测集落细胞的表面标记.结果表明:①半固体培养基中出现20-30个细胞组成的集落,集落细胞再种植仍然能够形成大小相似的细胞集落;另外一些较大的细胞集落中CD45细胞呈阳性.②部分细胞贴壁生长形成内皮细胞样集落,Ⅷ因子、KDR、UEA检测均为阳性.③在ES细胞内有少量flk-1、BMI-1表达,而scl、Zeta-globin基因不表达;自发分化3天的EB可见flk-1、BMI-1表达上调;消化形成单细胞并诱导4天,检测到flk-1、BMI-1、scl、Zeta-globin基因的表达,第8天仍然检测到flk-1、BMI-1、scl基因的表达,Zeta-globin基因不表达.④诱导8天的细胞中表达flk-1阳性细胞的率为9.8%,CD34阳性细胞占总细胞量的16.8%,对照组ES细胞阳性率分别为0.04%和0.16%;EB自发分化阳性率分别为0.36%和1.16%.结论:采用基质细胞条件培养基联合细胞因子的培养体系,可诱导人类胚胎干细胞向造血细胞及内皮细胞分化.
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人骨髓间充质干细胞与脐血CD34+细胞体外扩增
为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34+造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34+细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培养板,体外培养1周,观察不同指标并进行组间比较.结果表明:①SDF-1α+SCF+TPO+FL因子组合与SCF+TPO+FL因子组合对脐血CD34+细胞的扩增作用无显著性差异(无论有无MSC细胞层存在)(P>0.05);②MSC与上述细胞因子共存的培养体系优于相应的单纯细胞因子培养体系(P<0.05);③扩增前与扩增后脐血造血祖细胞黏附分子CD44的表达没有明显变化.结论:趋化因子SDF-1α对SCF+TPO+FL因子组合的扩增作用无显著影响;MSC增加细胞因子的脐血细胞体外扩增的作用;体外扩增不影响脐血细胞黏附分子CD44的表达.
年 | 期数 |
2019 | 01 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |