中国实验血液学杂志
Journal of Experimental Hematology 중국실험혈액학잡지
- 主管单位: 实验血液学杂志
- 主办单位: 中国科学技术协会
- 影响因子: 0.98
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 11-4423/R
- 国内刊号: 陈潮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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重组人白细胞介素11对正常及骨髓抑制小鼠的促血小板生成作用
本试验的目的是观察国产重组人白细胞介素11(rhIL-11)皮下注射对正常小鼠和骨髓抑制小鼠的血液学效应.给正常小鼠rhIL-11 200及400μg/kg皮下注射,连续7天,第5天时外周血血小板数轻度升高,起效较平缓,停药后血小板数可在4天内恢复到给药前水平.对骨髓抑制小鼠,rhIL-11的治疗可明显地减轻外周血小板计数的下降程度,促进血小板计数的恢复.rhIL-11在每天100-400μg/kg时对骨髓抑制小鼠均有良好疗效,治疗13-15天血小板计数恢复到照射前水平,在每天400μg/kg时起效稍快于100及200μg/kg.上述3个剂量所引起的血小板大升幅十分接近.rhIL-11的升血小板作用与其促进骨髓巨核系祖细胞的增殖与成熟有关.上述结果表明,rhIL-11治疗无论对正常小鼠还是骨髓抑制小鼠均可提高外周血血小板数,提示rhIL-11可能是一种治疗血小板减少症的药物.
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同种异基因Th2细胞移植对GVHD和GVL效应的作用
为探讨同种异基因Th2细胞移植是否可以减低移植物抗宿主病(GVHD)的发生和保留移植物抗白血病(GVL)效应的作用,在体外用rmIL-4,Con A和离子霉素把供鼠(C57BL/6H-2b)T细胞优势化诱导培养为Th2细胞,再把Th2细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给红白血病受鼠模型(EL9611H-2d).结果表明:未处理的对照组,受鼠平均存活时间为(10.6±1.3)天,10只均死于白血病;环磷酰胺化疗组,小鼠平均存活(18.7±4.2)天,10只小鼠终均死于白血病;骨髓细胞和脾T淋巴细胞移植组,小鼠平均存活(22.7±7.4)天,9/10只均死于GVHD;骨髓细胞和Th2细胞移植组,3/10只在28天内死于GVHD,其余7/10只无GVHD发生,白血病发病时间明显推迟,平均存活(36.9±10.8)天,在50天时检查有2只鼠无白血病证据.研究证明体外极向化诱导培养的Th2细胞移植可减低GVHD发生的同时保留了抗白血病的能力.
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巨核细胞的免疫学研究
巨核细胞的免疫学作用鲜被研究,本研究观察巨核细胞的粘附分子和细胞因子表达,以及细胞因子与巨核细胞的相互作用,以了解巨核细胞的免疫学作用.使用流式细胞术,ELISA和免疫组化方法,分析粘附分子CD36在血小板、骨髓巨核细胞和巨核细胞株(Meg-01,Dami,CHRF288-11和M-07e)的表达;使用RT-PCR方法,检测白细胞介素1(IL-1)至白细胞介素10(IL-10),TNF-αTNF-γ和IFN-γ在4个巨核细胞株的表达;使用血浆凝块巨核细胞集落培养方法,观察细胞因子IL-1β,IL-3,IL-6和TPO对小鼠巨核细胞生长的影响,乙酰胆碱酯酶染色鉴定和识别巨核细胞.结果:①血小板、骨髓巨核细胞和巨核细胞株均表达CD36,而且随着细胞的发育成熟,CD36表达越来越高,提示巨核细胞通过合成血小板膜上的粘附蛋白参与免疫反应;②4个巨核细胞株代表不同成熟阶段巨核细胞的模型,炎性细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-3和IL-6在4个细胞株均有表达,提示不同阶段的巨核细胞均可作为炎性细胞因子的一个来源,参与机体的免疫过程;③细胞因子IL-1β,IL-3和IL-6对巨核细胞生长均有不同程度的促进活性,尽管较血小板生成素低,仍提示巨核细胞存在一个自分泌(autocrine)反应,影响自身的生长.研究结论提示巨核细胞可通过合成血小板膜的粘附蛋白参与免疫反应.另外,巨核细胞也可能是炎性细胞因子的一个来源.
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化疗药物与细胞因子协同作用引起小鼠T淋巴瘤细胞凋亡
本实验旨在了解化疗药物和细胞因子协同作用对细胞凋亡的影响.在培养的小鼠T淋巴瘤RMA细胞系中加化疗药物地塞米松(DEX)、足叶乙甙(VP16)、三氧化二砷(As2O3)及维甲酸(ATRA)以及培养细胞中先分别与细胞因子IL-2,IL-6和GM-CSF共同培养后再加入上述药物,观察对引起细胞凋亡的影响.四种化疗药均能抑制RMA细胞增殖,DEX,VP16和As2O3可以诱导细胞凋亡,单独使用ATRA不能引起RMA细胞凋亡,但与DEX联用时可降低DEX诱导凋亡的浓度.单用IL-2,IL-6或GM-CSF不引起肯定的细胞凋亡;如同时并用IL-2和IL-6则出现肯定的细胞凋亡.化疗药物与细胞因子并用时可减低药物引发细胞凋亡的浓度,并使细胞凋亡发生的时间提前.实验结果表明,化疗药物与细胞因子在诱导细胞凋亡中具有协同作用,为细胞因子特别是IL-2与化疗药物配伍使用治疗恶性淋巴瘤提供了一定实验依据.
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骨髓内皮细胞分泌的抑制CFU-F生长的因子
为探讨骨髓微环境中内皮细胞调节造血的可能机制,本实验研究了骨髓内皮细胞无血清条件培养液(BMEC-CM)及其不同分子量组分对骨髓成纤维祖细胞(CFU-F)生长的作用.在体外培养条件下,收集人和小鼠纯骨髓内皮细胞无血清条件培养液,应用连续超滤技术从其中制备出分子量>10 kD,3-10 kD和<3 kD三种组分,进行骨髓CFU-F集落形成实验,检测这些条件培养液及其超滤组分的作用.结果显示,人和小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液和分子量<3 kD超滤组分都抑制CFU-F的生长,但是分子量>10kD和3-10 kD组分却不产生这种效应.两种条件培养液及其<3 kD组分不仅减少CFU-F集落形成数,同时也使集落变小,而且,<3 kD组分与CFU-F集落数之间有明显的负相关浓度依赖性关系.这些结果提示,骨髓内皮细胞至少能分泌一种分子量小于3 kD的对骨髓CFU-F生长有抑制作用的细胞因子.
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重组人白细胞介素11对卡铂所致猴血小板减少症的治疗作用
用卡铂建立的猴骨髓抑制模型观察国产重组人白细胞介素11(rhIL-11)对血小板减少症的治疗作用.给予模型动物rhIL-11 50或100μg/kg皮下注射,连续19天.给rhIL-11治疗的猴血小板计数从第8天开始下降,在第12-14天达低点,其下降程度远低于模型动物.rhIL-11治疗后11-13天血小板计数开始回升,13-15天达到或超过建立模型前水平,停药后血小板数继续升高,并维持在高水平.停药4天后血小板计数开始回落.实验结果证实rhIL-11具有显著的促血小板生成的作用,不仅可以缩短卡铂引起的血小板减少症的持续时间,而且可以减轻血小板减少症的严重程度.结论提示rhIL-11可作为治疗化疗引起的血小板减少症的有效药物.
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强力霉素调控血小板生成素在CHO细胞中的表达
本实验应用Tet-On基因表达系统,通过强力霉素调控血小板生成素(TPO)基因在CHO细胞中的表达.应用DNA重组技术,构建质粒pTRE-TPO.应用脂质体介导的基因转染技术,pTRE-TPO与pTK-Hyg共转染CHO-Tet-On细胞株,得到双稳定细胞株CHO-Tet-On-TPO,并筛选高表达、低背景克隆.当培养基中不加强力霉素时,RT-PCR和Western印迹未见TPO表达,ELISA测定培养上清TPO水平为0.1μg/L.当培养基中加入2mg/L强力霉素时,RT-PCR和Western印迹可见TPO表达条带,ELISA测定培养上清TPO水平为10.8μg/L,两者相差108倍.本试验通过强力霉素调控TPO基因在CHO细胞中的表达,有望为TPO基因治疗提供一条可控的安全途径.
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人CD40-Ig融合蛋白表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达
CD40/CD40L途径是除B7/CD28途径之外的重要的共刺激信号转导途径,在T细胞活化过程中扮演着十分关键的角色.因而,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用.本研究旨在获得人CD40分子胞外区和人IgG 1 Fc段的融合蛋白,以探索阻断CD40/CD40L共刺激途径在免疫治疗中的潜在应用.首先,从人B淋巴瘤细胞系Daudi中提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术扩增人CD40分子胞外区基因,将扩增产物连接入pGEM T Easy载体中构建克隆载体pGE40,利用全自动DNA测序仪进行序列测定.将测序正确的胞外区片段插入至含人IgG 1类抗体重链基因组序列的pIG 1载体中构建瞬时表达载体,命名为pIG/40 Ig.用DEAE-Dextran/Chloroquine法转染COS-7细胞,夹心ELISA法和Western印迹分析鉴定培养上清中CD40-Ig融合蛋白的表达及免疫学活性.在重组载体pIG/40 Ig转染COS-7细胞后,ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达;Western印迹鉴定发现在相对分子量50 kD左右有一特异条带,该分子可同时被抗人CD40单抗G28-5和抗人Ig γ链的单抗识别.本研究成功地扩增人CD40基因并构建了人CD40-Ig融合基因表达载体,在C0S-7细胞中获得功能性表达,为进一步研究CD40/CD40L途径在移植物抗宿主病的预防与治疗中的可能作用奠定了基础.
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应用SCF+IL-2等细胞因子从脐血CD34+细胞扩增T细胞
肿瘤和艾滋病(AIDS)的基因治疗或免疫治疗的研究需要大量的T细胞克隆.尽管T细胞来源于CD34+细胞,但由于需要胸腺组织的参与,使其在体外扩增大量细胞克隆非常困难.本研究用脐血单个核细胞作为辅助细胞,在SCF+IL-2等细胞因子的作用下,人脐血CD34+在此培养条件下,不断产生CD4+或CD8+T细胞至少持续3周.在培养扩增过程中,发现CD4+和CD8+T细胞的比例有一个不断变化的动态过程,培养体系中可以检测到CD4和CD8双阳性细胞的存在;RT-PCR可检测到负责TCR重排的RAG-2基因的表达,说明所获得的T细胞来源于CD34+细胞.本研究为从CD34+细胞获得大量的T细胞克隆提供了一个简便的体外培育体系.
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甲氨蝶呤对单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促凋亡作用
一般认为急性髓细胞白血病(AML)是对甲氨蝶呤(MTX)原发耐药的恶性肿瘤.AML细胞除急性单核细胞白血病(AML-M5)细胞与MTX孵育时,由于不能象急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤(MTXPG),而被认为对MTX不敏感.为了开发对AML-M5新的治疗,本实验采用了具有单核细胞特征的U937细胞系进行研究.细胞分别通过不同浓度(1 nmol/L-100μmol/L)MTX孵育24小时或48小时后,通过XTT法评估细胞生长抑制情况.24小时的半数抑制浓度(IC50)为0.04μmol/L;48小时的IC50为0.037μmol/L,90%细胞抑制浓度(IC90)为0.39μml/L.为了解MTX细胞毒作用的发生机制,进一步分析了细胞的死亡过程.采用了系列实验,包括台盼蓝拒染法、流式细胞术、显微镜(瑞氏染色法)及DNA片段分析进行研究.结果在MTX作用后短时间内(4或6小时)无明显的细胞凋亡特征出现.随5 nmol/L-10μmol/L MTX作用8小时后,亚G1(凋亡)峰的比率从0.1μmol/L的3.2%增加到5.0μmol/L的18.2%,S期的比率从0.01 μmol/L的41.2%到10 μmol/L的19.1%.可见到DNA片段电泳后细胞凋亡的特征性改变.MTX所引发U937细胞的生长阻滞和凋亡特征,提示它可用于AMLM5治疗的潜在可能.
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人脐血移植的裸鼠模型
采用BALB/cnu+裸鼠,建立脐血移植的裸鼠模型,探讨分离、冻存后的脐血造血细胞在小鼠体内的造血活性及进入体内后的迁移、定居规律,为临床移植及大规模建立脐血库作准备.结果显示羟乙基淀粉沉降法分离及以DMSO为保护剂的阶段降温法冻存脐血造血细胞回收率高,活力好,每只小鼠输入(1.0-2.0)×107个脐血单个核细胞,就能在其体内查到成活的证据.结果表明:①羟乙基淀粉沉降法和以DMSO为保护剂的阶段降温法能有效地回收脐血造血细胞和保持其造血活性,在临床移植和建立脐血库时可以采用.②人类脐血富含造血干细胞,能跨越种属障碍,在裸鼠体内移植成活.③脐血造血细胞进入裸鼠体内后,先散布于骨髓、肝、脾、肺、肾等脏器间,后定居于骨髓.冻存可能影响造血细胞表面粘附分子,影响其定居行为,但并不影响其造血活性.
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骨髓间充质干细胞的研究前景
除造血干细胞以外,骨髓中还含有另一类干细胞,被称为间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC).在不同的诱导条件下,这类细胞可分化为多种造血以外纽织特别是中胚层和神经外胚层来源的组织细胞,如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞和星形神经胶质细胞等.骨髓间充质干细胞易于分离和培养扩增,还易于外源基因的导入和表达,有望成为一种新的细胞治疗和基因治疗的靶细胞,在多种造血以外组织的缺陷性疾病、退行性疾病和遗传性疾病的细胞治疗和基因治疗中具有重要的应用前景.
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骨髓增生异常综合征基因缺陷的研究
骨髓增生异常综合征是一种造血干细胞克隆异常性疾病.近代分子遗传学的发展使我们对其分子水平上的形成机制有了进一步的了解.本文主要从原癌基因的异常表达、肿瘤抑制基因蝌表达的缺失和DNA修复机制的异常等方面概括地论述了骨髓增生异常综合征基因缺陷的研究进展.
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转录因子GATA-2在早期造血过程中的作用
转录因子GATA-2是GATA家族的一成员,以其锌指结构结合于[(T/A(GATA)A/G]的共同DNA序列结构.近期,通过敲除小鼠GATA-2基因的实验证明了GATA-2在造血细胞发育中的重要地位.GATA2基因断裂导致全部造血祖细胞的减少;相反,强制表达GATA-2则阻止正常造血.GATA-2的调节作用发挥于早期胚胎时期并与其它的GATA转录因子共同作用于粒系、红系、巨核系和肥大细胞系等的增殖和分化过程中.在人髓系白血病细胞株和大多数白血病病人中能检测到GATA-2的mRNA和蛋白.虽然有资料显示GATA-2能转化Cas-Br-E和graffi逆转录病毒,后者可诱导小鼠发生白血病,但GATA-2在白血病发生中的作用仍不明确.
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人类免疫缺陷病毒Ⅰ型载体研究进展
人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-Ⅰ)为慢病毒家族成员之一,除gag,pol与env等结构基因外,其结构中还含有编码2个调节蛋白及4个附属蛋白的基因.目前已构建了多种类型的复制缺陷性HIV-Ⅰ载体,产生的病毒滴度高可达107 TU/ml;对包装细胞系的研究发现,将4个附属基因全部去除对载体的转导能力并无显著影响.基因组分离式包装系统降低了产生具有复制能力的病毒的可能性.HIV-Ⅰ载体具有两大特点:可有效转导人CD34+造血干/祖细胞、重复注射不引起排斥反应.改建后的HIV-Ⅰ载体具有广泛的宿主范围.
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白血病患者骨髓基质细胞上清TNF-α含量的测定
近年来,人们对白血病细胞自分泌造血细胞因子进行了广泛的研究,对于揭示白血病细胞的生物学特性及造血调控提供了实验依据.为研究白血病骨髓基质细胞对造血调控的影响,我们对13例白血病骨髓基质细胞集落培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量进行了测定.
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环磷酰胺加全身照射预处理进行自体骨髓移植后生育恢复(一例报告)
用大剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)及全身照射(total body irradiation,TBI)作为预处理方案进行骨髓移植,绝大多数患者术后伴发终身不育症[1].对此类病人而言,生育能力的恢复十分少见,男性患者尤为如此.我们曾收治一例男性患者,用CY+TBI方案预处理进行自体骨髓移植后成功生育.现报道如下.
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当前造血干细胞研究面临的挑战
在新千年到来的时刻,综观一下造血干/祖细胞基础和临床研究当前面临的众多难题,会有益于探讨我国实验和临床血液学如何赶上国际先进水平的.
年 | 期数 |
2019 | 01 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |