中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位: 国家中医药管理局
- 主办单位: 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子: 1.62
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1005-9903
- 国内刊号: 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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多伞阿魏体外抗胃癌活性筛选、细胞凋亡及周期阻滞机制
目的:研究确定新疆特色维族药多伞阿魏体外抗胃癌活性部位及其敏感胃癌细胞系,并探讨多伞阿魏诱导胃癌细胞凋亡和细胞周期阻滞情况,为其进一步在抗胃癌方面的研究、开发与应用提供实验依据.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度多伞阿魏不同提取物(挥发油,95%乙醇提取物,及其石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位,水部位)分别对5种胃癌细胞系(AGS,MKN-45,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法观察多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位对胃癌细胞AGS和SGC-7901的影响情况;并应用细胞流式仪检测多伞阿魏不同提取部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901的凋亡和周期阻滞影响情况.结果:与空白组比较,多伞阿魏挥发油,95%乙醇提取物,石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位对5种胃癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P<0.05),并呈现浓度依赖关系.挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(7.98 ± 2.62)mg·L-1,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞系均具有较好的敏感性,对胃癌细胞SGC-7901为敏感,其IC50为(8.73 ± 0.55)mg·L-1,而正丁醇部位和水部位未呈现出明显的细胞增殖抑制作用;多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901后,细胞核被Hoechst33258染色呈亮蓝色,且随着药物浓度的增加蓝色荧光越强;流式细胞凋亡检测结果显示,多伞阿魏不同提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901发生不同程度的凋亡(P<0.05),且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率明显增高;流式细胞周期检测结果显示,与空白组比较,多伞阿魏挥发油使胃癌细胞AGS的周期发生明显改变,细胞休眠期/DNA复制前期(G0/G1期)细胞比例增高,DNA复制期(S期)细胞比例降低,DNA复制后期/有丝分裂期(G2/M期)比例降低(P<0.05);与空白组比较,多伞阿魏三氯甲烷部位使胃癌细胞SGC-7901的周期也发生显著改变,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期比例降低(P<0.05).结论:多伞阿魏挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的细胞毒活性,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞均具有较好的增殖抑制作用,尤其对胃癌细胞SGC-7901 为敏感;多伞阿魏各提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901主要发生晚期凋亡,而多伞阿魏乙酸乙酯部位诱导胃癌细胞AGS主要发生细胞早期凋亡;多伞阿魏挥发油能够将胃癌细胞AGS阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期及G2/M期;伞阿魏三氯甲烷部位将胃癌SGC-7901细胞周期阻滞于S期.研究表明多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位具有较好的抗胃癌活性作用,具有潜在的研究价值和开发利用空间,并为多伞阿魏体内抗胃癌及其抗胃癌机制研究提供了一定的科学依据.
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风湿宁对风寒湿痹证CIA大鼠模型滑膜组织中TLR4/NF-κB信号通路的影响
目的:探讨风湿宁对风寒湿痹证胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型滑膜组织中Toll样受体4/核转录因子-κB (TLR4/NF-κB)信号通路的影响及相关的作用机制.方法:SPF级雌性Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,阳性药组(来氟米特片,2.33mg·kg-1),风湿宁低、中、高剂量组(9.12,18.24,36.48 g·kg-1),每组9只.除正常组外,其余各组大鼠采用风寒湿外感致病因素刺激,结合牛Ⅱ型胶原乳化剂诱导的方法,制备风寒湿痹证CIA大鼠模型.造模成功后,各组大鼠给予相应药物灌胃干预,每日1次,连续4周.观察药物对大鼠关节肿胀度,酶联免疫吸附测定法(ELISA)血清类风湿因子(RF),环瓜氨酶肽(ACPA),白细胞介素(IL)-1β,IL-10,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)滑膜组织中TLR4,髓样分化因子88(MyD88),NF-κB酶抑制蛋白α(IκBα),NF-κB mRNA和蛋白表达的情况.结果:与正常组比较,模型组CIA大鼠模型的关节肿胀度明显升高,血清RF,ACPA,IL-1β,TNF-α含量显著升高,IL-10含量显著降低,滑膜组织中TLR4,MyD88,IκBα,NF-κB mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,风湿宁低、中、高剂量组可明显降低风寒湿痹证CIA大鼠模型的关节肿胀度与血清RF,ACPA,IL-1β,TNF-α含量,升高血清IL-10水平,下调滑膜组织中TLR4,MyD88,IκB-α,NF-κB mRNA与蛋白表达量(P<0.05,P<0.01).结论:风湿宁可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,从而抑制IL-1β,TNF-α的产生,起到治疗RA的作用,且其疗效与药物剂量有一定相关性.
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黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用
目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制.方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1~3d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组.预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L-1)及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L-1).BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况.结果:与空白组比较,各给药组(10~40μmol·L-1)原代心肌细胞的活力上调(P<0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P<0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P<0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P<0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P<0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P<0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P<0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P<0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P<0.05).结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用.
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鳖甲煎丸对CCl4致大鼠肝纤维化模型中NF-κB信号通路的影响
目的:通过研究鳖甲煎丸对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的抑制作用及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制.方法:使用CCl4复制肝纤维化大鼠模型,鳖甲煎丸药物溶液灌胃,8周末腹主动脉采血,留肝组织检测指标.苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中肝纤维化4项,基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达;免疫组化法检测大鼠肝组织中p65,转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织中p65,NF-κB抑制蛋白(IκB)α,IκB激酶(IKK)α/β,TGF-β1的表达.结果:病理学结果显示模型组肝小叶被破坏,纤维组织增生严重,而鳖甲煎丸治疗组肝细胞坏死减少,纤维组织增生明显减少,纤维间隔薄;与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组大鼠肝纤维化4项指标,TIMP-1含量明显降低(P<0.05),而MMP-2,MMP-9含量明显上升(P<0.05);免疫组化结果显示鳖甲煎丸治疗组肝组织p65,TGF-β1表达较模型组明显降低,Western blot检测结果显示与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组肝组织中p65,TGF-β1蛋白表达明显减少(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增加(P<0.05),而IKKα/β则无显著变化.结论:鳖甲煎丸能够显著减轻四氯化碳致大鼠肝纤维化的程度,减缓其发展,主要与鳖甲煎丸能够抑制p65的表达,从而阻断NF-κB信号通路,减少其下游靶基因TIMP-1,TGF-β1的合成,上调MMP-2,MMP-9的表达,从而加快细胞外基质的降解有关.
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葛根芩连汤含药血清对IR-HepG2细胞糖代谢调控关系分析
目的:探索葛根芩连汤含药血清对胰岛素抵抗(IR)的HepG2(IR-HepG2)细胞糖代谢的调控关系.方法:将正常的HepG2细胞作为空白组,IR-HepG2细胞分为模型组,非诺贝特组,葛根芩连汤低、中、高剂量组,以葡萄糖消耗量为药效指标,采用色谱-质谱联用技术,对IR-HepG2细胞及给药后的IR-HepG2细胞内代谢产物进行分析,经过Mass Profiler Professional(MPP)软件对数据进行分析,得出生物标志物,验证之后,研究呈剂量依赖的生物标志物对糖耗量的关系.结果:发现葛根芩连汤含药血清能提高IR-HepG2细胞的糖耗量,其调节机制可能和文中6个生物标记物有关,已确定其中3个生物标志物是存在剂量依赖性且对糖代谢具有调控作用.结论:葛根芩连汤含药血清可能通过调节IR-HepG2细胞色氨酸,泛酸和腺嘌呤的量达到提高糖代谢的作用.
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大黄-黄芩配伍应用对脑损伤早期癫痫易感性的影响
目的:研究大黄-黄芩配伍应用对小鼠脑损伤早期癫痫易感性的影响,探讨该药对抗脑损伤后癫痫的机制.方法:将SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组,模型组,大黄-黄芩药对低(1g·kg-1),高剂量组(4g·kg-1)及阳性组(2.6g·kg-1丙戊酸钠).除空白组外,其余各组采用自由落体法建立小鼠封闭性颅脑损伤模型,于脑损伤后给予相应药物灌胃治疗,连续7d.于末次给药后给予戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)亚惊厥剂量刺激,通过行为学观察各组小鼠的癫痫发作潜伏期及平均发作强度,脑电图(electroencephalogram,EEG)分析小鼠的脑部放电图谱,统计0~20Hz的放电总和;免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)计数海马CA1,CA3区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测神经元Na+-K+-2Cl-共转运体-1(NKCC1)的蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组的小鼠癫痫发作潜伏期明显缩短,脑部异常高频放电明显增多,海马CA1,CA3区的GFAP阳性细胞计数显著增加(P<0.05),且神经元NKCC1的表达也较高(P<0.05);与模型组比较,药对低、高剂量均可延长癫痫发作的潜伏期,减少脑部异常放电,降低海马区GFAP阳性细胞数以及神经元NKCC1蛋白的表达,且药对高剂量组与模型组比较具有显著性差异(P<0.05).结论:大黄-黄芩配伍应用可降低脑损伤早期癫痫的易感性,作用机制可能与星形胶质细胞的调控作用有关.
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黄芪甲苷对博来霉素诱导的小鼠特发性肺纤维化自噬和焦亡的影响
目的:探究黄芪甲苷对特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)小鼠自噬和焦亡的影响及其作用机制,为黄芪抗肺纤维化的研究治疗提供新思路.方法:C57bl/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组、模型组、黄芪甲苷组和地塞米松组.小鼠模型行气管切开术,滴注博来霉素(BLM)诱导成模.黄芪甲苷组和地塞米松组每天分别灌胃黄芪甲苷(50mg·kg-1)和地塞米松(0.125mg·kg-1),假手术组和模型组每天予等量生理盐水.小鼠于14d取材,通过组织病理学染色评估黄芪甲苷对IPF诱导的肺损伤的治疗作用,通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中,LC3Ⅱ,白细胞介素-1β(IL-1β),IL-18和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的水平以评估炎症反应程度和焦亡水平的表达水平.以苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)三色染色观察肺组织形态和胶原纤维的表达水平.免疫组化(IHC)及Western blot分析自噬和焦亡标记蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,模型组肺组织炎症反应明显、胶原蛋白显著增加(P<0.05),与模型组比较,黄芪甲苷组明显抑制肺组织炎症反应,下调胶原蛋白表达(P<0.05).IHC和Western blot检测结果均显示,黄芪甲苷能显著提高LC3Ⅱ蛋白表达(P<0.05)同时抑制p62蛋白积累(P<0.05),降低Caspase-1,IL-1β和IL-18蛋白表达(P<0.05,P<0.01)的表达水平.结论:黄芪甲苷治疗显着改善了BLM诱导的小鼠肺纤维化,其作用机制可能与抑制焦亡并增强自噬有关.研究表明黄芪甲苷在抑制肺纤维化方面具有的治疗潜力.
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杜仲中松脂素二葡萄糖苷和松脂素对成骨细胞中OPG和RANKL表达的影响
目的:观察杜仲中松脂素二葡萄糖苷及其苷元松脂素对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 MC3T3-E1的影响.方法:采用质量浓度为1×10 -7~1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷与松脂素体外干预MC3T3-E1成骨细胞48,72 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞骨保护素(OPG)与核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的水平.结果:与空白组相比,培养48 h,1×10 -4~100μg·L-1松脂素二葡萄糖苷及1×10 -4~1μg·L-1松脂素均能促进成骨细胞增殖(P<0.05,P<0.01);培养72 h,1 ×10 -3~100μg·L-1松脂素二葡萄糖苷及0.1μg·L-1松脂素能促进成骨细胞增殖(P<0.05,P<0.01).与空白组相比,培养48 h时,质量浓度为1×10 -4~1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷、松脂素均能够显著促进成骨细胞ALP分泌(P<0.01);培养72 h时,质量浓度为0.1~1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷和1×10 -4~1×103μg·L-1松脂素均能显著促进成骨细胞ALP分泌(P<0.05,P<0.01).与空白组相比,培养48 h,1×10 -5~10μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷和松脂素均能促进细OPG蛋白分泌(P<0.05,P<0.01);只有松脂素在1×10 -5,1×10 -3μg·L-1时能明显抑制RANKL蛋白的分泌(P<0.01),在1×10 -5~0.1μg·L-1时提高OPG/RANKL(P<0.01).结论:松脂素二葡萄糖苷与松脂素均能通过促进成骨细胞的增殖和分化达到抗骨质疏松作用,但其作用机制不同,松脂素二葡萄糖苷主要通过促进OPG分泌来发挥,而松脂素则既能通过促进OPG分泌又能通过抑制RANKL表达来发挥作用.
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黄芪丹参提取物配伍对大鼠骨髓源性EPCs中VEGF,KDR,Ang I及eNOS表达的影响
目的:探讨黄芪丹参提取物配伍对骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体KDR(kinase insert domain receptor,KDR),血管生成素Ⅰ(angiopoietin Ⅰ,AngⅠ)及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitricoxide sythase,eNOS)表达的影响及其可能的作用机制.方法:将离体培养、鉴定后的骨髓源性EPCs,使用黄芪提取物、丹参提取物、黄芪丹参提取物配伍(10,10mg·L-1,各5mg·L-1)分别处理,并设置空白组,使用逆转录PCR(RT-PCR)及实时荧光定量 PCR(Real-time PCR)检测各处理组EPCs中 VEGF,KDR,AngⅠ和 eNOS mRNA的表达水平;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EPCs中VEGF,KDR,AngⅠ和eNOS蛋白的表达情况.并使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液上清中VEGF的含量.结果:PCR结果显示,与空白组比较,丹参提取物、黄芪提取物组及黄芪丹参提取物配伍组的VEGF,KDR,AngⅠ和eNOS mRNA的表达水平均有显著上调(P<0.05,P<0.01).Western blot结果显示,与空白组比较,丹参提取物、黄芪提取物组VEGF,KDR,AngⅠ和eNOS蛋白表达均有显著上调(P<0.05,P<0.01),而黄芪丹参提取物配伍组中的表达量显著高于其他3组(P<0.01),尤其是EPCs细胞培养液上清中的VEGF.ELISA结果显示,黄芪丹参配伍组EPCs中VEGF蛋白含量显著高于其他3组(P<0.01).结论:以"益气化瘀通络生脉"为治则的黄芪丹参提取物配伍可显著调控EPCs促血管新生作用,其作用可能与上调VEGF密切相关.
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番石榴叶总黄酮对慢性胰腺炎小鼠纤维化的影响
目的:探讨番石榴叶总黄酮(total flavonoids from Psidium guajava leaves,TFPGL)对慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)小鼠纤维化的影响及其机制.方法:将50只C57BL/6小鼠随机均分为正常组,CP模型组,oxidized ATP (oxATP)组,TFPGL低、高剂量组.后4组小鼠腹腔注射雨蛙素50μg·kg-·1h-1(溶于200μL生理盐水),每天6次,每周3d,连续6周,建立慢性胰腺炎小鼠模型.6周后,oxATP组腹腔注射oxATP(15μg·kg-·1d-1,溶于200μL生理盐水)2周,TFPGL低、高剂量组分别予以TFPGL 0.186,0.372g·kg-1·d-1灌胃2周.同时,正常组小鼠腹腔注射与模型组等体积、等频率的生理盐水.苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺损伤程度;天狼星红染色检测胰腺组织胶原含量;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor 3,NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附法测定胰腺组织中IL-1β(interleukin-1β),IL-18水平.结果:与正常组比较,雨蛙素注射后胰腺损伤加重(P <0.01),Caspase-1,NLRP3,α-SMA,IL-1β,IL-18水平升高(P<0.01).天狼星红染色显示胰腺组织细胞周围胶原Ⅰ(ColⅠ),胶原Ⅲ(ColⅢ)含量较正常组升高(P<0.01).与模型组比较,oxATP组及TFPGL低、高剂量组炎症损伤及纤维化程度均减轻,表现为天狼星红染色程度减轻(P<0.05,P<0.01),Caspase-1,NLRP3,α-SMA,IL-1β,IL-18水平均降低(P<0.05,P<0.01).结论:TFPGL可通过抑制P2X7R介导NLRP3炎性体信号途径活化显著减轻慢性胰腺炎模型小鼠的慢性炎症及纤维化程度.
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不同干燥方法对龙脑樟叶品质的影响
目的:探讨不同干燥方法对龙脑樟叶品质的影响,为确定天然龙脑樟工业化提取工艺提供理论参考依据.方法:采用自然阴干、恒温干燥、真空干燥及真空冷冻干燥4种干燥方法分别处理龙脑樟鲜叶,观察干燥叶的外观形态及粉末显微结构;采用超声辅助水蒸气蒸馏法提取纯化挥发油,应用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)测定右旋龙脑、樟脑及异龙脑含量.结果:自然阴干叶组织中存在较多的类椭圆形油滴,直径0.29~1.04μm,单位面积数目1~5个/μm2,挥发油提取率和右旋龙脑含量低,分别为2.20%和97%;恒温干燥叶组织内存在大量类方形或长方形油滴,挥发油提取率显著高于自然阴干29.28% (P<0.05),真空干燥叶组织内存在大量不规则或椭圆形油滴,单位面积数目显著多于自然阴干(P<0.05),挥发油提取率及右旋龙脑含量分别显著高于自然阴干23.42%和0.63%,真空冷冻干燥叶组织内存在大量类圆形油滴,单位面积数目多,挥发油提取率及右旋龙脑显著高于自然阴干56.76%和1.44%.结论:不同干燥方法对龙脑樟叶中油滴数目、挥发油提取率及化学成分含量等有较大影响.干燥效果以真空冷冻干燥好,其次为真空干燥、恒温干燥和自然阴干.综合分析设备投资、生产成本及干燥效果,表明天然龙脑樟工业化提取采用恒温干燥方法是可行的.
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基于分子印迹电位传感器的八角茴香中莽草酸测定
目的:制备并优化分子印迹电位传感器,考察电极的性能和适用性,并应用于八角茴香中莽草酸的测定.方法:以莽草酸为模板分子,2-乙烯吡啶(2-VPY),4-乙烯吡啶(4-VPY),α-甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,采用本体聚合法分别制备分子印迹聚合物(MIP),负载于聚氯乙烯(PVC)膜中,构成电极敏感膜,制备并优化离子选择性电极;利用扫描电子显微镜(SEM)观察优电极材料及印迹膜的形貌特征;分别考察电极的pH适用性、校正曲线、选择性、响应时间和稳定性;应用电势分析法,测定八角茴香中莽草酸的含量,并采用紫外分光光度法对测定结果进行验证.结果:在优实验条件下,筛选出2-乙烯吡啶(2-VPY)为功能单体,制得分子印迹离子选择性电极,电极材料的粗糙多孔结构以及电极的pH耐受性、选择性、响应时间和稳定性均有利于实际样品分析,方法的检测限可达1×10 -6mol·L-1,线性范围为1×10 -6~1×10 -1mol·L-1,能斯特响应斜率为38.7mV·decade-1,响应时间3min,与紫外分光光度法相比,药材含量测定结果一致.结论:分子印迹离子选择性电极应用于莽草酸测定,具较高灵敏度、选择性、准确性和精密度,稳定性良好,适用于八角茴香样品分析.
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基于UPLC-Q-TOF-MS/MS快速分析亚大黄中的抗补体活性成分
目的:通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术快速分析亚大黄中的抗补体活性成分群,为阐明亚大黄的抗补体活性药效物质基础提供参考.方法:对亚大黄95%醇提物进行萃取得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3个部位,并测定3个部位经典途径的抗补体溶血活性(CH50);采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对3个部位分别进行化学成分的表征,使用质谱分析软件中的目标化合物筛查法,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定化学成分.结果:亚大黄正丁醇部位抗补体活性为0.032g·L-1,强于阳性药肝素钠;在优化的LC-MS条件下,结合Scifinder数据库、对照品和相关文献,鉴定了石油醚部位主要成分9个,主要是脂肪酸及甾醇类化合物;鉴定了乙酸乙酯部位主要成分13个,主要是游离蒽醌类和二苯乙烯类;鉴定了正丁醇部位主要成分25个,主要是蒽醌苷类和二苯乙烯苷类.结论:基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,快捷、准确、较全面地分析鉴定亚大黄的正丁醇抗补体活性部位的化学成分主要为蒽醌苷和二苯乙烯苷类,为一步分离及开发亚大黄中苷类抗补体活性成分提供科学依据.
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HS-SPME-GC-MS联用技术分析不同产地艾叶挥发性成分
目的:采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(HS-SPME-GC-MS)联用技术分析湖北蕲春、江苏南通、浙江台州、云南楚雄和新疆乌鲁木齐5个不同产地的13批艾叶中挥发性成分的含量及分布特征,为蕲艾的道地性的研究提供科学依据,并为艾叶资源的合理利用提供科学参考.方法:采用顶空固相微萃取技术,结合气相色谱-质谱法(GC-MS)对不同产地的13批艾叶中挥发性成分进行分析鉴定,利用峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量,并用化学计量法主成分分析和聚类分析对艾叶中的挥发性成分进行分析.结果:初步鉴定出了187种化合物,主要为烯类、醇类和酮类化合物,不同产地及不同品种艾叶中的挥发性成分具有一定差异,其中湖北蕲春所产的五尖艾品质好.结论:顶空固相微萃取法操作简便、萃取速度快、使用成本低,采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用的方法稳定可靠,适用于艾叶中挥发性成分的快速分析,为艾叶的内在质量评价提供一定的科学依据,并为艾叶资源的合理利用提供科学参考.
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滇黄芩地上部分化学成分的分离鉴定
目的:研究滇黄芩(Scutellaria amoena)地上部分的化学成分.方法:采用90%乙醇加热回流提取滇黄芩地上部分,所得浸膏用水悬浮后用乙酸乙酯和正丁醇萃取分为不同极性部位.继而通过硅胶柱色谱,LH-20羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱及重结晶等方法分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据(MS,1H-NMR,13C-NMR)鉴定化学结构.结果:从滇黄芩地上部分的90%乙醇提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为黄芩素(1),黄芩苷(2),千层纸素A (3),千层纸素A-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(4),汉黄芩素(5),去甲汉黄芩素(6),白杨素(7),白杨素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(8),野黄芩苷(9),5,7-二羟基-6,8-二甲氧基黄酮(10),β-谷甾醇(11).结论:以上化合物均为首次从该种植物的地上部分中分离得到,化合物9,10为首次从该种植物中分离得到.
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五味子果梗化学成分的分离鉴定
目的:研究五味子Schisandra chinensis果梗的化学成分,从药效物质基础的角度探寻其作为五味子补充药物来源的可能性,为充分开发利用五味子植物资源,扩大其药用部位提供实验基础和科学依据.方法:取室温干燥的五味子果梗(6kg),采用70%乙醇回流提取3次,每次2h,提取液减压浓缩至无醇味后以蒸馏水混悬,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取.其中乙酸乙酯萃取物采用正相硅胶柱色谱,反相ODS柱色谱,LH-20羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)过滤柱色谱及制备型HPLC等色谱分离方法进行分离纯化.利用1H-NMR,13C-NMR,HR-ESI-MS等现代波谱学表征方法对所分离得到的化合物进行化学结构鉴定.结果:从五味子果梗的70%乙醇提取物的乙酸乙酯层中共分离得到10个单体化合物,分别鉴定为1β,4α,11α-trihydroxyeudesmane(1),bullatantriol(2),alismoxide(3),sonnerstigmane D(4),zataroside-A(5),magnoliaterpenoid C(6),(Z)-furanosyl-linalooloxide-7-O-[β-D-apiofura-nosyl-(1-6)-1-β-D-glucopyranoside](7),thymoquinol 2-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside (8),8-hydroxy-neo-menthol (9),9-hydroxy-megastigma-4,7-dien-3-one-9-O-β-D-glucopyranoside (10).结论:化合物1~7,9,10为首次从五味子属中分离得到,以上化合物的发现进一步丰富了五味子果梗的化学成分组成,为综合开发利用五味子果梗植物资源提供前期实验基础.
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黄连阿胶汤加减治疗脑卒中后失眠阴虚火旺证的疗效观察
目的:观察黄连阿胶汤加减治疗脑卒中后失眠阴虚火旺证的疗效,探讨其作用机制.方法:将156例符合条件的患者随机分为对照组和治疗组,各78例.对照组口服右佐匹克隆+安眠补脑口服液,治疗组口服右佐匹克隆+黄连阿胶汤加减,疗程均为2个月.比较两组患者治疗前后匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI),日常生活活动能力量表(Barthel),神经功能症状缺损评定量表(NDS)和脑卒中后失眠中医辨证阴虚火旺证量表(中医证候)的评分;检测两组患者治疗前后血清白细胞介素-6(IL-6),降钙素基因相关肽(CGRP),多巴胺(DA)和过氧化脂质(LPO)的含量;比较两组有效率、复发率及不良反应发生率.结果:研究过程对照组脱落6例,治疗组脱落2例.治疗组总有效率98.7%,高于对照组的87.5% (P<0.05);治疗组PSQI,Barthel,NDS和中医证候评分较对照组改善更为明显(P<0.05);治疗组血清IL-6,CGRP,DA和LPO的含量改善优于对照组(P<0.05);治疗组复发率和不良反应发生率低于对照组(P<0.05).结论:黄连阿胶汤加减治疗脑卒中后失眠阴虚火旺证的疗效明显,其作用机制可能与改善PSQI,Barthel,NDS,中医证候的评分及血清IL-6,CGRP,DA,LPO的含量有关.
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益气活血通脉汤对糖尿病动脉硬化闭塞症患者炎症细胞因子及内皮功能的影响
目的:观察益气活血通脉汤对糖尿病动脉硬化闭塞症(ASO)患者炎症细胞因子及内皮功能的影响.方法:按随机数字将2016年4月至2017年8月在河南省中医院治疗的104例ASO患者分为两组,各52例,对照组采用常规方法治疗(包括抗凝、抗血小板聚集、降血压、降血糖、有氧运动锻炼、高压氧呼吸、保健按摩等方法),在对照组的基础上,观察组采用益气活血通脉汤治疗,治疗后,观察两组的疗效,并观察两组治疗前后的踝/肱指数(ABI),血流动力学指标,炎症因子,内皮功能.结果:①疗效,治疗后,观察组的总有效率为96.15%,对照组的总有效率为84.62%,观察组优于对照组(χ2=3.983,P<0.05);②ABI,观察组治疗后的ABI均明显高于对照组(P<0.05);③血流动力学,治疗后,观察组治疗后的全血黏度(ηb),血浆黏度(ηp),红细胞电泳(EEP),血沉(ESR),纤维蛋白原(Fib)均明显低于对照组(P<0.05,P<0.01);④炎症细胞因子,治疗后,观察组治疗后的白细胞介素(IL)-1,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α,高敏C反应蛋白(hs-CRP)均明显低于对照组(P<0.05,P<0.01);⑤内皮功能,治疗后,观察组治疗后的内皮脂酶(EL),内皮素-1(ET-1),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)均明显低于对照组(P<0.01),一氧化氮(NO)明显高于对照组(P<0.01).结论:益气活血通脉汤治疗动脉硬化闭塞症的疗效较好,能够改善血液高凝状态,稳定血流动力学,抑制炎症反应,改善血管内皮细胞的功能.
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健胃消痞汤对胃癌前病变患者转归的影响与机制作用
目的:观察健胃消痞汤治疗胃癌前病变(PLGC)的临床疗效及对胃泌素17,血清胃蛋白酶原、炎症因子水平和胃黏膜组织环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达的影响.方法:将140例符合患者,以SAS软件生成的,随机按数字表法分为对照组和观察组各70例.两组患者均给予导入期治疗,包括给予抑酸、黏膜保护剂、促动力剂、助消化药等对症处理;导入期结束后给予叶酸片,10mg/次,3次/d,饭前15min服用.对照组服用温胃舒胶囊,3粒/次,3次/d.观察组采用健胃消痞汤,每天1剂,两组疗程均为连续治疗4个月.两组患者临床进行治疗前后主要症状评分,检查两组患者治疗前后胃镜和胃黏膜组织病理变化,检测治疗前后胃泌素17(G17),血清胃蛋白酶原(PGⅠ和PGⅡ),白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-γ(IFN-γ)水平和COX-2蛋白表达.结果:两组患者治疗后各项指标均有降低;观察组临床疗效总有效率为91.04%,高于对照组的76.92% (χ2=4.919,P<0.05);治疗后观察组胃镜下黏膜病变积分低于对照组(P<0.01);观察组治疗后上腹疼痛、饱胀、痞闷、嗳气、纳差评分均低于对照组(P<0.01);治疗后观察组黏膜炎症、腺体减少/萎缩和肠上皮化生评分均低于对照组(P<0.01),COX-2蛋白阳性表达低于对照组(P<0.01);治疗后观察组患者清G17,PGⅠ水平均高于对照组(P<0.01),PGⅠ/PGⅡ也高于对照组(P<0.01);治疗后观察组患者 IL-1β和 TNF-α水平均低于对照组,IFN-γ 水平高于对照组(P<0.01).结论:健胃消痞汤能减轻PLGC临床症状和萎缩程度,对肠上皮化生(IM),异型增生(Dys)有一定的阻断或逆转作用;并能提高G17,PGⅠ水平和PGⅠ/PGⅡ比值,抑制COX-2蛋白表达,调节IL-1β,TNF-α,IFN-γ炎症因子水平.
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加味少腹逐瘀汤治疗盆腔炎性疾病后遗症-慢性盆腔痛寒湿凝滞证的临床分析
目的:探讨加味少腹逐瘀汤治疗盆腔炎性疾病后遗症-慢性盆腔痛(SPID-CPP)寒湿凝滞证的止痛效应及对血栓素B2(TXB2)/6-酮-前列环素Flα(6-Keto-PGFlα)和促炎因子的影响.方法:将符合要求的118例患者,按数字表法随机分为对照组和观察组各58例.考虑有感染者给予盐酸左氧氟沙星胶囊,0.2g/次,3次/d,连续治疗14d.对照组口服桂枝茯苓丸,6g/次,2次/d;观察组内服加味少腹逐瘀汤,1剂/d.两组患者均连续治疗3个月经周期,经期不停服.主观疼痛程度采用视觉模拟评分(VAS)评分,客观体征评分采用Mc Cormack量表,寒湿凝滞证评分,均于治疗前后各评价1次;进行治疗前后焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评分;记录治疗后下腹痛等8 个症状转归情况;检测治疗前后肿瘤坏死因子-α (TNF-α),白细胞介素-6 (IL-6),IL-8 和细胞间黏附分子-1(ICAM-1),TXB2和水平6-Keto-PGFlα.结果:治疗后观察组患者VAS评分、寒湿凝滞证评分和Mc Cormack评分均低于对照组(P<0.01);观察组患者SAS和SDS评分均低于对照组(P<0.01);观察组下腹痛、痛经、性交痛、肛门坠胀、白带增多、腹胀等症状的改善情况均优于对照组(P<0.05);观察组TXB2水平和TXB2/6-Keto-PGF1α均低于对照组,6-Keto-PGF1α水平高于对照组(P<0.01);观察组患者血清TNF-α,IL-6,IL-8和ICAM-1水平均低于对照组(P<0.01);观察组临床疗效总有效率为94.55%,高于对照组的为81.48% (χ2=4.427,P<0.05).结论:采用加味少腹逐瘀汤治疗SPID-CPP寒湿凝滞证患者,可缓解疼痛,减轻临床症状,改善患者的抑郁、焦虑状态,抑制促炎因子表达,调节TXB2/6-Keto-PGF1α,有明显的临床疗效.
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白芥子涂法的研究进展
由于疗效广泛、靶点多样、不良反应发生率低,白芥子涂法越来越受到国内外学者的关注.本文就白芥子涂法的临床应用现状(基本组方的配伍比例、给药方式、贴敷穴位、给药方案等)及研究动态进行总结,并指出了研究中存在的问题,如临床应用多凭经验而定、缺乏合理依据、中医药理论的指导作用淡化;给药制剂多为传统剂型,新剂型产品尚未上市;贴敷药物皮肤刺激性大,患者难以接受甚至中断治疗;经穴给药机制分析缺乏深度,尚未揭示药物对腧穴作用的科学内涵;对药代动力学、生物药剂学、量效关系等研究较少.同时,提出必须严格按照循证医学的原则,规范临床应用;在注重临床验方的基础上,积极引进中药缓控释、智能化、靶向制剂等新剂型;全面考察皮肤刺激性影响因素,从药用物质基础角度对皮肤刺激性进行药效学评价,建立临床合理用药方案;采用中药谱效学的研究方法,借鉴现代皮肤免疫学、针灸学的新研究成果,从系统论、整体论的角度综合分析各指标变化的相关性,阐明药物对腧穴作用的科学内涵.
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睡眠剥夺动物模型及其在中医药改善睡眠研究中的应用
整理国内外常用的睡眠剥夺模型建立方法,并探讨其在中医药改善睡眠研究中的应用,为从中医药角度建立新型且更可靠的睡眠剥夺模型做好理论基础.查阅近15年内睡眠剥夺模型建立及应用的相关文献,归纳总结国内外主要的睡眠剥夺模型及其原理和优缺点并给出模型的改进方法,并结合其在中医药改善睡眠相关研究中的应用,比较模型在中医证型方面中各自的不同之处.结果表明啮齿类动物睡眠剥夺模型主要有水平台剥夺模型、应激剥夺模型、强迫运动剥夺模型、化学刺激剥夺模型、轻柔刺激剥夺模型等;果蝇睡眠剥夺模型主要有机械剥夺模型、夜间重复光照剥夺模型、基因修饰法等;中医药改善睡眠研究中的睡眠剥夺动物模型主要包括阴虚失眠模型、肝郁失眠模型、心肾不交失眠模型等.不同动物睡眠剥夺模型有各自优缺点,在进行中医药改善睡眠研究时需根据具体情况灵活选择,其与中医证型结合方面有待完善;现有的睡眠剥夺模型大多在准确性和稳定性方面均有欠缺,影响实验结果的可靠性;睡眠剥夺模型致力于结合基本模型与中医失眠证型表现,而睡眠剥夺模型在中医药方面的应用尚不十分广泛,建立符合中医药研究思路的睡眠剥夺模型应是中医药改善睡眠研究中的重点.
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附子不同炮制品对麻黄细辛附子汤煎剂质量的影响
目的:比较不同附子炮制品制备所得麻黄细辛附子汤(MXF)的质量差异,探析经方中炮制品规格选用的科学性.方法:采用临床常用的5种附子炮制品规格分别制备MXF煎剂,选取MXF中具有效毒二重性的化学成分为评价指标,考察不同附子炮制品对MXF煎剂中效毒成分含量的影响.结果:建立了MXF中13种指标成分的含量测定方法.采用多元统计分析筛选出区别附子不同炮制品制备所得煎剂的指标性成分有卡枯醇、甲基丁香酚、细辛脂素、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱.与附子的其他炮制品规格相比,炒附片制备所得煎剂中,双酯型生物碱类成分的含量较低但其单酯型生物碱类成分的含量高.结论:附子不同炮制品制备所得MXF煎剂中效毒成分的含量存在较大差异,可为经方的古为今用提供参考.
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Box-Behnken响应面法优化铁皮石斛的真空冷冻干燥工艺
目的:采用响应面法优化铁皮石斛的真空冷冻干燥工艺,为其冷冻干燥工业化生产提供理论依据.方法:在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法,以总多糖质量分数为指标,考察升华干燥温度、升华干燥时间、真空度3个因素对铁皮石斛真空冷冻干燥工艺的影响,优化铁皮石斛的冻干工艺条件.采用HPLC建立铁皮石斛氨基酸类成分的指纹图谱,ODS-Hypersil色谱柱(0.46cm×20cm,5μm),检测波长338nm(0~37.5min)和262nm(37.5min之后),柱温35℃.通过比较工艺优化后干燥样品与鲜品铁皮石斛指纹图谱的相似度,验证真空冷冻干燥工艺的可行性.结果:铁皮石斛佳冷冻干燥工艺条件为升华干燥温度-16.4℃,升华干燥时间11.04h,真空度85Pa.在此条件下,干燥的铁皮石斛样品总多糖平均质量分数23.74%,与预测值基本一致,铁皮石斛干燥品与鲜品指纹图谱的相似度>0.90.结论:通过Box-Behnken响应面法建立的模型预测性较好,适用于铁皮石斛真空冷冻干燥工艺条件的优化.
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穿心莲内酯过饱和自微乳化释药系统的制备及体外评价
目的:优选穿心莲内酯过饱和自微乳化释药系统的处方工艺,以提高穿心莲内酯的溶解度及生物利用度.方法:通过溶解度试验及伪三元相图的工艺初步筛选后,采用单纯形网格法,以粒径、多分散指数和乳化时间为指标,确定穿心莲内酯自微乳的处方;以析晶情况、粒径、多分散指数、乳化时间以及穿心莲内酯的溶出度为考察指标筛选佳促过饱和抑制剂.结果:穿心莲内酯过饱和自微乳处方为油酸乙酯-(聚山梨酯-80)-聚乙二醇400-羟丙基甲基纤维素K4M (20:35:45:1).穿心莲过饱和自微乳乳化后的平均粒径(29.26 ± 0.56)nm,多分散指数0.19 ± 0.02,Zeta电位(-10.23 ± 2.34)mV,乳化时间(62.39 ± 2.03)s,1h累积溶出度高达91%.结论:加入羟丙基甲基纤维素K4M后可明显抑制穿心莲内酯自微乳液的析晶时间,增加自微乳的稳定性;相较于普通自微乳可明显提高穿心莲内酯的体外溶出度,进而提高该成分的生物利用度.
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生长年限、采收期及施肥对唐古特大黄中儿茶素含量的影响
目的:比较青海省东部农业区不同生长年限、采收期及施肥对唐古特大黄Rheum tanguticum药材中儿茶素含量的影响,确定这一区域采收唐古特大黄的佳时间和施肥量.方法:设置5月,7月,10月3个采收期采收施加肥料(磷肥、钾肥)的二、三、四年生栽培唐古特大黄,样品的甲醇提取液高效液相色谱法(HPLC)分析采用Platisil SB-C18色谱柱 (4.6mm × 250mm,5μm);柱温25℃;以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱;进样量15μL,流速0.8mL·min-1;检测波长224nm.结果:儿茶素在进样量0.424~10.60μg时线性关系良好,相关系数为0.9999.随生长年限的增加,儿茶素含量随之增加;同一年限不同采收期儿茶素平均含量5月份高,7月份次之,10月份低;施肥能够增加唐古特大黄中儿茶素的含量.结论:以儿茶素含量为采收指标时,宜采收三年生或四年生唐古特大黄,佳采收期为5月,宜施加磷肥P2O545kg·ha-1.三、四年生唐古特大黄5月份,7月份儿茶素平均含量均>20mg·g-1.建议唐古特大黄中儿茶素质量分数不少于20%定为完善唐古特大黄药材质量控制的实验依据.
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不同光质对茅苍术生长、抗氧化酶活性及挥发油含量的影响
目的:基于茅苍术在林下栽培优于露地栽培,开展不同光照试验,研究不同光质对茅苍术生长发育及挥发油成分含量的影响.方法:分别设置CK(空白组),红光,蓝光,红光-蓝光(9:1)[简称红蓝(9:1)],红蓝(6:1),红蓝(3:1)共6个不同光质组,生长9个月后采样分析.结果:红蓝(9:1)光照条件下茅苍术的生物量(23.18g)及4种挥发油成分(苍术素、苍术酮、苍术醇和β-桉叶醇)总量(3.74%)高;其次是红蓝(6:1)组,生物量18.32g,4种成分总量2.97%.红蓝(9:1)光照条件下净光合速率、蒸腾速率、气孔导度和胞间CO2浓度等光合参数均高于其他处理组,且大部分具有显著性差异.不同光质处理组下超氧化物歧化酶、过氧化物酶、还原型谷胱甘肽、还原型抗坏血酸和过氧化氢酶等抗氧化酶活性均高于空白组,且大部分具有显著性差异;红蓝(9:1)光照下丙二醛含量显著低于空白组.结论:综合各项指标结果发现,红蓝(9:1)光照条件适合茅苍术的生长发育,为茅苍术产量及质量的提升提供新的种植模式.
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基于ITS2序列及其二级结构对防己及其混伪品的鉴定
目的:利用核糖体DNA第2内部转录间隔区(ITS2)及其二级结构对传统中药材防己及其混伪品进行分子鉴定及聚类分析.方法:从GenBank上下载36条防己及其混伪品的ITS序列,利用Geneious R11.0.3进行序列比对,运用MEGA 7.0计算种内、种间K2P遗传距离,构建邻接(NJ)系统进化树,同时利用ITS2数据库在线软件预测各样本的二级结构,并利用4Sale软件进行二级结构的比对,终运用ProfDistS软件基于距离法构建了PNJ进化树.结果:各种间平均遗传距离均远大于种内平均遗传距离,NJ树显示防己及其混伪品聚为6个分支;混伪品与正品的二级结构均有一定的差异;PNJ进化树比NJ树显示出更多的分支和更高的分辨率.结论:虽然ITS2可以作为防己及其混伪品的DNA条形码,但是若包含ITS2二级结构所蕴含的系统发育信息,鉴定结果更加精准.
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丛枝菌根真菌对掌叶大黄产量及次生代谢产物的影响
目的:观察丛枝菌根(AM)真菌在人工栽培条件下对掌叶大黄根和根茎的产量及化学成分含量的影响.方法:通过室内盆栽对照试验,设不接种AM组为CK组,设接种摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae)为AM组,每处理组重复15盆,每盆播种掌叶大黄种子10粒,出苗后间苗3株.采用文献方法计算菌根侵染率和浸染强度,采用称重法测定掌叶大黄根和根茎产量,采用高效液相色谱法测定掌叶大黄根和根茎中蒽醌类成分的含量,比较施加AM真菌后,掌叶大黄生物量、蒽醌类组分的变化.结果:AM组与CK组的侵染率分别为(96.96 ± 1.57)%和0,侵染强度分别为(62.07 ± 3.40)%和0;与CK组比较,AM组根和根茎产量提高了(42.96 ± 2.12)%,总蒽醌类平均值提高了127.43%,差异均有统计学意义(P <0.05).HPLC分析结果表明,AM组与CK组掌叶大黄蒽醌类在含量和成分间的比例上发生了一定的变化,但接种AM真菌处理并未导致掌叶大黄有效成分的根本改变.结论:接种AM真菌后,能明显促掌叶大黄根和根茎的生长发育,增加药用部位中有效成分的含量,但在试验期间未造成掌叶大黄质量的变异.
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桂皮醛对糖尿病小鼠血糖水平的影响及机制
目的:观察桂皮醛(cinnamaldehyde,CA)降血糖作用,并探讨其作用机制.方法:6~8周龄雄性db/db小鼠24只,按血糖随机分为模型组,二甲双胍组(0.2g·kg-1),桂皮醛低剂量组(0.025g·kg-1)和桂皮醛高剂量组(0.05g·kg-1),每组6只,另设同周龄C57BL/6J小鼠6只为正常组.治疗4周后,检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),总胆固醇(total cholesterd,TC),甘油三酯(total triglyceride,TG),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),血清胰岛素(fasting insulin,Fins)水平,计算胰岛素抵抗指数(homa insulin-resistance,HOMA-IR);取肝脏组织检测肝糖原含量以及高碘酸-希夫(periodic acid-Schiff stain,PAS)染色;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏相关mRNA和蛋白表达.结果:治疗4周后,与模型组比较,CA组小鼠体质量,FBG,Fins,HOMA-IR,血脂明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏糖原含量显著升高;小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphate,G-6-P),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)mRNA表达显著降低(P <0.01),p-蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),p-糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达显著升高(P <0.01).结论:CA具有降低血糖作用,相关机制可能是通过上调肝脏胰岛素信号通路Akt,GSK-3β磷酸化水平,抑制G-6-P,PEPCK mRNA表达实现.
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夏枯草提取物对2型糖尿病ZDF大鼠肝糖原代谢的影响
目的:观察自发性2型糖尿病(T2DM)大鼠Zucker diabetic fatty(ZDF)(fa/fa)与ZDF(fa/+)及夏枯草提取物干预后,ZDF(fa/fa)肝糖原含量及糖原合成酶(GSY2),葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)基因表达的影响,探讨其调节肝糖原可能的机制.方法:以 ZDF (fa/fa)大鼠16只为动物模型,分为模型组及夏枯草提取物组(12.25mg·kg-1·d-1),每组8只,另取ZDF瘦型大鼠8只为正常组.每2周测大鼠测空腹血糖(FBG)和体质量,第8周进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),灌胃给药8周后腹主动脉取血,处死大鼠,留取肝脏组织-80℃储存及蜡块包埋备用.酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清胰岛素(FINS)含量,过碘酸雪夫染色法(PAS染色法)检测肝糖原含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测GSY2,G-6-P和GLUT2 mRNA表达.结果:给药8周后,与模型组比较,夏枯草提取物明显增加大鼠肝糖原含量,降低大鼠体质量(P<0.05,P<0.01)和空腹血糖(P<0.05,P<0.01),改善葡萄糖耐量(P<0.05),降低HOMA-IR指数(P<0.01),上调肝脏组织GSY2,GLU2 mRNA表达(P<0.05),下调G-6-P mRNA表达(P<0.05).结论:夏枯草提取物具有增加大鼠肝糖原含量的作用,且能降低大鼠体质量、血糖和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)指数.夏枯草提取物可能通过上调肝脏组织GSY2和GLU2 mRNA表达,下调G-6-P mRNA表达而发挥作用.
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芹菜素对肥胖型小鼠脂肪组织AMPK信号通路的作用机制
目的:研究芹菜素对肥胖型db/db小鼠脂肪紊乱的作用及机制.方法:8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组、芹菜素组(50mg·kg-1·d-1),雄性C57BL/6J小鼠为正常组,药物干预4周后,检测小鼠体质量、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),总胆固醇(total cholesterol,CHO),甘油三酯(total triglyceride,TG),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),血肌酐(serum creatinine,SCr),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);脂肪组织苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察脂肪细胞病理变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测胆固醇应答元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein 1c,SREBP1c),脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS),过氧化物增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor α,PPARα)基因表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)和乙酰 CoA 羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)磷酸化水平.结果:与模型组比较,芹菜素组小鼠体质量,FBG,CHO,TG,FFA明显降低(P<0.05,P<0.01);HE染色脂肪细胞变小,脂质沉积减低;脂肪组织SREBP1c,FAS mRNA表达降低(P<0.01),p-AMPKα,p-ACC蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01).结论:芹菜素可以改善db/db小鼠脂肪代谢紊乱,可能是通过上调脂肪组织AMPK,ACC磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达实现.
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糖痹康对高糖培养雪旺细胞自噬相关蛋白的影响
目的:研究发现细胞自噬是糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的重要发病机制之一,本研究探讨治疗DPN的中药复方糖痹康(Tangbikang,TBK)对高糖环境下大鼠雪旺细胞(rat Schwann cells,RSC)自噬相关蛋白的影响.方法:利用SD大鼠制备TBK含药血清,并采用50mmol·L-1的葡糖糖(Glu)RSC细胞培养基制备高糖RSC细胞模型.实验总共分为6组:正常组(Con,20%正常大鼠血清),高糖组(Glu,50mmol·L-1Glu+20%正常大鼠血清);弥可保组(MKB,50mmol·L-1Glu+20%弥可保含药血清);TBK高剂量组(TBKH,50mmol·L-1Glu+20% TBK含药血清);TBK中剂量组(TBKM,50mmol·L-1Glu+10% TBK含药血清+10%正常大鼠血清);TBK低剂量组(TBKL,50mmol·L-1Glu+2.5% TBK含药血清+17.5%正常大鼠血清).干预48 h后,采用细胞增殖实验细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RSC细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬蛋白(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3 Ⅱ)的表达水平.结果:与Con 组比较,高糖因素使得Glu组RSC增殖活性显著降低(P <0.01),细胞凋亡率显著增加(P <0.01),且自噬相关标志蛋白Beclin 1和LC3 Ⅱ显著下降(P<0.01);与Glu组比较,MKB组与TBKH组RSC细胞增殖显著减弱(P<0.01),MKB组,TBKH和TBKM组RSC细胞凋亡率显著减小(P<0.01),MKB组和TBKH组RSC细胞自噬标志蛋白Beclin 1和LC3 Ⅱ的表达水平显著升高(P<0.01).结论:TBK能够促进高糖环境下RSC细胞自噬,减少凋亡,具有一定的神经保护作用,该研究为DPN新药研发奠定基础.
年 | 期数 |
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2015 | 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
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