中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 중국실험방제학잡지
- 主管单位: 国家中医药管理局
- 主办单位: 中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会
- 影响因子: 1.62
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1005-9903
- 国内刊号: 11-3495/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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参苓白术散对COPD大鼠下丘脑及胃组织Ghrelin,Obestatin的影响
目的:观察参苓白术散干预对肺脾两虚型慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠生长激素释放肽(Ghrelin),肥胖抑制素(Obestatin)蛋白表达的影响,基于Ghrelin/Obestatin信号调节通路从分子水平探讨培土生金法治疗COPD的作用机制和科学内涵.方法:60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、肺脾两虚模型组、参苓白术散组(根据药物干预时间不同,分为28,35,42 d组),每组12只.采用病证结合造模法复制肺脾两虚型COPD大鼠,空白组大鼠吸入空气+气管内注射等量生理盐水+灌服等量生理盐水;模型组及参苓白术散组采用烟熏+气管内滴注脂多糖+灌服冰冷番泻叶浸液建立肺脾两虚型COPD大鼠模型;参苓白术散组给予参苓白术散灌胃,分别于药物干预第28,35,42天处死大鼠,利用免疫组化法及蛋白免疫印迹法测定大鼠下丘脑组织及胃组织中Ghrelin,Obestatin蛋白表达变化.结果:与空白组比较,肺脾两虚模型组大鼠下丘脑及胃组织中Ghrelin,Obestatin蛋白表达及积分吸光度均显著降低(P<0.01);与肺脾两虚模型组比较,参苓白术散组(28,35,42天)大鼠胃、下丘脑组织Ghrelin,Obestatin蛋白表达及积分吸光度均有不同程度升高(P<0.05).结论:参苓白术散可调节肺脾两虚型COPD模型大鼠能量代谢,改善其营养不良状况,其机制可能通过调节Ghrelin,Obestatin动态平衡从而维持机体能量稳态来实现.
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抵当汤调控NF-κB通路干预DM大鼠心肌炎症反应的机制
目的:探讨抵当汤及其蕴含的泻热化瘀通络法对因核转录因子-κB(NF-κB)通路激活而导致的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠心肌炎症反应的影响.方法:选取130只体重达到220 ~ 270 g清洁级SD健康雄性大鼠,分为正常组(10只)和造模组(120只),后者按55 mg·kg-1剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素(strcptozotocin,STZ)溶液建立DM模型.72 h后将造模成功的大鼠随机分为模型组,抵当汤高、中、低剂量组(1.08,0.72,0.54 g·kg-1·d-1),吡咯啉烷二甲基硫脲组(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC组,0.15 g·kg-1·d-1)以及抵当-吡咯啉烷二甲基硫脲组(DP组1.08 g·kg-1·d-1抵当汤+0.15 g·kg-1·d-1PDTC),均采用相应药物1次/d进行灌胃干预.8周后,麻醉状态下腹主动脉取血处死动物,迅速摘取大鼠心脏,置于液氮中储存备用.以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织匀浆中转录NF-κB p65蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌组织匀浆肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达,免疫荧光检测心肌组织细胞黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1),巨噬细胞趋化性蛋白-1(macrophage chemotaxis protein-1,MCP-1)的表达.结果:与正常组比较,模型组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达均明显升高;且模型组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白.与模型组比较,各治疗组NF-κB p65蛋白和TNF-α表达则明显降低;组间比较发现,DP组NF-κB p65蛋白表达与正常组接近,抵当汤高剂量组TNF-α表达则较模型组降低更加显著;各治疗组胞浆内观察到被染成绿色荧光的ICAM-1,MCP-1蛋白不同程度减少,其中DP组被染成绿色的范围少,与正常组为接近.结论:泻热化瘀通络之抵当汤可通过抑制NF-κB通路的激活来减轻DM模型大鼠的心肌炎症反应.
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灰树花多糖对CIF模型磷酸化p38MAPK表达的影响
目的:观察灰树花多糖对化疗相关性疲劳(CIF)模型疲劳程度的改善情况,并初步探讨其可能的机制.方法:6~8周龄SPF级C57BL/6小鼠60只随机分为4组,即空白组,模型组,灰树花多糖低剂量组(5 mg·kg-1)和灰树花多糖高剂量组(10 mg·kg-1),每组15只.将除空白组以外的小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-Fu,40 mg·kg-1),每天给药1次,连续5d,同时灰树花多糖低剂量组和灰树花多糖高剂量组给予不同剂量灰树花多糖灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,期间测量体重和抓力变化.第15天处死动物取材测血尿素氮、血乳酸和肝糖原含量及腓肠肌p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) mRNA和磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达情况.结果:低剂量和高剂量的灰树花多糖均能明显增强CIF小鼠的抓力(P<0.01);低剂量和高剂量灰树花多糖均可明显降低CIF小鼠运动后的血尿素氮值(P<0.05);高剂量灰树花多糖可以明显降低CIF小鼠运动后的血乳酸值(P<0.01);低剂量和高剂量灰树花多糖均可明显降低腓肠肌p38 MAPK mRNA和p-p38 MAPK蛋白的表达水平.结论:灰树花多糖可以有效改善化疗相关性疲劳,可能与下调p38 MAPK基因与p-p38 MAPK的表达有关.
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人参皂苷Rb1对脑缺血大鼠GFAP及脑血流的影响
目的:采用光化学诱导局部脑缺血模型,研究人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠右侧脑皮质区神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及局部脑血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)的影响及可能的机制.方法:48只SD大鼠随机分为模型组,假手术组,GRb1高剂量组(100 mg·kg-1),中剂量组(50 mg·kg-1),低剂量组(25 mg·kg-1),尼莫地平组(1 mg·kg-1),每组8只.用激光多普勒血流监测仪测定缺血后24 h右侧脑皮质区rCBF的改变.用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测GFAP mRNA的表达,用免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测GFAP的表达.应用神经行为学评分评价大鼠神经功能症状.结果:与假手术组比较,模型组rCBF明显下降(P<0.01);与模型组比较,高剂量GRb1组神经功能缺损程度降低(P<0.05),GRb1各组rCBF明显增加(P<0.05);模型组GFAP mRNA和蛋白表达较假手术组明显增加(P<0.05),GRb1组GFAP阳性细胞表达较模型组明显增加(P<0.05),其中以高剂量GRb1组GFAP表达增加明显(P <0.01);GRb1高剂量组与尼莫地平组间差异无统计学意义.结论:在脑缺血急性期GRb1可增加局部rCBF,并促进GFAP的表达,稳定星形胶质细胞形态,保护缺血半暗带细胞.
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豨桐丸对大鼠痛风性关节炎的影响及机制
目的:观察豨桐丸对尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎的影响及其药理机制.方法:分别给予大鼠豨桐丸(200,400,800 mg· kg-)及秋水仙碱(4 mg·kg-1)灌胃用药7d.第5天大鼠踝关节腔注射尿酸钠晶体诱导痛风性关节炎模型.检测大鼠足肿胀和步态评分,苏木素-伊红(HE)染色法检测关节组织学评分,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞形成,免疫组化法分析关节组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析NLRP3炎性体表达.结果:注射尿酸钠晶体导致了大鼠明显的足肿胀,并使步态评分和组织学评分均明显增高,关节组织中的破骨细胞数量及TNF-α,IL-1β,IL-6和NLRP3炎性体表达也都明显增加((P<0.05,P<0.01).给予400,800 mg·kg-1豨桐丸治疗后,大鼠足肿胀显著减轻,步态评分和组织学评分均显著减少,同时关节组织中的破骨细胞数量及TNF-α,IL-1β,IL-6和NLRP3炎性体表达也都显著降低(P <0.05,P<0.01).结论:豨桐丸可抑制尿酸钠晶体诱导的大鼠痛风性关节炎的发展,其机制与抑制炎性介质的表达密切相关.
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糖肾清1号对糖尿病肾病模型大鼠肾组织MCP-1,RANTES表达的影响
目的:观察中药糖肾清1号高、中、低剂量对糖尿病肾病肾组织局部CC族细胞趋化因子表达的影响.方法:建立糖尿病肾病大鼠模型,设正常组、模型组、卡托普利组、糖肾清1号高、中、低剂量组,正常组和模型组每日予去离子水10 mL·kg-1灌胃;卡托普利组每日予卡托普利2.33 mg·kg-1灌胃,糖肾清1号高、中、低剂量组每日分别予糖肾清1号颗粒187,93.5,46.75 mg·kg-1灌胃,连续给药12周后取材.采用时实荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES) mRNA转录,蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测MCP-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定RANTES蛋白表达水平.结果:糖肾清1号可以下调肾组织的MCP-1,RANTESmRNA转录和蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并且呈量效依赖性,肾组织MCP-1和RANTES的表达量为糖肾清1号高剂量组<中剂量组<低剂量组,中药各组以糖肾清1号高剂量组疗效明显.结论:糖肾清1号可通过抑制肾组织MCP-1,RANTESmRNA转录和蛋白表达,延缓糖尿病肾病的发生发展.
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麦冬提取物对胰岛素抵抗大鼠肝组织miRNA-29a及FOXO3表达的影响
目的:探讨麦冬提取物对胰岛素抵抗大鼠肝组织中miRNA-29a及FOXO3表达的影响.方法:选取60只SD级雄性大鼠,随机选取10只为正常组,其余50只建立胰岛素抵抗大鼠模型,造模成功后分为模型组、麦冬提取物高、中、低剂量组、二甲双胍组5组,每组10只,麦冬提取物高、中、低剂量组分别给予150,300,500 mg· kg-麦冬提取物灌胃给药干预,二甲双胍组给予200 mg·kg-1二甲双胍混悬液灌胃给药干预,正常组及模型组给予等体积的生理盐水,分别于给药4,8周后,检测各组大鼠体重(BW),肝重(LW),空腹血糖(FBG),血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),空腹胰岛素(FINs),胰岛素敏感指数(ISI),肝脏指数(LI),C肽;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肝组织miRNA-29a,FOXO3表达水平.结果:正常组大鼠饮食正常,皮毛整洁,精神状态良好,模型组大鼠精神萎靡、皮毛凌乱欠光泽,懒惰,麦冬提取物组及二甲双胍组大鼠皮毛欠光泽,有不同程度活动及饮食减少,精神状态优于模型组;麦冬提取物可明显降低胰岛素抵抗大鼠BW,LW,LI,C肽水平(P<0.05),明显降低TC,TG,FINs水平(P<0.05),显著升高ISI水平(P<0.05),改善大鼠胰岛素抵抗;麦冬提取物明显改善胰岛素抵抗模型大鼠脂肪变性,改善肝脏病理状态;麦冬提取物可明显下调miRNA-29a表达,上调FOXO3表达,且呈现一定剂量依赖性(P<0.05).结论:麦冬提取物可明显改善胰岛素抵抗,推测其机制为下调miRNA-29a表达,上调FOXO3表达.
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扶正祛风方对膜性肾病大鼠蛋白尿及肾脏病理改变的影响
目的:观察扶正祛风方对膜性肾病大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白、血肌酐、血尿素氮及肾脏病理的作用,探讨该方治疗膜性肾病的疗效.方法:大鼠随机分为正常组和造模组,参考Border法制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA),制备膜性肾病大鼠模型.模型制备成功后将造模组分为模型组,扶正祛风方(20.5 g·kg-1)组,扶正祛风方组大鼠给予相应药物灌胃,正常组、模型组同法灌胃相应体积的去离子水,连续灌胃给药治疗4周.分别于0,2,4周检测各组大鼠24 h尿蛋白(24 h-U pro);于给药4周后,测定各组大鼠血清白蛋白(ALB),血尿素氮(BUN)及血肌酐(CRE)含量;取肾组织行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,六胺银(PASM)染色,经光镜观察肾小球及肾小管改变情况;以间接免疫荧光法检测肾小球免疫球蛋白(Ig)G和补体C3沉积情况;经透射电镜观察肾小球基底膜、足突改变情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h-Upro显著升高(P<0.01),血ALB水平显著降低(P<0.01),病理学检测发现大鼠肾组织病理明显改变;与模型组比较,扶正祛风方组大鼠24 h-Upro有所降低(P<0.05),血ALB水平有所回升(P<0.05),病理学形态改善突出,表现为肾小球基底膜免疫复合物沉积、基底膜增厚和足突融合显著减轻.结论:扶正祛风方能有效改善膜性肾病大鼠蛋白尿,升高血ALB水平,显著减轻肾脏病理损伤,延缓膜性肾病的进展.
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石榴花的化学成分分离鉴定
目的:对石榴科石榴属植物石榴的干燥花瓣进行化学成分研究.方法:石榴花用60%乙醇提取,浓缩,依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,对乙酸乙酯部位浸膏,通过硅胶柱、凝胶柱、半制备柱进行分离纯化,结合波谱数据和文献数据进行结构鉴定.结果:从石榴花乙酸乙酯部位浸膏中分离得到12个化合物,分别鉴定为没食子酸(1),没食子酸乙酯(2),木犀草素(3),8-甲雷杜辛(4),7-羟基4',6,-二甲氧基异黄酮(5),刺芒柄花素(6),三粒小麦黄酮(7),蒲公英萜酮(8),齐墩果酸(9),乌苏酸(10),D-半乳糖醇(11),胡萝卜苷(12).结论:其中化合物4~8,11为首次从石榴花(即维吾尔族药古丽娜)中分离得到,5,6,8是首次从该属植物中分离得到.
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UPLC测定全缘叶绿绒蒿花中3种黄酮类成分
目的:采用UPLC测定11批全缘叶绿绒蒿花中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(1→6)-β-D-葡萄糖苷(M1),槲皮素-3-O-[2'''-O-乙酰基-β-D-葡萄糖-(1→6)-β-D-葡萄糖苷](M2)和异槲皮苷(M3)的含量.方法:采用超声提取法,提取溶剂为体积分数90%甲醇,提取时间为45 min,对全缘叶绿绒蒿样品进行处理.色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm × 100 mm,1.8μm),流速300μL·min-1,柱温35℃,检测波长255 nm,以乙腈-0.1%冰乙酸水(16∶84)为流动相,洗脱时间10 min.结果:在11批全缘叶绿绒蒿花样品中,不同产地、不同采集时间的样品所含有的3种黄酮类化学成分含量各不相同,但总体上两种槲皮素葡萄糖苷含量较高,而异槲皮苷的含量较低;马尔康县梦笔山所采样品黄酮苷总含量高于其他采集地,5月和6月采集的样品黄酮苷总含量高于7月.结论:全缘叶绿绒蒿花中所含主要化学成分含量随产地、采收月份不同而有所差异.该方法准确且具有较高灵敏度,可较准确反应全缘叶绿绒蒿花中化学成分的含量,可为全缘叶绿绒蒿花的质量评价和质量标准提高提供依据.
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蒲公英叶脂溶性成分的GC-MS分析及其活性探讨
目的:研究蒲公英叶脂溶性成分的组成及其抗氧化活性和抑菌活性.方法:利用索氏提取法提取蒲公英叶中的脂溶性成分,采用气相色谱质谱联用法(GC-MS)对其组成进行分析鉴定,分别采用磷钼络合物法、邻苯三酚自氧化分光光度法和Fenton氧化法测定其抗氧化活性,纸片抑菌法和微孔扩散法测定其抑菌活性.结果:以该法提取的蒲公英叶脂溶性成分约有36种.蒲公英叶脂溶性成分的总抗氧化活性及其对超氧阴离子自由基(O2-·)和羟基自由基(·OH)的清除率均随样品浓度的增加而增大,但总抗氧化活性、对O2-·和·OH的清除作用均低于维生素C.蒲公英叶脂溶性成分对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌具有较好的抑菌和杀菌作用,其小抑菌浓度和小杀菌浓度分别为0.5,1.72,2.46,3.58 g·L-1和0.84,1.88,3.62,4.74 g·L-1,尤其对金黄色葡萄球菌的抑菌和杀菌效果好.结论:该研究表明蒲公英叶脂溶性成分的组成较为复杂,且有一定的抗氧化活性和良好的抑菌效果,可为蒲公英资源的开发利用提供参考和依据.
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乌梅丸对慢性萎缩性胃炎患者血清炎症指标、免疫功能的影响
目的:探讨乌梅丸对慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)患者血清炎症指标、免疫功能及中医证候积分的影响.方法:选取2014年5月-2016年7月河南省中医院收治的177例CAG患者,以该批患者为研究对象,按照随机数字表法分为治疗组(89例),对照组(88例).对照组CAG患者应用三联疗法进行治疗,在此基础上,治疗组加服乌梅丸汤剂,每日1剂,分2次服用,连续服用3个月后对两组CAG患者疗效、炎症指标、免疫功能及中医证候积分进行评价.结果:治疗组患者总有效率为94.38%,对照组为82.95%,治疗组优于对照组(P<0.05);通过治疗,两组患者白细胞介素(IL)-6,IL-8,肿瘤坏死因子-α(TN F-α)水平均明显降低(P<0.05),且治疗组明显低于对照组(P<0.05);经治疗,两组CD3+,CD4+,CD4 +/CD8+均有明显上升,CD8+水平明显下降(P<0.05),与对照组治疗后比较,治疗组CD3+,CD4+与CD4 +/CD8+明显升高,CD8+水平明显降低(P<0.05);与治疗前比较,治疗后两组中医证候积分均有明显改善(P<0.05),与对照组治疗后比较,治疗组中医证候积分明显降低(P<0.05).结论:乌梅丸治疗CAG作用明显,可以缓解CAG患者临床症状,提高患者机体免疫力,抗炎作用明显.
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培土生金方对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者气道重塑机制的观察
目的:探讨培土生金方治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期肺脾气虚证兼血瘀证的临床疗效及对气道重塑机制的研究.方法:选择160例符合要求的患者,根据就诊先后,采用随机按数字表法分为对照组和观察组各80例.对照组给予噻托溴铵粉吸入剂治疗.观察组噻托溴铵粉吸入剂使用同对照组,并给予培土生金方.两组疗程均为4个月.进行治疗前后肺功能检查,记录用力肺活量(FvC),第1秒用力呼气容积(FEV1),FEV1占预计值百分比(FEV1%);进行治疗后中医证候量表和呼吸困难指数(MMRC)评分;检测治疗前后白细胞介素-6(IL-6),IL-8,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),转化生长因子-β1(TGF-β1),血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶(MMP-2),MMP-9和基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1)水平.结果:观察组患者临床疗效总有效率为89.33%,对照组为73.61%,观察组高于对照组(x2=6.056,P<0.05);治疗后观察组中医证候主要症状评分、总积分,MMRC评分均低于对照组(P<0.01);治疗后观察组FEV1%较治疗前增加,并高于治疗后对照组水平(P<0.05);治疗后观察组患者血清IL-6,IL-8,TNF-α水平均低于对照组(P<0.01);治疗后观察组患者血清TGF-β1,VEGF,MMP-2,MMP-9,TIMP-1水平均低于对照组(P<0.01).结论:培土生金方治疗COPD肺脾气虚证兼血瘀证患者,能缓解临床症状、提高肺功能的作用,并能抑制炎症因子反应,调节生长因子、蛋白酶-抗蛋白酶的失衡,减轻患者气道重塑作用.
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加味升降散对饮停胸胁型结核性胸膜炎的疗效及对患者胸腔积液ADA,免疫功能,T淋巴细胞及炎症因子水平的影响
目的:探讨饮停胸胁型结核性胸膜炎(TBP)患者应用加味升降散对其胸腔积液腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA),免疫功能,T淋巴细胞及炎症因子水平的影响.方法:选取河北大学附属医院2014年3月-2016年3月收治的结核性胸膜炎患者120例,按随机数字表法分为两组.两组均予以胸腔穿刺抽液+抗结核药物常规治疗;观察组在此基础上,给予加味升降散治疗.记录并比较两组连续治疗2个月时胸腔积液ADA免疫功能及炎症因子指标,同时对比中医证候积分及临床疗效.结果:治疗2个月后,观察组总有效率为91.11%,较对照组总有效率73.33%明显升高(P<0.05);两组治疗2个月时胸腔积液ADA水平明显低于治疗前(P<0.05);与对照组比较,观察组治疗2个月时胸腔积液ADA水平明显降低(P<0.05);治疗2个月后,两组免疫球蛋白(IgA,IgG,IgM)和T淋巴细胞(CD3+,CD4+)较治疗前升高,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1),白细胞介素-6(inteukeukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量较治疗前明显降低(P<0.05);两组患者发热、胸胁痛、气促、咳嗽中医证候评分明显降低(P<0.05);与对照组比较,观察组治疗后免疫球蛋白(IgA,IgG,IgM)和T淋巴细胞(CD3+,CD4+)明显升高,TGF-β1,IL-6,IL-8,TNF-α含量降低,发热、胸胁痛、气促、咳嗽中医证候评分降低(P<0.05);观察组胸水引流量、胸水消失时间、住院时间及胸膜厚度均低于对照组(P<0.05);所有患者均获得随访,无病例脱落现象,两组间不良反应发生率比较差异无统计学意义.结论:加味升降散治疗饮停胸胁型结核性胸膜炎疗效确切,降低胸腔积液ADA水平及炎症因子水平,提高免疫功能.
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气滞血瘀证动物模型研究现状
气滞血瘀证是临床常见证型,它的形成与饮食、情绪、环境等因素有关.随着现代人们生活节奏的加快和生活压力的加大,情志不舒在所难免,再加上饮食油腻等方面的原因,很容易引发气滞血瘀型疾病.临床研究和治疗大都停留在外部宏观手段和技术上,很难对证型发展的微观改变及证型演变规律进行深入系统的了解,这就需要制作和临床发病机制相关的动物模型.为了了解近些年气滞血瘀证及病证结合动物模型研究的现状,本文就造模方法、检测指标及造模原理等方面进行综述.气滞血瘀证常见的造模方法有肾上腺素法、右旋糖酐法、声光电复合刺激法、束缚法、夹尾法、高脂寒凝法、睡眠剥夺法等.模型成功与否的验证指标主要为血液流变学指标,其次还有旷场试验、微循环、体重、神经递质、血管内皮因子等方面的检测.常见的气滞血瘀证病证结合模型有子宫内膜异位症气滞血瘀证模型、气滞血瘀证妇科疾病特点模型、糖尿病气滞血瘀证模型、非小细胞肺癌气滞血瘀证模型、气滞血瘀型慢性非细菌性前列腺炎等.不同的造模方法应用不同,本文通过将近些年造模方式、原理、检测指标进行汇总,为规范气滞血瘀证动物模型提供基础.
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少数民族地区右江流域特色民族药研究进展
近年来,党中央、国务院高度重视中医药和民族医药事业的发展.综述近10年来有关右江流域特色民族药的研究现状,简要分析主要存在的问题,并展望民族药的发展前景,为进一步开发和利用民族药提供参考依据,这对于提高少数民族地区群众的身体健康、促进经济社会发展发挥着独特的作用.查阅国内近10年来的相关文献,在前人研究的基础上对鸡骨草、薏苡、茉莉花、土人参、铁皮石斛、益母草和山豆根等药材在少数民族地区流域的分布现状、化学成分、提取方法及药理作用研究进行汇总、分析和综述.上述几种特色民族药具有总黄酮、生物碱、皂苷、多糖、挥发油等多种活性物质,通常有乙醇回流加热、索氏提取法、超声波等提取方法,可用于抗肿瘤、调节免疫、抑菌、抗氧化等治疗.作为广泛生长于右江流域的特色民族药,还有其他方面的作用等待去发现、研究、发展,很多化学成分、药理机制和临床应用还需要深入综合研究与开发以便更好的发现并发展其药用价值.
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列当属药用植物化学成分、生物活性及临床应用研究进展
列当属为列当科中大的属,其中多种植物作为药用,具有补肾、强身之功效.该属植物次生代谢产物丰富,含有苯乙醇苷、木脂素、萜类等成分,其主要活性物质为苯乙醇苷类.苯乙醇苷类成分在列当属中广泛存在,是一类以苯乙醇基与葡萄糖苷化后形成的含有酯键及氧苷键的天然水溶性糖苷.目前从列当属中分离得到的苯乙醇苷类化合物为24个,多具有以下特征,与苷元直接相连的中心糖为葡萄糖的单糖苷,中心葡萄糖的3位多与鼠李糖相连的二糖苷;第2个葡萄糖或木糖与中心葡萄糖的6位相连的三糖苷,在中心葡萄糖的4或6位还常连有咖啡酰基、阿魏酰基或香豆酰基等官能团.基于以上结构特点,苯乙醇苷类化合物具有广泛而显著的药理活性.现代药理研究也表明,列当属植物具有良好的抗氧化、抗菌、增强免疫及雄性激素样等作用,在临床上广泛用于肾虚、小儿腹泻、肠炎、痢疾等病症的治疗.该文综述了国内外有关列当属药用植物化学成分、生物活性以及临床应用的研究进展,为列当属药用植物的深度开发提供参考.
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轴手性在药物研究与开发中的重要性
在早期的药物研发过程中,由于当时条件和认识的局限,人们常将对应异构体当成单一光学纯化合物处理.随着手性拆分技术的发展以及人们对于手性药物认识的提高,手性对于药物的药理活性、毒性、代谢性质的影响逐渐被重视,一些与手性相关的不良反应事件发生,如欧洲“反应停”事件,使药物研发人员对药物中的手性因素更加关注.轴手性是手性的一种特殊形式,是由于空间位阻或电子效应导致共价键不能自由旋转而产生.轴手性对于化合物的药理活性、代谢性质也有广泛的影响,但由于分子中不具手性中心,而容易被忽视.药物研发是一个漫长而昂贵的过程,因此在早期阶段就应该给予轴手性足够的重视,大的降低药物后期研发和临床试验的风险.对于具手性中心的手性药物,FDA已于1992年出台相关文件指导其研究开发,但是对于轴手性药物的研发却没有明确规定.本文从轴手性化合物的产生、构型判断、轴手性-活性关系以及轴手性药物发展趋势4个方面对轴手性化合物的研究进展进行综述和探讨,阐述轴手性在药物研发过程中的重要性,为轴手性药物的研究和开发提供参考.
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中医药对大肠癌信号通路的调控作用
大肠癌是一种复杂的疾病,其发生发展涉及多个信号通路的异常.中医药在大肠癌的治疗中发挥了积极的作用,可以通过调控多个信号通路,影响大肠细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞衰老、细胞自噬、化疗耐药、上皮-间质转化、细胞侵袭和转移、血管生成等生物过程,从而发挥治疗的作用.研究显示,藤龙补中汤可以调控p16/p21-Rb信号通路,阻滞大肠癌细胞周期,促大肠癌细胞衰老.斑蝥素、白花蛇舌草、藤龙补中汤等中药可以调控大肠癌细胞凋亡通路,激发大肠癌细胞凋亡.黄芩素、和厚朴酚、左金丸等中药可以调控大肠癌核转录因子(NF)-κB通路,抑制大肠癌细胞增殖、促大肠癌细胞凋亡,增强化疗药的敏感性.澳洲茄胺、苦参碱、透脓散等中药可以调控大肠癌磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路,抑制大肠癌细胞增殖、促大肠癌细胞凋亡.Diterpenoid C,蟾毒灵,凌草乙素等可以调控大肠癌有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路,抑制大肠癌细胞增殖、促大肠癌细胞凋亡或自噬.姜黄素、半枝莲、健脾复方等可以调控大肠癌分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)通路,抑制大肠癌细胞增殖或转移.去甲斑蝥素、乌索酸、海带多糖等可以调控大肠癌表皮生长因子受体(EGFR)通路,抑制大肠癌细胞增殖,阻滞细胞周期或激发细胞凋亡.氧化苦参碱、健脾解毒方、片仔癀等可以调控转化生长因子(TGF)-β/Smad通路,抑制大肠癌上皮-间质转化和转移.白花蛇舌草、半枝莲、肠复康等可以调控Hedgehog通路,抑制大肠癌血管生成.
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基于UPLC测定桂枝茯苓胶囊中8种活性成分的溶出度
目的:建立桂枝茯苓胶囊溶出度的测定方法,为该制剂的质量评价提供参考.方法:采用UPLC,没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、肉桂酸、桂皮醛的流动相为0.02%三氟乙酸水溶液-乙腈梯度洗脱,检测波长分别为230 nm(没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、丹皮酚)和275 nm(肉桂酸、桂皮醛).苦杏仁苷的流动相为水-甲醇(80∶20),检测波长218nm.结果:确定溶出介质为0.1 mol·L-1盐酸,转速50 r·min-1,采用转篮法测定溶出度.没食子酸、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷、丹皮酚、肉桂酸、桂皮醛、苦杏仁苷的线性范围分别为0.097 6~24.389 9,0.097 1 ~24.275 4,0.052 6 ~5.262,0.053 ~5.295 6,0.108 3 ~27.062 9,0.050 1 ~5.005,0.052 4 ~5.236 4,0.096 6~24.139 5 mg·L-1,平均加样回收率分别为102.3%,97.3%,99.3%,97.9%,97.8%,95.8%,97.0%,100.4%.样品溶出度均一性良好,45 min内各成分溶出度均能达到80%以上.结论:该方法操作简便、结果准确、重复性较好,可用于桂枝茯苓胶囊溶出度的测定,为中药复方制剂的质量标准评价提供了参考.
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鲜干品组方六神曲发酵前后指标成分的LC-MS测定及指纹图谱分析
目的:建立六神曲的指纹图谱质控方法,比较鲜干品各组样品发酵前后槲皮苷、槲皮素、木犀草素等成分的变化状况.方法:经拆方研究,按前期优选的工艺制备六神曲基本组及鲜干品各组,分别为基本组、鲜品煎汁组、干品1/3量煎汁组及干品全量煎汁组,并于发酵前后取样检测.采用LC-MS检测,Ulitimate XB-C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相甲醇-0.2%甲酸水溶液梯度洗脱,检测波长254 nm,电喷雾离子源(ESI),正离子模式检测.结果:确定鲜干品组方六神曲指纹图谱共有峰15个,其中10,13,15号峰分别为槲皮苷、木犀草素、槲皮素.基本组仅含木犀草素,发酵前后质量分数分别为18.5,21.3 μg·g-1,明显低于其他3组.在发酵前,鲜品煎汁组样品的3种成分含量均显著高于其他3组,与发酵前相比,发酵后木犀草素、槲皮素质量分数分别增长54.84%,4.53%;槲皮苷质量分数降低了0.76%.干品全量煎汁组发酵后3种成分含量较发酵前显著增加,其中槲皮苷、木犀草素、槲皮素质量分数分别增加了59.9%,161.7%,75.5%.结论:该质控检测方法精密、准确、重复性好,适用于六神曲的量化质量评价.发酵法可促进六神曲部分药效成分的溶出度增加及其生物转化反应的发生,初步揭示了六神曲发酵前后药效物质变化状况及鲜品入药优于干品的药效物质基础.
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酒制对女贞子饮片主要化学成分含量的影响
目的:分析酒制对女贞子饮片中主要化学成分含量的影响,为完善女贞子及酒女贞子饮片的质量标准提供实验依据.方法:采用HPLC,流动相乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长224 nm,柱温35℃,对女贞子及酒女贞子饮片中主要化学成分进行定量分析.结果:与相同企业或同一企业同一批次女贞子饮片比较,酒女贞子饮片中特女贞苷和橄榄苦苷的含量均明显降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量有不同程度的升高;其中红景天苷、酪醇及羟基酪醇的质量分数分别升高了200%,5%,40%以上.结论:酒制后女贞子饮片化学成分含量的变化主要是由于特女贞苷在高温及水蒸气的作用下会水解生成红景天苷,红景天苷进一步水解生成酪醇;橄榄苦苷在高温下不稳定,同样发生水解,生成羟基酪醇;从而导致特女贞苷和橄榄苦苷的含量显著降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量增高.
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21种辛味中药挥发油透皮促渗效果的药性规律分析
目的:为初步探讨辛味中药挥发油透皮促渗的药性规律,选择21种有作为透皮吸收促进剂应用报道的常用辛味中药挥发油为研究对象,在同一研究平台上完成制备、理化性质考察和透皮促渗效果评价.方法:采用水蒸气蒸馏法制备19种中药挥发油,松节油和薄荷油为直接购置,测定其挥发性;采用GC-MS分析了挥发油的组成成分;利用改良的Franz扩散池法考察21种中药挥发油对模型药物布洛芬体外经皮透过性的影响;利用独立样本T检验和多重对应分析挥发性以及来源中药药性(四气、五味、归经)与透皮促渗效果的关系.结果:未发现挥发油的挥发性与透皮促渗效果之间存在相关性;四气中温、热两气对辛味中药挥发油透皮促渗效果的影响具有显著性差异,辛热中药挥发油的透皮促渗效果显著优于辛温中药挥发油(P<0.05);具有辛苦味、归脾经的中药挥发油可能具有较强的透皮促渗效果.结论:辛味中药挥发油透皮促渗效果与来源中药的药性特征之间存在关联性,并以四气的影响大.
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头花蓼不同极性部位抑菌作用的谱效学分析
目的:建立头花蓼醇提浸膏中7个有效部位的指纹图谱,阐明不同部位所有色谱峰代表的化学成分及其对抑菌效果的贡献值,揭示头花蓼抑菌的药效物质基础.方法:采用UPLC-TOF-MS建立头花蓼醇提浸膏中不同极性部位的指纹图谱,并对各色谱峰进行化学成分分析,通过96孔板法测得不同极性部位对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的低抑菌浓度(MIC),利用偏小二乘回归法(PLSR)建立不同极性部位指纹图谱与抑菌作用的谱效关系.结果:头花蓼不同极性部位对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌抑菌效果成正相关的色谱峰分别为9个和13个,其主要抑菌成分为1~5和15,19号峰所代表的化合物.结论:头花蓼对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的主要抑菌活性部位为4个强极性部位(A,B,C,D),其主要抑菌成分为6-没食子酸酰葡萄糖,3,6-二没食子酸酰葡萄糖,1,3,6-三没食子酸酰葡萄糖和davidiin,为深入研究头花蓼的抑菌机制奠定了基础.
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巴西苏木素在大鼠体内的代谢产物与代谢途径分析
目的:通过研究巴西苏木素在大鼠体内的代谢产物,探析其代谢途径.方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对灌胃巴西苏木素(30 mg·kg-1)后大鼠的生物样品(粪便、尿液、血浆、胆汁)进行分析,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL min-1,电喷雾离子源,负离子模式,信息依赖性采集模式进行检测,离子喷雾电压-4.5 kV,离子源温度500℃,碰撞电压100 eV,碰撞能量-35 eV,锥孔气流50 L·h-1,m/z100 ~1 100,使用PeakView 1.2软件进行数据处理,提取给药样品的总离子流图谱与空白生物样品对比,通过保留时间、精确相对分子质量及二级质谱的比较与分析,筛选并鉴定其可能的代谢产物.结果:共检测出23个代谢产物,这23个代谢产物是巴西苏木素在大鼠体内甲基化、脱氧、缩氢、羧酸化、水合作用、硫酸化、葡糖糖醛酸化后产生的,其中以硫酸化、葡糖糖醛酸化为主.结论:本实验首次对巴西苏木素在大鼠体内的代谢情况进行研究,能够为该药物的药效学和药理学研究提供一定的物质基础.
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基于大鼠脑缺血再灌注损伤模型建立辛芍组方中灯盏乙素和芍药苷的PK-PD结合模型
目的:建立辛芍组方中灯盏乙素和芍药苷的药代动力学-药效动力学(PK-PD)结合模型,为该组方的作用机制分析提供参考.方法:采用液质联用法测定大鼠脑缺血再灌注损伤模型给药后的不同时间点所得血浆样本中灯盏乙素和芍药苷的血药浓度,获得药时曲线;采用试剂盒测定不同时间点所得血浆样本中的2种药效指标超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的浓度,获得时效曲线.采用WinNonlin 6.4软件中的房室模型法对2种代表成分的药代动力学参数进行拟合,获得PK参数.在此基础之上,固定相关的药代动力学参数,对时效关系进行拟合,得PD参数;根据PD参数,建立辛芍组方中灯盏乙素和芍药苷的PK-PD结合模型.结果:当分别以SOD,LDH为药效指标时,得灯盏乙素的PK-PD模型分别为E=21.08 +5.49Ce/(Ce+7 368.24),E=211.98-89.13Ce/(Ce+2 013.2),芍药苷的PK-PD模型分别为E=20.02+1.58Ce/(Ce+0.02),E =216.83-37.31Ce/(Ce+0.04),式中E为效应值,Ce为药物在效应室中的质量浓度.结论:SOD和LDH的浓度与灯盏乙素、芍药苷的质量浓度存在一定的相关性.辛芍组方及其主要活性成分灯盏乙素和芍药苷可通过提高SOD浓度和降低LDH浓度来发挥抗氧化作用,进而达到保护脑缺血再灌注损伤的目的.
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含当归中成药的DNA提取及其分子鉴定
目的:优化含当归中成药的DNA提取方法,并利用叶绿体trnL-F基因及当归特异分子标记对当归中成药进行鉴定.方法:采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,十二烷基磺酸钠(SDS)法,磁珠法以及改良CTAB法对10种含有当归成分的中成药进行DNA提取,利用微量紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳检测所得总DNA的完整性、纯度和浓度.对10份当归中成药的trnL-F序列进行扩增、测序,对序列进行比对分析并构建系统发育树.利用当归特异鉴别分子标记对10种当归中成药中的当归成分进行分子鉴别.结果:利用改良CTAB法获得了纯度较高,质量较好的DNA.10种中成药中当归的trnL-F序列与正品当归序列相似度为99.88%~100%,系统发育树显示10份中成药中的当归与正品当归聚为一类.利用当归特异性鉴别分子标记进行验证,10种中成药DNA样品均能得到明亮的扩增条带.结论:改良CTAB法可以有效提取当归中成药中的基因组DNA.利用trnL-F序列和当归特异性鉴别分子标记,成功对10份市售当归中成药进行了分子鉴别,为当归类中成药的分子鉴定奠定了基础.
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华细辛苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与生物信息学分析
目的:克隆华细辛Asarum sieboldii苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因(AsPAL),并进行序列特征分析.方法:通过同源克隆的原理,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)相结合的方法,以华细辛叶片总RNA为模板,获得了该基因的cDNA全长,并通过DNAMAN软件和ExPASy在线分析等对其进行了生物信息学分析.结果:获得AsPAL全长cDNA,Genbank登录号为KY428932,序列分析表明,所克隆的cDNA含有1个2 157 bp的完整开放阅读框,编码718个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量为78 758 Da,理论等电点为6.24,没有跨膜区,含有PAL酶活性中心序列GTITASGDLVPLSYVAG,不含信号肽;氨基酸序列多重比较发现,AsPAL与土肉桂、葡萄、当归和杏的同源性达到80%以上.结论:获得了AsPAL cDNA全长序列,对其进行初步生物信息学分析,为进一步探究AsPAL的功能和华细辛甲基丁香酚生物合成的调控机制奠定了必要的基础.
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基于UHPLC-TOF-MS技术建立金线莲的指纹图谱及金线莲苷的含量测定方法
目的:建立野生、组织培养和种植等14批不同来源金线莲药材的超高效液相色谱-飞行时间质谱(UHPLC-TOF-MS)指纹图谱,建立金线莲苷的UHPLC-TOF-MS含量测定方法,为完善金线莲药材的质量标准提供实验依据.方法:依据高分辨质谱提供的精确相对分子质量鉴定化学成分,选择[M+ HCOO]-作为专属离子对金线莲苷进行含量测定.采用SPSS22.0软件对各批次药材中化学成分指纹图谱进行相似度考察和聚类分析,评价不同因素对金线莲药材质量的影响.结果:建立了金线莲药材UHPLC-TOF-MS指纹图谱并从中指认出36个化学成分,包括金线莲苷类5个、黄酮类18个、核苷类5个、有机酸类6个、长寿花糖苷C和天麻苷各1个.指纹图谱相似度考察、聚类分析及金线莲苷含量测定结果表明对药材中化学成分种类及含量产生显著影响的因素为产地和栽培时间.金线莲苷质量分数处于4.85% ~ 16.18%.结论:建立的金线莲化学成分指纹图谱及金线莲苷含量测定方法稳定可行,为金线莲药材的质量评价提供了切实可行的检测方法.
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痔血胶囊肝毒性药物因素分析
目的:通过均匀设计法安排大鼠长期毒性拆方实验,比较痔血胶囊5种拆方对大鼠肝毒性的影响,寻找引起痔血胶囊肝毒性的药物因素.方法:Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为正常组、痔血胶囊1~5号拆方组,灌胃给予相应的药物,连续给药30 d.末次给药后,取材测试大鼠血清的天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL),y-谷氨酰转移酶(GGT)等指标情况,并同时观察各组大鼠肝脏色泽、质地、肿块等形态情况,摘取肝脏和脑,计算肝脏绝对质量、脏器系数;取肝脏大叶同一部位肝组织,做苏木素-伊红(HE)染色后进行病理组织学检查.结果:与正常组比较,痔血胶囊各拆方组一般状况良好,血清生化学检测拆方5号组GGT显著升高(P<0.01),拆方3,4,5号组肝脏绝对质量、脏器系数明显升高(P<0.05,P<0.01),肝脏组织病理学主要表现为肝小叶周边带肝细胞小泡型脂肪变性;根据肝脏脂变评分回归分析,白鲜皮可能为痔血胶囊肝毒性的主要药物因素.结论:建立一种新的中药安全性评价模式,发现潜在毒性中药,为今后完善中药安全性基础数据提供支撑,同时指导临床安全用药及中药新药研发.
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同仁安神丸的安全性评价
目的:通过对同仁安神丸长期用药的安全性评价,明确其潜在的毒性作用及可逆性、毒性靶器官、无不良作用剂量及用药时间,为临床安全用药提供依据.方法:SD大鼠随机分为4组,正常组(每日灌胃给予饮用水)和同仁安神丸高、中、低剂量组(含生药6.4,3.2,1.6 g ·kg-1).每日灌胃1次,连续给药3个月.分别于给药1,3个月和停药2个月后解剖并分析血液生化、血液细胞、尿常规、脏器系数和组织形态学等指标.结果:给药1个月,除高剂量组体重降低、饲料消耗量减少外,血液细胞、生化、尿常规、脏器系数等指标及脏器组织病理学检查等均未见明显与毒性相关的变化.给药3个月,高剂量组雌性动物的天门冬氨酸氨基转换酶(AST),肌酸激酶(CK)较正常组显著增高;病理检查可见肝细胞、肾小管轻度变性和肾间质炎性浸润等病理变化,其他血液生化学指标及血液学、尿常规、脏器系数等指标均在该品系动物的正常值范围内,故不认为有毒性学意义.停药2个月后,高剂量组上述肝功能指标和肝、肾组织形态学基本恢复正常.结论:高剂量组大鼠长期给药时,可见轻度肝肾毒性损伤.给予同仁安神丸3个月的无明显不良作用剂量(NOAEL)为3.2 g·kg-1·d-1,相当于临床剂量的29倍.临床上服用该药时,应严格控制剂量,服药时间不宜过长.
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制药4.0背景下关于智慧文件管理系统的探讨
本文以药品生产企业为例,探讨智慧文件管理系统的定义、需求,再结合国内外制药行业药品生产质量管理规范(GMP)检查缺陷项目现状和数据完整性的要求,以数据的4W(who,when,where,what)属性为基础,探讨智慧化文件系统的构建思路,通过3个设计的运用举例来展现该系统具备搜索和逻辑运算功能的显著特点,并预见该系统的优点和实施难点.该系统将有利于制药4.0背景下的工厂实现高效、便捷地利用各类文件进行信息检索和逻辑运算,使得药品研发和注册工作更加科学、系统、有序,同时也利于国际标准化录入和建立绿色低碳、信息化、智能化、国际化的制药核心技术平台.
年 | 期数 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2017 | 01 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2015 | 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |