解脲支原体感染动物模型优化方案研究

目的：探索不同造模方法的优劣性，选择合适的解脲支原体感染动物模型方法。方法选择SPF级BALB／c雌性小鼠、Wistar大鼠，分别以小剂量UU3菌液多次感染、大剂量UU3菌液一次感染、苯甲酸雌二醇预处理为干预措施，建立解脲支原体感染动物模型，分别于首次接种后14 d、28 d、42 d、56 d取实验动物宫颈分泌物行解脲支原体培养，取生殖器做形态学分析。结果①BALB／c小鼠与Wistar大鼠相比，BALB／c小鼠总体一般情况较差，阴道分泌物增加，外阴溃烂明显，而Wistar大鼠外阴无明显变化。②大鼠各组阴道UU定植率比较，差异均具有统计学意义（P＜0．05）；小剂量雌激素组与小剂量非雌激素组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；大剂量雌激素组与大剂量非雌激素组比较，差异有统计学意义（ P＜0．05）；小剂量雌激素组与大剂量雌激素组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）；小剂量非雌激素组与大剂量非雌激素组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。小鼠各组结果同大鼠。③同样干预措施，在小剂量雌激素处理下，大、小鼠比较，差异有统计学意义（ P＜0．05）；在大剂量雌激素处理下，大、小鼠比较，差异有统计学意义（P＜0．05），说明同等处理措施下小鼠阴道UU定植率更高。④肉眼观：小剂量雌激素组个别大鼠生殖道组织有水肿，其余各组大鼠生殖道组织柔软，活动度好；空白组小鼠生殖道组织柔软，活动度好；小剂量雌激素组小鼠生殖道组织充血明显，输卵管积水，增粗，僵硬，弹性差；大剂量雌激素组小鼠以疏松水肿为主；小剂量非雌激素组和大剂量非雌激素组仅见阴道、宫颈轻度充血水肿。⑤镜下观：大鼠各干预组阴道组织无明显病理损伤，部分可见疏松组织水肿。小剂量雌激素组小鼠病理损伤严重；小剂量非雌激素小鼠组、大剂量雌激素小鼠组充血水肿程度较轻，腺体轻度扩张，炎性分泌物较多。结论 BALB／c小鼠与Wistar大鼠相比，外阴损伤明显；雌激素预处理能增加实验动物解脲支原体的定植率；小剂量多次感染比大剂量一次感染更能增加UU定值率；UU在BALB／c小鼠阴道UU定植率更高；BALB／c小鼠病理损伤严重，对动物实验研究价值更大。

低氧预处理降低大鼠癫痫易感性及其脑保护作用的机制初探

目的：初步探讨间断低氧预处理（ intermittent hypoxia preconditioning ， IHP ）对氯化锂－匹鲁卡品（lithium－pilocarpine，Li－pilo）致痫大鼠痫性发作的影响及其脑保护作用机制。方法96只清洁级SD大鼠，随机均分为对照组，癫痫组和4个间断低氧预处理＋癫痫组。癫痫组及4个间断低氧预处理＋癫痫组（分别在5 d IHP预处理后1，3，7，14日注射）大鼠通过腹腔注射氯化锂－匹鲁卡品建立癫痫模型。随后进行240 min的发作行为学，全身性发作潜伏期及百分比量化分析并通过水迷宫实验测试大鼠认知功能。接着利用TUNEL标记和免疫印迹方法进行大鼠海马神经元凋亡及相关蛋白（BCL－2，Bax和cleaved－caspase－3）的检测。结果氯化锂－匹鲁卡品注射后50～150 min之间，癫痫发作的改良Racine 评分达到峰值。间断低氧预处理后3日诱发癫痫组大鼠其平均改良Racine评分明显低于其余各组，该组全身性发作潜伏期及百分比与癫痫组相比差异亦有统计学意义（ P＜0．05）。相比癫痫组和其余3个间断低氧预处理＋癫痫组大鼠，间断低氧预处理后3日诱发癫痫组大鼠逃避潜伏期（ escape latency）较短，神经元凋亡计数较低，而目标象限停留时间百分比较高（ P＜0．05）。间断低氧预处理后3日诱发癫痫组的水迷宫以及凋亡检测参数与对照组相比较无明显差异（P＞0．05）。结论 IHP预处理通过抑制异常凋亡降低大鼠癫痫易感性，并具有脑保护作用。

利用 CRISPR／Cas9技术构建 miRNA－29 b1基因敲除小鼠

目的：应用CRISPR／Cas9技术构建miRNA－29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA－29b1基因设计一段sgRNA，sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL／6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型，同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA，通过real－time PCR分析miRNA－29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA－29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录，显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA－29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型，一种为10 bp的缺失突变；另一种为22 bp的缺失突变，同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比，基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA－29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR／Cas9技术成功构建miRNA－29b1基因敲除小鼠。

阿霉素诱发肾性水肿病症大鼠模型的建立

目的：考察复制大鼠的肾性水肿（肾阴虚、肾阳虚水肿）病症结合模型的可行性。方法采用灌胃甲状腺素片及尾静脉注射阿霉素的方法制造大鼠肾阴虚水肿模型，肌注氢化可的松和尾静脉注射阿霉素方法制造大鼠肾阳虚水肿模型。通过观察模型大鼠体征变化、24 h尿蛋白含量、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺（T4）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、雌二醇（E2）及睾酮（T）等指标含量，判断模型是否成功。结果阴虚水肿组动物出现多动、脱毛、大便干结、体重降低和体温升高等临床表现，与空白组比较T3、T4、cAMP、E2、24h尿蛋白含量明显升高，cGMP、T含量降低，cAMP ／cGMP比值显著升高，且各项指标均差异具有显著性（P＜0．05）。阳虚水肿组动物则出现活动减少、大便溏泻、体重和体温下降等体征变化，与空白组相比， T3、T4、cAMP、E2含量显著降低， cGMP、T、24h尿蛋白含量明显升高，cAMP ／cGMP比值降低，且各项指标均差异具有显著性（ P＜0．05）。结论分别由甲状腺素片联合阿霉素、氢化可的松注射液联合阿霉素诱导的动物病症结合模型，符合中医证型诊断下肾阴虚、阳虚水肿病症，造模方法可行。

不同急性应激反应大鼠模型的比较

目的：比较三种急性应激反应动物模型应激相关指标的变化，探讨建立相对适宜的急性应激反应模型。方法健康成年雄性SD大鼠40只，随机数字表法分为正常组（Ⅰ）、断尾组（Ⅱ）、烧伤组（Ⅲ）和截肢组（Ⅳ），每组10只。正常组不做处理，断尾组在靠近尾端的尾干处（即S3和S4脊髓神经之间）横切，烧伤组制成30％体表面积III度烫伤模型，截肢组以左下肢截肢作为严重创伤应激。应用酶联免疫法检测各组大鼠血清促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）和皮质醇（corticosterone，CORT）的含量，免疫组织化学方法检测下丘脑c－fos蛋白的表达水平。结果与I组相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ACTH、CORT水平均升高（P ＜0．05），c－fos蛋白表达明显增加（P＜0．05）。与Ⅲ组相比，Ⅱ、Ⅳ组ACTH、CORT水平、c－fos蛋白表达较高（P＜0．05）；但II组与IV组各项指标相比差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论通过低位尾干切断制作急性应激反应模型，具有操作步骤简单、致伤程度较一致、应激效果明显等特点，能够较客观地反映人类遭遇突发事故时的应激反应，是较为理想的急性应激反应的建模方式。

正常日本大耳白兔同步12导联心电图分析

目的：揭示正常日本大耳白兔同步12导联心电图特征，为心血管疾病的实验研究提供心电图基本数据。方法雄性日本大耳白兔55只，20％乌拉坦腹腔麻醉，描记兔同步12导联心电图，并拍胸部X线正位片。结果心电图：①日本大耳白兔心电图波形与人类相似，均为窦性心律。心率较快，265．5±36．8次／min，未见心律失常发生；②仰卧位平均心电轴：19°～250°，波动范围较大；③P波：形态钝圆或略尖，均符合窦性P波规律，在肢体Ⅱ、aVF导联及胸导联较为明显；④P－R间期：（0．063±0．007）s；⑤QRS波：QRS波时间为（0．040±0．005）s，主波在Ⅱ、Ⅲ、aVF导联多数向上，胸导联与人类相似，R／S比值逐渐递增；⑥ ST段：较短，均位于等电位线；⑦ T波：T波形态多圆顿，部分双峰，多数导联T波直立，部分倒置，平坦或双向。 T波在肢体II、III、aVR、aVF及胸导联较为明显；⑧QT间期：QT间期（0．142±0．015）s，QTc（0．306±0．034）s。胸部X线正位片：心影大多位于胸腔正中及右侧。结论获得了兔标准12导联心电图波形及其各波段的正常值范围，在心血管疾病的实验研究中具有一定的应用价值。

长期食用何首乌对小鼠造血系统的影响

目的：探讨长期食用何首乌后，小鼠造血系统的变化。方法小鼠随机分为2组，对照组，喂饲正常饲料；何首乌饲料组，喂饲添加何首乌的饲料，10个月后，处死小鼠，应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种细胞。结果何首乌饲料组小鼠，脾脏B细胞增多，胸腺CD4＋细胞增多，CD8＋细胞减少；骨髓造血干细胞显著减少，其中静止期细胞增多，增殖分裂期细胞减少。结论长期适量食用何首乌有助于减缓小鼠造血系统的衰老，维持造血系统稳定。

补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢形态及性激素的影响

目的：通过观察补肾促排卵汤对多囊卵巢综合征模型大鼠的性激素、抗苗勒氏管激素（ anti－Müllerian hormone ， AMH）、卵巢形态的影响，探讨补肾促排卵汤治疗多囊卵巢综合征（ polycystic ovary syndrome ， PCOS）的作用机制。方法应用补肾促排卵汤作用于以脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型，对卵巢进行形态学分析并检测血清性激素、AMH。结果与正常组相比，模型组大鼠卵巢弥漫性囊性重度扩张，可见大小不等的囊腔，粒层细胞被挤压呈扁平或立方形，黄体及各种发育阶段卵泡稀少。补肾促排卵汤能明显改善PCOS模型大鼠成熟卵泡个数、黄体个数、性激素及AMH水平，与模型组比较差异均有统计学意义（ P＜0．05）。结论补肾促排卵汤能改善PCOS模型大鼠血清性激素水平、降低血清AMH及恢复卵巢排卵功能，从而达到治疗多囊卵巢综合征的作用。

自发性肝硬化比格犬肝脏病理形态学研究

目的：研究自发性肝硬化比格犬肝脏的病理形态学改变和血清生化改变，以建立适用于GLP的实验动物背景资料。方法下肢静脉采血制备血清，全自动生化分析仪测ALT、AST、TP、ALB、ALP、TBIL、TC、TG、GGT等肝功能指标，比较患病动物与同期空白对照组动物上述指标的差异；对比格犬肝脏进行组织病理学检查，光学显微镜下描述其病理形态学特点。结果与同期空白对照组动物相比，患病动物ALT、AST、ALP、TBIL、GGT显著升高，ALB显著降低；与正常组织相比，肝硬化的肝细胞呈结节状再生、排列紊乱，形成数量不等的假小叶，假小叶周围被增生的胶原纤维所包裹。结论需加强比格犬自发病变的病理监测，为药物安全性评价提供实验动物的背景资料。

实验性干眼大鼠的角结膜上皮组织学改变

目的：建立大鼠干眼模型并进行评价，比较正常大鼠和干眼大鼠角结膜上皮组织形态学特点。方法采用苯扎氯铵滴眼诱导大鼠出现干眼，麻醉后处死动物，取正常大鼠和干眼大鼠角结膜组织行HE染色，及电镜下观察大鼠角结膜超微结构。结果干眼大鼠角膜上皮和结膜上皮出现上皮细胞缺失，结膜上皮杯状细胞减少，电镜下观察干眼大鼠角膜结膜上皮细胞微绒毛缺失，断裂，出现基底膜溶解，细胞内线粒体溶解。结论苯扎氯铵诱导的大鼠干眼模型与人干眼发生后角膜结膜发生的改变相似，此干眼模型在动物实验研究中具有重要的参考价值。

兔肝动脉插管两种穿刺途径的对照研究

目的：探讨实验兔肝动脉插管的路径和方法。方法将新西兰白兔30只随机等分为外周静脉注射、肝动脉灌注、肝动脉碘化油栓塞、肝动脉明胶海绵颗粒栓塞及肝脏直接穿刺注射5组，每只兔均给予临床等效剂量的榄香烯注射液。肝动脉插管均采用Seldinger 操作技术，按照实验兔编号的奇偶数分别穿刺耳动脉或股动脉，一种途径失败可转换另一种穿刺途径。记录穿刺置管及肝动脉插管的操作时间、成功率及并发症信息。抽取所有实验兔给药后多时段的静脉血用于药代动力学分析。结果穿刺兔耳动脉和股动脉的成功率分别为55．6％（5／9，单侧2只，两侧3只）和88．9％（16／18，单侧12只，两侧4只），经兔耳动脉和股动脉行肝动脉插管的成功率分别为0％（0／5）和100％（16／16），操作时间分别为28．4±13．6和33．9±19．6 min。除肝脏直接穿刺组及股动脉穿刺组各因麻醉意外死亡1只及动脉穿刺失败后予安乐死1只外，无其他死亡实验兔。全麻后的实验兔外周血管明显收缩，经兔耳静脉短期内多次采血困难，实验中改良为经颈静脉取血23只（23／27）。结论经兔耳动脉行肝动脉插管的可行性低，经股动脉插管为介入医师的首选途径；兔颈静脉取血具有先天的解剖优势及更高的实验价值。

预防实验家兔肉膜和深筋膜植入扩张器移位方法的改进

目的：探讨预防兔肉膜和深筋膜植入扩张器移位的方法。方法普通级实验家兔40只，随机分为两组，即实验组20只和对照组20只。在其一侧背部皮肤肉膜深面自切口潜行分离形成植入腔穴，在腔穴周边，用3－0丝线间断缝合肉膜、深筋膜，植入50 mL肾形硅橡胶软组织扩张器。术后1周，用文刺机在扩张器周围四点做黑色文刺，用来标记扩张器位置。实验组术后2个月开始注水直至达到总量140 mL；对照组术后1周开始注水直至达到总量140 mL。分别观察和记录实验组和对照组扩张器在注水期间是否移位、切口是否裂开、注射壶是否翻转等并发症，以及动物的死亡率。结果实验组中没有兔子发生扩张器移位，对照组存活动物中有4只兔子发生扩张器移位，两组扩张器移位相比较，差异具有统计学意义﹙P＜0．05﹚；实验组兔子扩张期切口裂开发生率虽然低于对照组，但两组比较没有统计学意义﹙P＞0．05﹚；同时两组扩张器在注水壶翻转率、感染率及动物死亡率方面相比较都无统计学意义﹙P＞0．05﹚。结论分离腔隙内固定加上延迟扩张的手术方法可有效预防兔肉膜与深筋膜之间的扩张器移位，实现有效扩张。

提高犬交感神经相关房颤模型建模成功率的新方法

目的：对传统实验过程中犬的星状神经节暴露的方法进行改良，建立一种新的暴露犬星状神经节方法，提高交感神经相关房颤模型建模的成功率。方法成年犬28只，随机分为传统组和改良组，每组14只，分别使用传统和改良后的方法分离暴露星状神经节。28只犬均建立交感神经相关房颤模型。术中记录犬生命体征变化和术中生存率，记录刺激星状神经节所需电压，记录刺激前、后心脏电生理的变化。免疫组化检测神经递质释放情况。结果改良组术中存活率较传统组术中存活率显著升高， P＜0．05。改良组手术时间较传统组明显缩短，P＜0．05。刺激改良组神经达到阈值所需电压较传统组更小，P＜0．05。结论改良后的手术方法能够有效的降低犬在手术过程中的死亡率，明显缩短手术时间，减少术中出血量，星状神经节结构更完整，持续刺激过程中所需电压更稳定，更适合用于建立交感神经相关房颤模型。

小鼠诺如病毒荧光定量 PCR 检测方法的建立及初步应用

目的：建立小鼠诺如病毒（ murine norovirus ，MNV）实时荧光定量PCR 检测方法，为建立MNV规范化检测方法提供依据。方法根据NCBI公布的60个MNV病毒株核酸序列设计特异性引物，构建标准阳性质控品，建立MNV实时荧光定量PCR方法，并进行特异性、灵敏度、重复性及稳定性评价。用该方法对766只送检小鼠的盲肠内容物样品进行检测，初步了解北京地区实验小鼠MNV感染状况。结果成功建立MNV实时荧光定量PCR检测方法，该方法特异性好，与同种属人类诺如病毒（HuNoVs）、猫杯状病毒（FCV）均无交叉反应，检测灵敏度可达101 copies／μL。批内及批间CT值变异系数均小于2％。应用该方法在766份小鼠盲肠内容物样品中检出301份MNV核酸阳性样品，阳性率39．3％。结论建立的MNV实时荧光定量PCR检测方法特异性好，灵敏度高，重复性好，可以用于MNV的快速定量检测。

医药院校实验教学中存在的动物福利问题及对策

实验动物福利是动物实验结果准确性和可靠性的重要保证。科学研究中的动物福利正逐渐受到研究人员的重视，但在动物实验的教学中，情况还不容乐观。本文重点分析了医药院校实验教学中的动物福利伦理问题，并从动物福利的制度保障、动物福利思想的普及、贯彻“3R”原则等方面，阐述了在教学中保障动物福利的具体措施和建议。

皮肤致敏试验替代方法的研究进展

皮肤致敏（过敏性接触性皮炎）是皮肤接触某些小分子化合物而引起的迟发性超敏反应。经典的检测化学物接触致敏性的方法是通过动物试验来检测，鉴于欧盟于2013年颁布全面禁止化妆品动物试验的规定，替代试验将来是化学品／化妆品致敏研究的主要趋势，本文综合近年的国内外文献，对现行的通过OECD认证的和正在开展研究的皮肤致敏替代试验，如LLNA、DPRA、KeratinoSens TM、h－CLAT试验等进行综合论述和评估，为未来体外替代试验能够客观、公正的对致敏结果评估提供参考。

基于移动互联网的实验动物商城平台的探讨

通过分析实验动物行业特点、行业供需现状以及移动互联网应用前景，以“移动互联网＋实验动物”相结合，研究实验动物商城平台的功能和作用及其运营模式。平台将以开放性为实验动物行业提供电商服务，形成“资源共享、互利共赢”的创新型格局，促进实验动物产业链资源的均衡配置，营造效能、效率、效果良好的运行管理环境。

大鼠清醒状态下尾静脉注射的快速操作技巧与体会

目的：介绍大鼠清醒状态下尾静脉注射的快速操作技巧与体会，提高操作成功率。方法采用自制大鼠束缚衣结合操作者轻按的方法固定大鼠，一人辅助固定，一人穿刺，一人注药，在注射过程中尽量减少对鼠尾的损伤和对大鼠产生的应激，严格规定进针点和穿刺次数，限制一次性大给药剂量和注射速度，并采取将进针与注射药液的部位分开等方法避免药物污的染和浪费。结果本法操作快速、可靠、稳定、重复性好、动物配合度高。结论本法避免了药物的浪费和污染，对于药物昂贵的尾静脉注射实验此做法尤为推荐。

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