黑龙江省实验大鼠遗传学概貌分析

目的 对送检的黑龙江省生产的实验大鼠遗传概貌进行分析.方法 参照国家标准<实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法>GB/T 14927.1-2001,应用乙酸纤维素板,利用Akp1、Es1、Es3、Es4、Es6、Es8、Es9和Es10等8种同工酶位点,对来自编号分别为2011、2014、3026、8028和8029的5个单位的SD、Wistar、DA、PVG等4个品系的25只实验大鼠,进行生化标记位点的检测.结果 除单位2014的SD大鼠在Es3存在a和b两种带型,8028和8029未检测Es10、2014和3026未检测Es6,8,9,其余各单位的大鼠在8个位点都表现出相同的带型.结论 送检的黑龙江省生产的SD和Wistar大鼠符合封闭群遗传学概貌;DA和PVG大鼠样品间带型一致.

噬菌蛭弧菌代谢产物活性成分对小鼠免疫功能的影响

目的 研究噬菌蛭弧菌代谢产物活性成分对小鼠免疫功能的影响.方法 将噬菌蛭弧菌代谢产物的3种有机溶剂(石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯)提取物和提取后的剩余液体分别腹腔注射实验小鼠,分两次注射,共注射0.5 mL,注射后连续饲养28 d,每隔7 d小鼠采血检测离体白细胞吞噬活性(phagocytic activity)、吞噬细胞杀菌活性(bactericidal activity)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、血清凝集抗体效价、血红蛋白值和红细胞数的变化,以研究不同提取物对小鼠免疫功能的影响.结果 石油醚提取物组和三氯甲烷提取物组小鼠血清SOD活性、血清凝集抗体效价、离体白细胞吞噬活性和吞噬细胞杀菌活性增强与对照组相比差异极显著(P<0.01);乙酸乙酯提取物组SOD活性和血清凝集抗体效价增强与对照组相比差异极显著(P<0.01),离体白细胞吞噬活性和吞噬细胞杀菌活性增强与对照组相比差异显著(P<0.05);石油醚提取物组的血红蛋白值(12.64g/100mL)和红细胞数(11.32×106/mL)高.各项指标的峰值均出现在第7天～第21天.结论 噬菌蛭弧菌代谢产物3种有机溶剂提取的活性物质具有增强小鼠免疫功能的作用.

G蛋白偶联受体激酶5在稳定表达α-Synuclein的SHSY5Y细胞中的基因表达调控功能

目的 观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase, GRK5)在稳定表达hα-synuclein(人突触核蛋白)的SHSY5Y细胞的胞核、胞浆中的表达情况并对其在帕金森病中的可能作用进行研究.方法应用Western blotting、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)活性检测技术以及shRNA干扰技术等对稳定表达hα-synuclein的SHSY5Y细胞中GRK5的表达及其亚细胞分布、胞核内GRK5蛋白的功能进行研究.结果 发现GRK5蛋白在过表达hα-synuclein的细胞核以及细胞浆内均表达增加,胞核中的GRK5蛋白通过影响组蛋白去乙酰化酶的活性对bcl-2基因的转录和表达进行调控.结论 帕金森模型中GRK5通过对bcl-2基因的表达进行调控发挥作用.

四种麻醉药物对食蟹猴麻醉效果分析和选择应用

目的 分析比对速眠新、氯胺酮、异氟烷和利多卡因4种不同麻醉药对食蟹猴的麻醉效果.方法 总结实际工作中分别使用四种不同麻醉药物对食蟹猴作用的麻醉特点.结果 速眠新、氯胺酮、异氟烷均能获得较好的麻醉效果,能满足不同手术、采样需要;局麻药利多卡因对食蟹猴麻醉的实际应用不理想.结论 食蟹猴的手术及其他侵犯性操作等都应该考虑生物安全和动物福利要求,实行麻醉,但应根据食蟹猴实验内容要求和不同麻醉药特点选择合适的麻醉方法,确保人员和动物安全,实验结果不受影响.

应用RAPD标记技术对树鼩遗传多样性的分析

目的 建立树鼩RAPD(random amplified polymorphic DNA)遗传标记分析方法,了解中缅树鼩种群的遗传多样性.方法 采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树鼩群体遗传分析的RAPD位点,对48只树鼩个体的基因组DNA进行PCR扩增,并应用Popgene 1.32与RAPDistance Package Version 1.04等软件进行数据处理,分析树鼩的群体遗传特性.结果 20个RAPD引物共检测到113个位点,平均每个引物可扩增出5.65个位点,其中多态位点数为69个(占61.1%).个体间的遗传相似系数平均为0.8307,个体间遗传距离在0.09～0.27之间,平均遗传距离为0.1693.雄性群体的遗传多态度(H0)(0.1864)略高于雌性群体(0.1470),平均遗传多态度(Hpop)为0.1667;树鼩遗传多态度所占的比例在群体内为48.29%,而雌、雄群体间为51.71%.NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树鼩个体聚类成一大类,其余45只树鼩个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象.结论 实验所筛选的随机引物可有效用于中缅树鼩种群的遗传结构分析.本树鼩群体具有较好的遗传多样性.

慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠

目的 利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台.方法 将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠.结果 移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只 (R3和 R4) 鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只(R1、R2、R3、R4和 R5)基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果.此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达.结论 建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉 (RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础.

苯并[a]芘对小鼠肝脏和肾脏中丙二醛和过氧化氢酶的影响

目的 探讨苯并[a]芘(B(a)P)对小鼠肝脏和肾脏脂质过氧化及抗氧化能力的影响.方法 采用B(a)P口腔灌胃连续染毒3 d后,取肝、肾组织作匀浆,采用TBA比色法测定鼠肝脏和肾脏内的丙二醛(MDA)的含量,钼酸铵比色法测定鼠肝脏和肾脏内的过氧化氢酶(CAT)的含量.结果 肝中各剂量染毒组的MDA含量增加,其中5 mg/kg、10 mg/kg剂量组与油剂对照组比较差异有显著性(P＜0.05).肾脏中各剂量染毒组的MDA含量均有所增加,其中10 mg/kg剂量组与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).肝脏中各剂量染毒组的CAT的含量低剂量增加高剂量减少,肾脏中各剂量染毒组的CAT的含量增加.结论 B(a)P可引起MDA含量增加诱导小鼠肝肾的脂质过氧化损伤.

清醒状态下电刺激大鼠上矢状窦模型后脑内Fos阳性神经元的分布

目的 清醒状态下电刺激大鼠上矢状窦后免疫组织化学染色观察Fos阳性神经元在脑内的分布情况.方法 雄性SD大鼠,手术暴露上矢状窦后电刺激硬脑膜,应用免疫组织化学染色技术观察Fos阳性神经元在脑内的分布并绘图.结果 电刺激后Fos阳性神经元在脑内分布广泛,主要集中在高颈段脊髓后角,三叉脊束核尾侧亚核,中缝核簇,中脑导水管周围灰质,脚间核及下丘脑等区域.结论 脑内的多个区域参与了偏头痛的发生和发展过程,除与疼痛的信息传递和调控有关外,与情感、植物神经等调控有关的核团也参与其中.

STK15的表达对NIH3T3细胞的影响

目的 构建pcDNA3.1-STK15表达质粒,探讨STK15基因对小鼠成纤维细胞(NIH3T3)的影响.方法 构建pcDNA3.1-STK15质粒,将其转染NIH3T3,应用RT- PCR、免疫细胞化学和Western印迹方法检测STK15的表达; MTT法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力.结果 转染pcDNA3.1-STK15质粒的NIH3T3细胞在48 h有STK15的表达,而且该细胞的增殖速度和穿透Matrigel胶的细胞数均明显高于对照组(P<0.05) .结论 STK15基因具有增加细胞增殖和细胞侵袭力的功能,进而形成肿瘤.

内皮抑素30肽基因真核表达载体的构建及实验研究

目的 构建改构内皮抑素抗肿瘤相关肽(30肽)的真核表达载体pVAX1,检测该重组载体的生物学活性.方法 在30肽基因的5′端加入胶原蛋白ⅩⅧ信号肽编码序列,通过PCR扩增获得目的基因30肽,并连接到质粒pVAX1中,构建表达分泌型内皮抑素的重组质粒pVAX1-30E,然后将重组质粒pVAX1-30E直接注入小鼠肿瘤组织.通过ELISA小鼠体内抑瘤实验检测目的基因的表达及其活性.结果 ELISA实验表明构建的分泌型内皮抑素重组质粒pVAX1-30E能在肿瘤细胞中表达30肽,免疫组化结果表明瘤组织中表达的30肽能抑制肿瘤微血管的新生,而体内抑瘤实验表明在肿瘤部位直接注射重组质粒能抑制肿瘤生长,抑瘤率为28.19%.结论 通过向瘤组织中直接注射分泌型内皮抑素重组质粒pVAX1-30E 可以抑制小鼠体内肿瘤微血管新生和肿瘤生长而实现其抗肿瘤活性.

小鼠白内障基因突变方式、分布及基因定位

哺乳动物发育相关的功能基因的鉴定多来源于自发或诱发突变的小鼠.小鼠白内障作为较易鉴定的性状,目前业已明确的突变多达140余个.自发突变的小鼠主要来源于大规模饲养,诱发突变主要通过X射线与ENU处理获得,基因敲除与转基因小鼠亦可获得白内障性状.已知的白内障相关基因分布于小鼠20条染色体,其中以1号染色体多,并常于小鼠胚胎时期起始表达.小鼠白内障表型多由单基因突变引起,突变的确定主要通过F2代家系全基因组扫描、精细定位、单倍型分型与测序验证等程序.本文从小鼠白内障基因突变来源、基因分布、基因定位与基因表达等角度较为全面的阐述了小鼠先天性白内障的研究进展.

树鼩在医学实验研究中的新进展

树鼩的许多生物学特性近似于人类,人们利用树鼩成功建立了多种人类病毒感染的动物模型,并在肿瘤、内分泌、神经、视觉等方面有相当广泛和深入的应用和研究.本文概述了树鼩在医学实验研究中的新进展.

大鼠心脏插管留置术的探讨

目的 探讨大鼠右心房插管留置术实验方法.方法 20只SD大鼠进行右心房导管置入术,术后随机分为2组(导管穿弹簧正内孔组、导管穿弹簧侧边入内孔组),每组各10只.导管在体内固定后由颈背部引出,穿过弹簧,导管另一端固定于饲养笼外的支架上,导管外接三通管等.结果 24 h对两组模型进行实验观察.(1)导管穿弹簧正内孔组:只有1只导管弹簧设备未完全破坏,另9只模型的导管被咬断或拉出了出来,10只模型都不能从导管抽取血液样本.(2)导管穿弹簧侧边入内孔组:导管和弹簧设备都完好,其中9只模型都能从导管抽取血液样本.结论 导管穿弹簧侧边入内孔组模型方法是成功的,有一定的推广价值.

兔在体心脏缺血再灌注模型的制作方法的改进

目的 建立兔在体心脏缺血再灌注模型的新方法.方法 40只新西兰大白兔随机分为缺血再灌注组(25只),假手术组(15只).缺血再灌注组采用"二线二结"法结扎心脏左前降支30 min,然后恢复心肌灌注3 h;假手术组仅将线从左前降支周围心肌中穿过,但并不结扎.实验中连续描记心电图.两组分别于结扎(穿线)前和再灌注(穿线)后1 h从股静脉取血1 mL测定血清肌钙蛋白.实验结束时取心肌行2,3,5-氯化三苯基四氮唑和苏木精-伊红染色.结果 缺血再灌注组心电图存在ST-T的动态演变,再灌注1 h后血清肌钙蛋白浓度明显高于术前(0.47±0.35 vs.0.33±0.31,P = 0.002).两种染色方法均证明存在心肌坏死.结论 "二线二结"法能够既方便又成功地建立兔在体心脏缺血再灌注模型.

实验猴麻疹预防和治疗方案初探

实验猴麻疹是造成断奶仔猴死亡的重要传染病之一,本文对该病的临床诊断、护理、预防和治疗方案进行了初步研究,并提出了行之有效的预防、护理及治疗措施.经临床实践证明,该方案对实验猴麻疹的治愈率可达90%以上,值得在国内实验猴生产及科研单位推广应用.

实验猴主要细菌性感染疾病的病理特点分析

目的 通过对实验猴细菌性感染疾病脏器病理改变的观察和分析,完善实验猴病理检测资料,为实验动物病理检测标准的制定提供依据.方法 选取86例实验猴按5种必检细菌性感染疾病(沙门菌病;志贺菌病;结核杆菌病;小肠结肠炎耶尔森菌病;空肠弯曲菌病)病原种类分组,对脏器标本进行病理剖检,HE染色观察记录病变,建立实验猴必检细菌性疾病病理检测资料.结果 病理检测结果显示:沙门菌病表现为伤寒肉芽肿,结核杆菌病表现为结核肉芽肿,小肠结肠炎耶尔森菌病表现为纵行溃疡、急性炎及化脓性肉芽肿;志贺菌病、空肠弯曲菌病表现为急性炎和表浅溃疡.结论 感染5种必检细菌的实验猴分别表现出不同的病理变化,病理检测对疾病的分析诊断有重要价值,检测结果补充了实验猴细菌性疾病病理检测资料,为制定实验动物病理检测指南提供了相关依据.

广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查

目的 了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况.方法 随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况.结果 共检测小鼠盲肠内容物206份, 阳性样本为77份,阳性率为37.38%.3个设施的小鼠感染MNV,各品系小鼠易感性差异无显著.结论 证实广东省小鼠存在MNV感染,部分设施小鼠MNV感染率很高,需加强动物的饲养管理.RT-PCR方法可以应用于MNV感染检测.

组织相容性复合体在实验鸡中的应用

鸡主要组织相容性复合体(MHC)基因位于鸡16号染色体上,具有高度的多态性.现已发现,不同MHC-B单倍体对各种疾病的抗性不同.本文主要介绍了鸡MHC的结构特点、鸡MHC与抗病性的关系、鸡MHC检测方法的研究进展以及其在鸡抗病育种中的应用前景.

南方医科大学松山湖实验动物科技园启用