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凋亡初级精母细胞凋亡小体形态学观察
在对精液细胞学分析过程中,笔者发现许多少精子症(精子<20×106/ml)患者的精液中,存在着大量的、各种形态的凋亡生精细胞,特别是凋亡初级精母细胞在其形态学变化上更为丰富.正确认识这些凋亡的生精细胞对于分析病情、病理状况具有重要意义.本文对凋亡初级精母细胞凋亡小体作一形态学描述.
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小RNA在精子发生中的研究进展
近20年来人们在动物、植物及病毒等生物中发现了一系列小分子非编码RNA,包括miRNA[1]、piRNA[2]和siRNA[3].与其相关的Argonaut家族蛋白分为2个亚家族:Ago亚家族和Piwi亚家族.精子发生是指由精原细胞经初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞至成熟精子形成的过程.整个过程分为3个阶段:精原细胞的增殖、精母细胞的减数分裂和精子细胞的变态过程,这一复杂的过程受多种因素的调控.近年来,小RNA在精子发生中的作用越来越受到人们的重视,现将三种小分子非编码RNA在精子发生中调控作用的研究现状概述如下.
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睾丸表达新基因HSD-28的克隆及其编码蛋白质的研究
目的 研究从人初级精母细胞特异EST文库中克降的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能.方法 利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28.纯化原核表达系统表达的HSD-28蛋白,以此免疫新西兰白兔制备针对HSD-28的特异性多克隆抗体.采用免疫组化的方法研究HSD-28在人睾丸组织中的表达定位.后,利用酵母舣杂交系统筛选与HSD-28相互作用的蛋白质.结果 克隆得到了的HSD-28基因,提交GenBank获得登陆号为AY251533,全长为641个碱基,其中开放阅读框为504碱基,编码一个由168个氨基酸构成的蛋白质,命名为HSD-28蛋白.将构建的pET-30a-HSD-28重组质粒转化到BL21(DE3)宿主菌,表达并纯化了HSD-28蛋白,大小约为28kDa.免疫组织化学结果显示,HSD-28蛋白特异的定位于人精原细胞和早期初级精母细胞.筛选得到与HSD-28相互作用的两个阳性克隆45#和106#.结论 从人睾丸cDNA文库中成功克隆得到HSD-28基因,其编码蛋白质表达定位于人精原细胞和初级精母细胞中,可能参与精子发生过程中减数分裂的调节.
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1,1-二氨基-2,2-二硝基乙烯急性染毒对小鼠初级精母细胞染色体畸变的影响
为评价1,l-二氨基-2,2-二硝基乙烯(FOX-7)对小鼠初级精母细胞染色体畸变的影响,将50只健康7~12周龄SPF级雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为溶剂对照(4%淀粉溶液)组和348.22、139.29、69.64 mg/kg FOX-7染毒组,另设阳性对照(40 mg/kg环磷酰胺)组,每组10只.每日固定时间采用经口灌胃方式进行染毒,染毒容量为20 ml/kg,连续5d.于首次染毒后第12天,观察染色体结构畸变率和单价体率.结果显示,与溶剂对照组比较,348.22 mg/kg FOX-7染毒组小鼠初级精母细胞染色体结构畸变率较高,差异有统计学意义(P<0.05);而各剂量FOX-7染毒组小鼠初级精母细胞常染色体单价体和性染色体单件体率均无明显改变.提示FOX-7可能会引起小鼠初级精母细胞染色体发生结构畸形改变.
关键词: 1 1-二氨基-2 2-二硝基乙烯(FOX-7) 初级精母细胞 染色体畸变 -
出生前后低蛋白饲料对仔鼠睾丸细胞数的影响
"胎儿期起源学说"和"程序化学说"认为,生命早期如胎儿期受到刺激或损伤会对以后的器官结构、生理功能和代谢产生持续性的影响[1-4].以往研究表明,出生时低体重的人群成年后发生2型糖尿病和心血管病的危险性显著增加[1-4].妊娠期母亲过量进食肉类食物会使其子代在成年后血中皮质醇水平增高,易患高血压[3].动物实验表明,妊娠期限制母羊的总能量会导致其后代睾丸Sertoli细胞数目减少[5].本研究用不同蛋白含量饲料喂养妊娠期母鼠及其生后的子代鼠,观察出生前后低蛋白饮食对睾丸细胞数的影响.
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雄激素受体在大鼠睾丸中转录模式的分析
目的:研究Ar(雄激素受体)基因在大鼠睾丸组织中的转录模式.方法:取刚出生的雄性Wistar大鼠,于出生2~65日的不同时间点,脊椎脱臼处死3只不同窝别的幼鼠,提取睾丸组织总mRNA;将mRNA反转录成eDNA,随后采用Real-time PCR方法检测大鼠睾丸组织中Ar mRNA的转录情况.结果:Ar mRNA表达在出生后第2天开始缓慢上升到第16天达到高值,第16天到第30天迅速下降,第31天出现一个小高峰后到第65天持续缓慢下降.结论:Ar基因在大鼠早期发育睾丸组织中表达量逐渐升高,可能与精原干细胞的增殖及初级精母细胞的发生相关.
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雄性小鼠生殖细胞染色体制备方法的研究
目前,雄性小鼠生殖细胞染色体制备方法多数都采用文献方法[1],或在此基础上进行改进.这些方法在实际应用中都有一定的局限性.即要想制备较好的精原细胞染色体,就不可能同时制备可供分析的初级精母细胞和次级精母细胞染色体.为此,本文应用同一只小鼠的两侧睾丸,同时制备出次级精母细胞、初级精母细胞和精原细胞3种生殖细胞染色体标本.报告如下.
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丙烯腈对雄性小鼠生殖细胞作用的研究
目的探讨丙烯腈对雄性小鼠生殖细胞的毒性作用.方法将40只昆明种雄性小鼠随机分成5组,阴性对照组(生理盐水0.1 ml/10g)、低剂量组(丙烯腈2 mg/kg)、中剂量组(丙烯腈4 mg/kg)、高剂量组(丙烯腈8 mg/kg)和阳性对照组(环磷酰胺20 mg/kg).每天皮下注射1次,连续5天.实验结束处死动物,取材,做初级精母细胞染色体畸变分析及精子畸形试验.结果皮下注射丙烯腈2 mg/kg,4 mg/kg和8 mg/kg组小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变率、细胞畸变率及精子畸形率均显著高于阴性对照组.结论丙烯腈对雄性小鼠的生殖细胞有致突变效应,并对精子的生成有毒害作用.
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稳恒磁场强度对小鼠骨髓细胞和精母细胞的遗传效应研究靠
稳恒磁场强度为40 mT、50 mT、60 mT、100 mT,作用30 d后测定分析小鼠初级精母细胞染色体畸变率和骨髓嗜多染红细胞微核率.稳恒磁场强度为40~60 mT时,对小鼠初级精母细胞染色体畸变的发生无明显影响;稳恒磁场强度为100 mT时,可致小鼠初级精母细胞染色体畸变、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著增高.说明高强度磁场对体细胞和生殖细胞有致突变性.
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基于睾丸组织树脂切片评估青少年隐睾患者睾丸功能和恶变风险
作者报道一种新的技术对未成年隐睾患儿的生育能力及睾丸恶性变几率进行评估。该技术使用电镜标本的固定方法,EPON812包埋并行超薄切片,使用甲苯胺蓝+碱性品红双重染色,或再使用Laczko 方法对CIS细胞的糖原进行三重染色,完毕后用光镜进行观察;必要时可将标本进行醋酸铀+枸橼酸铅染色后电镜观察。在标本中可见生精小管结构及各级生精细胞。通过观察计算管内总生殖细胞指数(总生殖细胞数/总小管数),管内A-dark精原细胞指数(总A-dark精原细胞数/总小管数),管内初级精母细胞指数(总初级精母细胞数/总小管数)可评价患儿的生育能力。在Laczko染色中如发现糖原丰富的煎蛋样细胞,可确定为CIS(原位癌)细胞,在电镜下可见丰富的胞质内糖原颗粒,提示患者今后发生睾丸肿瘤概率较大。
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不要把精液中的生精细胞都判为白细胞
在精液检验中,我们经常发现一些病人在精液常规报告中有白细胞增多,实际上经仔细鉴别则是脱落的生精细胞.因为其结果容易误导临床治疗,可造成经济上的损失,并延误治疗时间.如我院接诊一名病人,男,30岁,自述结婚3年余而不育,曾到过多家医院检验精液,精子密度在7~9×10 9/L左右,白细胞卅/HP,服过一年多的抗生素及中药清热解毒、清火利湿等方法治疗无效,到我院检查时查体双侧睾丸等大,约20ml,无精索静脉曲张.精液量2.5ml,颜色灰白,pH值7.5,精子密度9×10 9/L,白细胞0~1/HP,发现大量的生精细胞(主要为初级精母细胞和次级精母细胞)卅/HP.检验提示病人无感染而是生精功能障碍.临床停用抗生素,改变用药治疗,三个月后行精液复查,精子数量大量增加,精子密度为65×10 9/L,生精细胞降到+/Hp.
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凋亡初级精母细胞细胞核变化的形态学观察及测量
细胞凋亡(apoptosis)是细胞在一定生理和病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程[1].在对精液细胞学分析过程中,笔者发现许多少精子症患者的精液中,存在着大量的、各种形态的凋亡生精细胞,正确认识这些凋亡的生精细胞对于分析病情、研究病理状况具有重要意义.本研究对凋亡样改变的初级精母细胞的形态学特征进行描述,并对凋亡初级精母细胞(核固缩呈眼球形)和正常形态初级精母细胞进行了比较.
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Turner综合征
Turner综合征(TS),即先天性卵巢发育不全症,是女性性腺发育不全的一个类型.该病于1959年被证实系因染色体畸变引起,患者核型缺少一条X染色体,多数源于父体初级精母细胞在减数分裂过程中或母体生殖细胞在第二次减数分裂中发生性染色体"不分裂",使一个带X染色体的卵子与一个无染色体的精子或一个带X染色体的精子与一个无染色体的卵子结合形成不正常的受精卵.
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己烯雌酚对大鼠睾丸组织干细胞因子表达水平的影响
雌激素是精子发生过程中关键激素之一,其具体作用机制尚待探讨[1].c-kit受体与其配体干细胞因子(SCF)的相互作用(SCF/c-kit系统)在精子生成中有重要的作用.在成年雄性大鼠睾丸中,编码c-kit的mRNA存在于精原细胞、初级精母细胞、圆形精子细胞及睾丸间质细胞,但表达SCF的细胞只有支持细胞[2].所以目前认为支持细胞损伤及恢复与SCF表达水平有重要联系.本实验拟应用己烯雌酚(DES)对2,5-己二酮(支持细胞毒物)导致的大鼠生精障碍模型进行干预,以探索DES与睾丸内SCF表达水平的关系.
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哺乳动物初级精母细胞体外培养的研究
目的:探讨哺乳动物初级精母细胞体外培养分化的可能性.方法:制备雄性大鼠睾丸初级精母细胞,与非洲绿猴肾上皮细胞(Vero细胞)共培养,观察初级精母细胞体外培养过程中的生长行为,用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记跟踪观察大鼠初级精母细胞在体外培养中的分化情况.结果:大鼠初级精母细胞与Vero细胞共培养后能进行减数分裂阶段分化,生成精子细胞;BrdU标记检测结果显示,培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞,培养后在有BrdU标记的细胞中有早期精子细胞.结论:哺乳动物初级精母细胞在体外培养中能进行分化.
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六种化合物诱发小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变实验研究
某些化学因子对生殖细胞所产生的突变效应,不仅可影响本代,而且可遗传给后代.睾丸初级精母细胞染色体畸变实验是一种以初级精母细胞为靶细胞的致突变实验.它以整体哺乳动物来检测化学物质对睾丸染色体可遗传的损伤,其方法简便,检测终点明确,因此,我们应用该方法对已知六种可引起生殖细胞突变的化合物进行了测试,旨在对这一方法进行验证,并选择佳阳性剂量.