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唾液腺腺样囊性癌XT-Ⅰ和XT-Ⅱ基因沉默效果的比较
目的 比较唾液腺腺样囊性癌XT-Ⅰ基因和XT-Ⅱ基因沉默后,蛋白多糖PGs分泌阻抑的效率.方法 构建针对靶向沉默XT-Ⅰ、XT-Ⅱ基因的腺病毒载体,转染SACC-83细胞,沉默XT-Ⅰ基因和XT-Ⅱ基因.采用Real-time PCR、Western blot检测XT-Ⅰ和XT-Ⅱ基因和蛋白的表达,通过Blyscan Assay Kit检测蛋白多糖PGs阻抑的效率.结果 ①XT-Ⅰ基因和XT-Ⅱ基因mRNA表达分别减少64%和54%.②XT-Ⅰ、XT-Ⅱ蛋白的相对表达量分别减少38%和31%.③蛋白多糖合成量分别降低49.69%和36.47%,差别有显著性(P<0.05).结论 ①分别沉默XT-Ⅰ、XT-Ⅱ基因均能有效抑制SACC-83细胞蛋白多糖的生物合成.②沉默XT-Ⅰ基因,阻抑蛋白多糖合成量效率(49.69%)明显高于XT-Ⅱ基因(36.47%).
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人参多糖对大鼠关节软骨细胞糖胺聚糖合成的影响及其机制
目的:探讨人参多糖(GPS)对大鼠关节软骨细胞糖胺聚糖(GAG)合成的影响及其作用机制.方法:分离原代大鼠关节软骨细胞进行传代培养并加入白介素-1β造模,分别将2,10,50 μg·ml-1的人参多糖作用于该软骨细胞48 h.检测细胞增殖、GAG含量和GAG合成酶木糖基转移酶-Ⅰ(XylT-Ⅰ)、半乳糖基转移酶-Ⅰ(GalT-Ⅰ)、半乳糖基转移酶-Ⅱ(GalT-Ⅱ)和葡萄糖醛酸转移酶-Ⅰ(GlcAT-Ⅰ)mRNA的含量和基质降解酶基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、聚集蛋白聚糖酶-1(aggrecanase-1)和聚集蛋白聚糖酶-2(aggrecanase-2)mRNA的含量.结果:各浓度人参多糖对大鼠关节软骨细胞增殖无显著影响(P>0.05);10、50 μg·ml-1GPS组软骨细胞GAG含量显著高于模型对照组(P<0.01);10 μg·ml-1GPS可增加XylT-Ⅰ mRNA的表达(P<0.05),50 μg·ml-1GPS可增加XylT-Ⅰ、GalT-I和GalT-Ⅱ的mRNA表达(P<0.05或P<0.01);IL-1β可显著增加软骨细胞蛋白多糖降解酶MMP-3、aggrecanase-1和aggrecanase-2的mRNA表达(P<0.05或P<0.01),GPS对蛋白多糖降解酶表达无抑制作用.结论:GPS可促进IL-1β下调的大鼠软骨细胞GAG合成,其机制可能与促进GAG合成酶表达增加而不是抑制基质降解酶表达有关.