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分泌型钙激活Cl-通道在ARDS小鼠肺组织表达的变化及规律
目的 观察小鼠分泌型钙激活Cl-通道(mCLCA3)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型肺组织中的表达量及随时间的变化规律,探究其在急性肺损伤过程中的作用.方法 18只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和脂多糖(LPS)组ARDS小鼠(分为气道滴入LPS诱导6h组、24 h组),每组6只.HE染色观察小鼠肺组织形态结构改变,并进行肺损伤评分;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察小鼠气道上皮中杯状细胞的数量;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肺组织中mCLCA3的mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)法检测mCLCA3蛋白在ARDS小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)中的表达.结果 HE染色结果,与对照组相比,LPS组ARDS小鼠肺部正常结构明显被破坏,肺泡上皮呈弥漫性损伤,肺泡内出血并伴有大量炎性细胞浸润,肺间质蛋白质沉积,有透明膜形成;与对照组小鼠相比较,LPS组ARDS小鼠的肺损伤评分(对照组:1.40±0.54;LPS组:7.40±0.54,P＜0.05)显著升高;AB-PAS染色观察小鼠气道上皮中杯状细胞的数量;real-time RT-PCR (RT-qPCR)和Western blot结果显示:相比于对照组小鼠,LPS组ARDS小鼠的肺组织中mCLCA3的基因表达量明显下降(P＜0.05);mCLCA3蛋白在ARDS小鼠的肺组织和BALF中均显著降低,且差异有统计学意义(P＜0.05),且下降水平呈时间依赖性.结论 LPS诱导的ARDS小鼠模型中气道杯状细胞数量明显增加,而其肺组织及BALF中mCLCA3的mRNA及蛋白表达水平(评分)均明显下降,并表现为时间依赖性.气道杯状细胞产生的分泌型CLCA表达水平与ARDS损伤程度呈负相关,提示前者可能在肺部炎症机制中扮演着负性调节作用.
关键词： 杯状细胞 急性呼吸窘迫综合征 钙激活氯离子通道蛋白 -
地尔硫卓通过下调钙激活氯离子通道抑制肝癌细胞增殖和运动
目的 观察钙离子通道抑制剂地尔硫卓对肝癌MHCC97H、7402细胞增殖和运动侵袭能力的作用,探讨其相应机制.方法 采用不同浓度地尔硫卓(0、25、50、100、200、400μmol/L)干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间(12、24、48 h)后,用MTT法测定地尔硫卓对肝癌细胞增殖的影响,体外细胞划痕实验检测处理后肝癌细胞运动侵袭能力;通过RT-P CR和免疫细胞化学检测地尔硫卓对肝癌细胞中TMEM16A mRNA和蛋白表达水平的影响.结果 地尔硫卓能够有效抑制肝癌MHCC97H、7402细胞的增殖和运动侵袭能力,且具有一定的时间和浓度依赖性特点(P<0.05).其中,100μmol/L浓度的地尔硫卓作用24 h对MHCC97H肝癌细胞抑制较明显,TMEM16A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),而50μmol/L浓度的地尔硫卓作用48 h对7402肝癌细胞抑制较明显,TMEM16A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05).结论 地尔硫卓能一过性抑制MHCC97H、7402肝癌细胞侵袭,这种作用可能与其通过调节钙离子通道TMEM16A的mRNA和蛋白表达而发挥肿瘤抑制作用有关.
关键词： 肝细胞癌 侵袭转移 钙激活氯离子通道蛋白 TMEM16A 地尔硫卓 -
钙激活Cl-通道蛋白在急性呼吸窘迫综合征患者体外气道上皮细胞中的表达及其作用实验研究
目的:探讨钙激活Cl-通道蛋白(CLCA)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)体外气道上皮细胞中的蛋白表达情况,并初步探讨其作用.方法:运用脂多糖(LPS)刺激16HBE细胞系,Western Blot检测hCLCA1蛋白表达水平与ARDS的时程关系;运用hCLCA1-siRNA干扰16HBE细胞系中hCLCA1的表达,real-time RT-PCR法检测细胞系中hCLCA1的mRNA和蛋白表达水平,验证siRN A是否对目的基因成功抑制.同时检测炎症因子的m RN A表达变化水平,观察CLCA的降低与炎症因子表达的关系.结果:Western Blot结果显示:16HBE细胞系加LPS(1μg/ml)刺激12h、24h后hCLCA1的蛋白表达量下降,且LPS刺激24h后hCLCA1的降低有统计学差异(P<0.05).real-time RT-PCR检测证实hCLCA1-siRNA对目的基因成功抑制,表明成功构建hCLCA1低表达的16HBE细胞系;同时real-time RT-PCR结果显示TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平升高(P<0.05).结论:CLCA在LPS刺激后的培养HBE细胞系中蛋白表达水平下降,并表现为时间依赖性.抑制HBE细胞系hCLCA1的基因表达,则该细胞分泌炎症因子的水平升高,推测CLCA在ARDS体外气道上皮细胞分泌炎症介质过程中发挥负性调节作用.
