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c-FLIP蛋白在小鼠脓毒症急性肾损伤中的表达及意义
目的 观察细胞型Fas相关死亡域样白细胞介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)在小鼠脓毒症急性肾损伤(SAKI)中的表达并探讨其意义.方法 按随机数字表法将30只雄性ICR小鼠分为正常对照组(Normal组)、假手术组(Sham组)和SAKI组,每组10只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备小鼠SAKI模型;Sham组不结扎、穿刺盲肠,其余手术步骤同SAKI组;Normal组不做任何处理.于CLP术后24 h取小鼠眼眶血和肾脏组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;取肾组织行苏木素-伊红染色,于光镜下观察肾组织病理学改变并评估损伤严重程度;用免疫组化法检测肾组织中c-FLIP表达;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肾组织中c-FLIP、Bax和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (caspase-3)蛋白表达.采用Pearson法分析SAKI时肾组织中c-FLIP与Bax和caspase-3蛋白表达的相关性.结果 Normal组和Sham组肾小管上皮细胞结构规则、完整,间质未见炎性细胞浸润,肾损伤评分均为(1.30±0.48)分;免疫组化显示肾小管上皮细胞可见大量c-FLIP阳性表达(IA :120.20±3.87、116.70±3.46);Western Blot显示肾组织中c-FLIP呈高表达(c-FLIP/GAPDH :0.99±0.01、0.98±0.02),Bax和caspase-3呈低表达(Bax/GAPDH :0.16±0.04、0.19±0.03,caspase-3/GAPDH :0.24±0.04、0.23±0.05).与Sham组相比,SAKI组肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润,肾损伤评分显著升高(分:4.60±0.52比1.30±0.48, P＜0.01),血清SCr和BUN水平均显著升高〔SCr(μmol/L):193.90±13.54 比24.50±3.78, BUN(mmol/L):81.60±7.26比5.20±0.92,均P＜0.01〕,肾组织中c-FLIP阳性细胞明显减少(IA :17.11±0.82比116.70±3.46, P＜0.01),c-FLIP蛋白表达水平明显下降(c-FLIP/GAPDH :0.29±0.03比0.98±0.02,P＜0.01),而Bax和caspase-3蛋白表达水平均明显升高(Bax/GAPDH :0.87±0.06比0.19±0.03,caspase-3/GAPDH :0.88±0.07比0.23±0.05,均P＜0.01).相关性分析显示,SAKI小鼠肾组织中c-FLIP蛋白与Bax蛋白(r＝-0.468,P＝0.029)和caspase-3蛋白表达(r＝-0.663,P＝0.004)均呈显著负相关.结论 SAKI时肾组织中c-FLIP蛋白表达水平显著下调,其下调机制与肾小管上皮细胞凋亡增加相关,可作为治疗SAKI的有效靶点.
