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ConA、α-Galcer与LPS/D-GalN诱导免疫性肝损伤小鼠NKT细胞功能 改变的比较研究
目的:通过比较三种免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞功能改变情况,寻找一种在病理生理机制上更接近临床特点的免疫性肝损伤动物模型.方法:40只小鼠随机分为空白对照组、Con A模型组、α-Galcer模型组、LPS/D-Gal N模型组,每组10只.Con A模型组尾静脉注射ConA溶液(18 mg/kg),α-Galcer模型组腹腔注射 α-Galcer溶液(40μg/kg),LPS/D-Gal N模型组腹腔注射LPS溶液(10μg/kg)和D-Gal N溶液(700 mg/kg).造模完成后8 h,检测小鼠血清转氨酶ALT、AST水平,计算肝指数,采用HE染色法观察肝组织病理改变情况,流式细胞仪分析肝组织NKT细胞含量,Western blot法检测肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6蛋白表达情况.结果:与空白对照组比较,各模型组小鼠血清ALT、AST水平均显著升高(P<0.01),肝指数增加(P<0.01或P<0.05),肝组织病理损伤明显,NKT细胞含量显著增加(P<0.01或P<0.05),TNF-α、IFN-γ、IL-6表达均明显上调(P<0.01);各模型组之间比较,α-Galcer模型组血清ALT、AST含量显著低于Con A组(P<0.05),病理损伤也相对较轻,LPS/D-Gal N模型组NKT细胞含量明显低于其余两组(P<0.05).结论:Con A、α-Galcer和LPS/D-Gal N诱导的免疫性肝损伤模型小鼠NKT细胞明显激活,介导炎症紊乱;其中,以Con A诱导的动物模型肝脏病理损伤及免疫紊乱为明显,更符合疾病临床特点,可作为免疫性肝损伤的首选模型.
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ATF4在CCl4和LPS/D-GalN介导小鼠肝损伤中的保护作用
目的 利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究.方法 建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-GalN急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其mRNA水平.采用CRISPR-Cas9技术敲低ATF4后,分析检测两种模型中小鼠血清AST和ALT水平.为进一步探明ATF4的作用,采用内质网应激诱导剂衣霉素处理小鼠,Western blot检测小鼠肝、肺组织中ATF4、磷酸化-eIF2α、总eIF2α和Bip的蛋白水平.RT-PCR检测肝脏XBP1 mRNA的剪接形式(活性形式)和未剪接形式(非活性形式).结果 小鼠肝脏中的ATF4蛋白与其他组织相比异常增高.衣霉素能诱导小鼠体内内质网应激反应(如eIF 2α磷酸化),却引起小鼠肝脏中ATF4蛋白降低.在CCl4慢性肝损伤模型和LPS/D-GalN急性肝损伤小鼠模型中,肝脏ATF4蛋白明显降低.CRISPR-Cas9敲低肝脏ATF4后,两种小鼠模型中的血清AST和ALT进一步升高.结论 ATF4在小鼠肝损伤中起保护作用.
关键词： ATF4 CCl4 LPS/D-GalN 肝损伤 -
脂多糖联合D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤模型的佳条件研究
目的 探讨脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-GaiN)诱导大鼠急性肝损伤模型给药剂量及取材时间的佳组合.方法 按L9(34)正交表设计实验,LPS(A因素)3个水平为20、30、40 μg/kg,D-GalN(B因素)3个水平为200、300、400 mg/kg、取材时间(C因素)3个水平为3、6、12h.腹腔注射给药,检测各实验组在不同时间点血清肝功能,计算各脏器指数,观察肝组织病理变化,筛选佳造模条件.结果 HE染色示,A1B3C3组肝小叶结构紊乱,肝细胞成点状坏死,细胞核消失,大量炎细胞浸润,其他各组肝细胞坏死及炎细胞浸润较轻.正交实验直观分析法得出ALT极差为RA(1299.79)＞RB(1215.81)＞RC(1112.03),AST的极差为RA(2250.57)＞RB(2094.58)＞RC(1861.2),即A因素对转氨酶结果的影响大,C因素对转氨酶的结果影响小.ALT和AST均为A因素1水平的均值大,B因素3水平的均值大,C因素3水平的均值大,分别为1 470.44、1 453.54、1 308.04;2 582.85、2 555.85、2 285.6.结论 20 μ.g/kg LPS联合400 mg/kg D-GalN于12h取材即A1B3C3组为诱导大鼠急性肝损伤的佳造模条件.
关键词： 急性肝损伤 LPS/D-GalN AST ALT
