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  • 流感病毒细胞培养时胰酶添加量的优化分析

    作者:慕毓

    目的 在流感病毒的培养体系中添加不同浓度的TPCK-胰酶,希望可以找到病毒培养效果好的胰酶浓度,提高病毒分离效果.方法 将四种流感病毒分别接种于MDCK细胞,加入不同TPCK-胰酶终浓度的病毒生长液,当CPE>75%时进行收获,HA试验测病毒滴度.结果 甲型H1N1,季节性H3N2,乙型Victoria、乙型Yamagata出现血凝滴度的峰值对应的TPCK-胰酶的添加量分别为2.0、2.0~2.5、3.0,3.0μg/ml.结论 在实际工作中可以根据不同型别的流感病毒区分对待,分离乙型流感病毒时,适当增加胰酶含量,会取得比较好的分离效果.

  • 维持培养基组分对流感病毒增殖效果的影响

    作者:黄世腾;杨瑞军;吕磊

    目的 探究维持培养基不同组分对流感病毒增殖的影响,提高病毒增殖效率.方法 通过改变维持培养基的组分,分别添加不同浓度的TPCK-胰酶、谷氨酰胺、葡萄糖和丁酸钠,用其对流感病毒在MDCK细胞中进行增殖培养,在24h、48h、72h、96h对培养物进行血凝素(HA)滴度测定;同时检测不同浓度的丁酸纳对MDCK细胞活性的影响.结果 流感病毒新甲型H1N1、A(H3N2)和B(Victoria)增殖的佳胰酶浓度为3μg/mL,B(Yamagata)佳胰酶浓度为2μg/mL;各亚型流感病毒增殖的适宜谷氨酰胺浓度为4mM;适宜葡萄糖浓度为(20~30)mM;佳丁酸钠浓度为0.5mM,过高的丁酸钠浓度对流感病毒增殖有抑制作用,丁酸钠降低细胞活性的能力随浓度提高而增加.结论 调节维持培养基组分浓度能够提高流感病毒的增殖效率,为高效地进行流感病毒分离和流感疫苗生产提供基础数据.

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