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鲜铁皮石斛冻干粉质量标准研究
铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是我国一种传统名贵中药,具有滋阴清热,生津益胃之功效,千年以来一直和灵芝人参和冬虫夏草等被列为上品中药,并被道家养生经典《道藏》誉为中华九大仙草之首.铁皮石斛使用方法常为鲜品直接食用茶饮或制成制剂,因纤维、粘液等含量高,直接食用有粘牙粗燥口感差的特点并且不易保存.茶饮时药材中有效成分不易完全溶出.铁皮石斛干品质地坚韧,使用不方便.冻干粉碎技术是近年来国际上发展迅速的一项新技术,中粉具有一般颗粒不具有的一些特殊的理化性质,如良好的溶解性、分散性、吸附性、化学反应活性等.因此,将铁皮石斛制成冻干粉以促进有效成分溶出,提高生物利用度.
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纳米粒子的靶向作用机制研究进展
纳米粒子是指尺度在1 ~ 100nm 之间的微粒[1],这类粒子具有量子尺寸效应、小尺寸效应、表面与界面效应与协同效应等性质,表现为比表面积大、表面活性中心多、表面反应活性高、吸附能力强、催化能力高、毒性低及不易被体内和细胞内各种酶降解等.纳米粒子载药不仅可以提高药物对癌组织的靶向性,还可以高选择性地作用于癌细胞内外的小分子或基因物质,对原发恶性肿瘤和转移性恶性肿瘤都有很好的疗效[2-4].
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核转录因子-圈套抑制血管内皮细胞炎性反应的实验研究
炎症介质过度释放贯穿全身炎症反应综合征(SIRS)、多脏器功能障碍综合征(MODS)始终,是病情恶化的首要原因.核转录因子κB(NF-κB)在炎症介质的调节中起主要作用[1].临床上多种手段可以抑制NF-κB的活性[2].但特异性差,副作用多.NF-κB能特异性识别并结合目的基因上的κB序列 [1,2],利用这个特性,合成一包含κB序列的双链寡聚脱氧核苷酸(dsODNs)并转入靶细胞核,竞争性结合核内激活的NF-κB,可以阻断其促炎症反应活性[3,4].这一策略也被称为decoy.在此我们以脂多糖(LPS)激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)NF-κB活性,观察NF-κB-decoy对NF-κB活性的影响,探索一种抑制SIRS、MODS发病过程中炎症过度激活的分子策略.
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一氧化氮与关节软骨
1一氧化氮(No)的发现史20世纪80年代以前,一氧化氮只被认为是一种工业污染气体,它破坏臭氧层并可能是一种致癌物.但近20年的研究证实:这种小分子物质是哺乳动物细胞的自然产物并具有重要的生理病理作用.人们对于一氧化氮的研究始于血管内皮舒张因子(Endothelium-derived reIaxing factor). 1980年,Furchgott和Zawadzki首次报道:乙酰胆碱对血管的扩张依赖于血管内皮细胞的存在,即血管内皮细胞在乙酰胆碱作用下分泌一种物质,从而造成血管平滑肌细胞舒张.他们称这种物质为EDRF[1].此后,对EDRF的生理功能、影响因素、反应活性及其对血小板聚集等作用作了大量研究,但始终因其半衰期短、不稳定、未能揭示其化学性质.
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小反刍兽疫病毒N蛋白原核表达条件的优化及反应活性
目的 探讨小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)N蛋白原核表达、条件优化及反应活性.方法 参照GenBank中PPRV (Nigeria/75/1)N基因序列,人工合成该基因,构建重组表达质粒pET-30a(+)-N,转化至BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析.在不同温度、时间、IPTG浓度条件下诱导表达N蛋白,确定佳表达条件.结果 PPRV N蛋白(64.4 kD)成功表达,能被羊PPRV免疫血清所识别.N蛋白主要以包涵体存在,其佳诱导条件:诱导温度28℃、IPTG终浓度2.0 mmol/L、诱导时间16 h.结论 原核表达的PPRVN蛋白具有良好的特异性和反应活性,为单克隆抗体的制备及快速诊断方法的建立提供了技术资料.
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047 空肠弯曲菌自身凝集反应活性的检测和特性
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补体与小儿肾小球疾病
补体是正常血清和体液中存在的一组具有酶促反应活性的糖蛋白,由于它是抗体实现其溶细胞作用的必要的补充条件,故被命名为补体[1].在生理情况下以非活化型存在,当被活化后产生一系列的生物学效应,在机体中除担负抗感染和免疫调节的重要作用外,也参与免疫病理过程[2].现从临床角度简述有关的基础知识,重点介绍与之密切相关的肾小球疾病及应用前景.
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锤头状核酶的结构及其对病毒基因表达的抑制
RNA催化的切割反应自1981年〔1〕起陆续有人报告。后来将此类具有催化能力的核糖核酸称为核酶(ribozyrne),并先后发现了第一型内含子,第二型内含子,RNase P,发卡式核酶(HP),锤头状核酶(HH),D型肝炎核酶(斧头状核酶)等种类。 锤头状核酶的结构模型是1987年Symons等〔2〕在研究、比较了多种植物病原体RNA自催化切割反应活性区域的核苷酸序列后提出的。Haseloff等〔3〕在此基础上合成了能有效切割氯霉素乙酰基转移酶(CAT)转录本的锤头状核酶,实现了核酶的人工合成。这为将核酶技术用于抑制和阻断有害基因的表达打下了坚实的理论基础。
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吲哚胺2,3-双加氧酶与自身免疫性疾病
吲哚胺2,3-双加氧酶(indol eamine 2,3-dioxygenase,IDO)是肝脏外唯一可催化色氨酸沿犬尿氨酸分解的关键酶和限速酶,通过降解色氨酸,使局部组织中的色氨酸耗竭,色氨酸的代谢产物犬尿氨酸的浓度增加,从而抑制T淋巴细胞的增殖.自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病.目前,大多数学者认为自身免疫性疾病是自身免疫失耐受,产生针对自身抗原的抗体以及自身反应性淋巴细胞的活化.文献报道在健康成年个体内,可发现具有潜在自身反应活性的T淋巴细胞,这些自身反应性T淋巴细胞可通过诱导凋亡及免疫无能等多种机制来维持自身免疫耐受状态[1-2],而在这一过程中,免疫调节酶IDO起了非常重要的作用.IDO作为免疫平衡的一个重要调节器,通过自身免疫反应,能诱导外周免疫耐受和调控自体免疫反应.有研究证实IDO介导的色氨酸代谢异常已在移植、肿瘤、妊娠以及自身免疫性疾病中起作用[3-6].
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VEGF在精索静脉曲张大鼠睾丸和附睾中表达的研究
血管内皮生长因子(VEGF)是新生血管形成的主要调控者之一.VEGF不但作用与内皮细胞 ,而且也作用于非内皮细胞,它可能对男性生殖具有调节作用.精索静脉曲张(VC)是男性不育的一个主要原因,VC的睾丸流体动力学和血管系统有所改变,睾丸和附睾中VEG F的表达是否会有改变,VEGF在精索静脉曲张性不育中是否起作用等至今未见报道.本研究通过免疫组织化学方法对正常大鼠和VC大鼠睾丸和附睾中VEGF的定位及变化作了研究.材料和方法:建立青春期大鼠左侧精索静脉曲张动物模型,并进行了验证.取曲张组及对照组大鼠双侧睾丸和附睾,用Bourn′s液固定24hr(4℃),脱水 ,石蜡包埋.切片5-6μm,常规脱蜡至水.分别作HE染色和免疫组织化学染色.免疫组织化学染色:1.用1mM EDTA(pH8.0)煮沸切片10min、室温冷却 20min以修复抗原.2.用3%H2O2室温10min,封闭内源性过氧化物酶 ,用0.01M PBS(pH7.4)洗4次,10min/次.3.正常血清室温封闭 20hr.4.用0.01mg/ml多克隆兔抗人重组体VEGF165抗体4℃孵育2 4hr,阴性对照切片用不含一抗的PBS缓冲液孵育,PBS洗4次.5.用生物素标记羊抗兔IgG(二抗)室温孵育2小时,洗同上.6.用抗生物蛋白链菌素过氧化物酶室温孵育30min,洗同上.7.DAB显色5-6min,PBS洗同上,双蒸水洗.8.常规脱水,透明,封片.2.结果:VEGF免疫组织化学阳性反应呈棕褐色,在正常组和VC组大鼠的睾丸和附睾中均有表达.免疫组织化学反应具明显的特异性,在阴性对照组中,VEGF反应为阴性.正常组大鼠睾丸的VEGF蛋白定位于间质细胞和支持细胞,在一定发育阶段生精细胞中也有明显的VEGF免疫反应活性,而且在曲细精管不同区段的生精细胞组合中其表达有明显的差异.在正常大鼠附睾中,我们首次发现在附睾管的始段、头部、体部和尾部,以及输精管上皮中 ,VEGF阳性的细胞数和活性有明显的差别.VEGF主要定位于附睾管上皮主细胞,在基细胞和一些大的晕细胞(巨噬细胞)中也可见到.在一些管周的肌样细胞中也有VEGF阳性反应.在附睾管固有层内,毛细血管和小血管的内皮为VEGF阴性,而一些血管的管周肌细胞中为阳性.精索静脉曲张大鼠的睾丸和附睾中,VEGF的免疫反应活性有明显改变,曲张时间不同, 其表现也有差异,左右侧睾丸和附睾的VEGF免疫反应强弱也不同.
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输血相容性检测室内质控品制备技术优化与性能评价
目的 优化自制输血相客性检测室内全血质控品制备技术,检测其保存过程中综合性能指标的变化,确定合理的处理流程、保存期限并评价其应用价值.方法 选择多人份采集时问≤10 d的B型RhD阴性健康献血者标本.将其混合后离心留取上清血浆,再将混合浓缩红细胞分成2组,MAP组:使用MAP红细胞保养液洗涤2次;Saline组:使用生理盐水洗涤2次.将2组洗涤后的红细胞分别与MAP红细胞保存液、对应混合血浆按照1:2:3的体积比混合.选择商品化IgG抗-D试剂做抗-D效价测定,确定出现后1个2+凝集强度的稀释倍数,并按照此稀释倍数分别在2组质控品中填加相应体积的IgG抗-D.将2组混合悬液分装在硬质塑料试管中盖帽4℃保存,每天在室温放置1 h,分别在保存的0、35、42、49 d检测质控品标本红细胞与标准抗一B的凝集强度、IgM抗-A与反定A细胞的凝集强度、IgG抗-D与RhD阳性O型红细胞的凝集强度、上清液中Na+、K+、LDH、乳酸、FHb浓度、红细胞形态变化以及质控品中细菌繁殖情况.结果 保存过程中2组质控品红细胞B抗原、IgC抗D抗体反应活性均无明显变化(P>0.05),IgM抗A抗体反应活性虽出现波动(P<0.01=,但凝集强度变化均在1+范围内;2组质控品K+、乳酸浓度均随保存时间延长明显增高(P<0.01=,但保存35、42d时2组各指标之间无明显差异(P>0.05);2组质控品FHb浓度均随保存时间延长而增高,但相同保存时间2组之间比较无明显差异(P<0.01=.保存49 d时MAP组和SaLine组FHb浓度分别为(857.1±301.5)mg/L和(595.3±334.9)ms/L,与保存0d相比均明显升高(P<0.01=,MAP组部分质控品FHb浓度已经超过中度溶血标准(1 000 mg/L);2组质控品保存末期(≤42 d)红细胞都会出现一定程度的皱缩并形成棘突,但2组之间无明显差异;2组质控品保存过程中都未见细菌生长.结论 本室采用2种方法自制的全血质控品质量无明显差异,保存期都能达到42 d,且管间差异小、抗原抗体反应活性稳定,能够满足输血相容性检测室内质控的相关要求,适合在输血相容性检测实验室推广.
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纳米粒子在恶性肿瘤治疗中的研究进展
通常将金属与无机物粒径在1~100 nm范围或有机物和聚合物粒径小于1000 nm的颗粒称为纳米粒子.当粒子尺寸进入纳米量级后其表面原子与总原子数量之比急剧增大,从而表现出许多特有的性质,如比表面积大、表面活性中心多、表面反应活性高、强烈的吸附能力、较高的催化能力、低毒性及不易受细胞内外各种酶的降解等,这都为其开辟恶性肿瘤的新治疗方法奠定了基础.
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多发性硬化T细胞反应活性基线与β干扰素效应之间的关系
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药物重要脏器毒性及其早期预测方法的探讨
毒性是导致药物研发失败的主要原因之一.为了避免在药物开发晚期发现毒性导致的昂贵代价,尽早确定药物潜在的毒性问题非常重要.通过对药物产生的肝脏、心脏和肾脏毒性的机制进行分析,并对现有的毒性预测方法进行综述,提出可以从代谢产物反应活性、离子转运体、离子通道等3方面综合分析药物产生毒性的可能性,从而提高重要脏器严重毒性预测的准确性.
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烷化剂与细胞凋亡
烷化剂属于细胞毒药物,其烷化基团能与细胞中的重要生物活性基团如氨基、巯基、羟基等发生烷化作用,使之不能在细胞代谢中起作用,终造成细胞死亡.1942年,氮芥用于治疗淋巴肉瘤,标志着烷化剂作为化疗药物首次运用于临床.50多年来,烷化剂日益受重视,其简单的化学结构和高效的化学反应活性,使烷化剂成为研究细胞内与化学反应相关的生物效应的合适药物.许多化疗药物可诱导不同种类的肿瘤细胞系发生凋亡,这为化疗药物机制研究和化疗中的药物耐受性问题提供了途径.