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  • BGJ398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其机制研究

    作者:宋前燕;毛熙光

    目的 探讨成纤维细胞生长因子受体抑制剂BGJ398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及可能的作用机制.方法 培养宫颈癌HeLa细胞,分别用不同浓度的BGJ398(0、10、20、30、40μmol/L)和顺铂(0、10、20、30、40、50μmol/L)处理24、48、72h.采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,根据结果选择12.5μmol/L作为实验药物浓度,将宫颈癌HeLa细胞分为对照组(无BGJ398和顺铂的培养基)、BGJ398组(含有12.5μmol/L BGJ398的培养基)、顺铂组(含有12.5μmol/L顺铂的培养基)、联合组(同时含有12.5μmol/L BGJ398和12.5μmol/L顺铂的培养基),进行后续实验,再次用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力,采用Western blotting法检测细胞增殖、凋亡、侵袭相关蛋白的表达以及PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路蛋白的表达.结果 BGJ398组、顺铂组、联合组的细胞增殖抑制率高于对照组,联合组的细胞增殖抑制率高于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.05).BGJ398组、顺铂组、联合组的细胞凋亡率高于对照组,联合组的细胞凋亡率高于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.01).BGJ398组、顺铂组、联合组穿膜细胞个数低于对照组,联合组的穿膜细胞数低于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.01).BGJ398组、顺铂组、联合组细胞的PCNA、MMP-2表达量低于对照组,Bax、E-cadeherin表达量高于对照组,差异均有显著性(P<0.01).联合组PCNA、MMP-2表达量低于BGJ398组、顺铂组,Bax、E-cadeherin表达量高于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.01).BGJ398组p-ERK1/2、p-AKT表达量低于对照组(P<0.01),ERK1/2、AKT表达量与对照组比较差异无显著性(P>0.05).结论 BGJ398与顺铂单独或联合作用均能抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制p-AKT、p-ERK1/2、PCNA、MMP-2蛋白表达及促进Bax、E-cadeherin蛋白表达有关.

  • 成纤维细胞生长因子受体抑制剂BGJ398对胶质瘤生物学特性的影响

    作者:李潇;王昀;陈韬亮;陈建生;黄敏;池雅杰;杨远韬;柯以铨

    目的 探究成纤维细胞生长因子受体(FGFR)抑制剂BGJ398对胶质瘤细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用.方法 (1)将体外常规培养的U87和U251细胞分为BGJ398组和对照组,分别加入含10μmol/L BGJ398的完全培养基和单纯的完全培养基处理,用CCK-8和克隆形成实验检测2组细胞的增殖能力;处理2 d后用划痕实验、Transwell迁移实验分别检测2组U251细胞、U87细胞的迁移能力;Transwell侵袭实验检测2组细胞的侵袭能力,Western blotting检测2组细胞磷酸化(p)FGFR和Vimentin蛋白的表达;(2)将200μL U87细胞(1×107个)注入8只BALB/c裸鼠腹部两侧皮下并将裸鼠按随机数字表法分为BGJ398组(n=4)和对照组(n=4).BGJ398组裸鼠每天口服BGJ398生理盐水溶液(20 mg/kg),对照组裸鼠口服等量生理盐水.连续服用15 d后比较2组小鼠移植瘤的质量;免疫组化染色检测移植瘤组织Vimentin的表达.结果 (1)培养3、4、5 d时BGJ398组U87细胞的吸光度值低于对照组;培养2、3、4、5 d时BGJ398组U251细胞的吸光度值低于对照组;培养10 d后BGJ398组U87细胞和U251细胞形成克隆的数量明显少于对照组;划痕后48 h BGJ398组U251细胞的迁移距离比对照组明显减少;培养24 h后BGJ398组迁移的U87细胞数较对照组明显减少;培养48 h后BGJ398组穿过孔膜的U87细胞和U251细胞较对照组明显减少;BGJ398组U87细胞和U251细胞中pFGFR和Vimentin蛋白的含量明显少于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)BGJ398组裸鼠皮下肿瘤的质量[(0.186±0.064)g]较对照组[(0.450±0.106)g]明显减轻;BGJ398组裸鼠皮下移植瘤Vimentin的表达(2.503±0.359)较对照组(4.125±1.155)明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 体内外实验均证实BGJ398可以抑制胶质瘤细胞的生长、迁移和侵袭,提示FGFR是治疗胶质瘤的有效靶点之一.

  • 靶向成纤维细胞生长因子受体抑制胶质瘤中血管生成拟态的生成

    作者:李潇;王昀;陈韬亮;黄敏;柯以铨

    目的:探索成纤维细胞生长因子受体(FGFR)抑制剂BGJ398对胶质瘤细胞形成血管生成拟态(VM)的影响.方法:运用Western blot检测BGJ398处理后人胶质瘤细胞株U87MG和U251MG中磷酸化成纤维细胞生长因子受体(pFGFR)的数量,以及基质金属蛋白酶2和14(MMP2和MMP14)的表达量;在体外应用小管形成实验观察U87MG细胞形成小管的能力;用CD34/PAS免疫组化双染法计数皮下胶质瘤模型中VM的数量;用免疫组织化学染色检测皮下移植瘤中MMP2和MMP14的表达量.结果:Western blot显示BGJ398实验组中pFGFR的数量较对照组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot与免疫组化染色结果显示实验组MMP2和MMP14的表达明显下调;小管形成实验中实验组中胶质瘤细胞小管周长和交点数较对照组明显减少;皮下瘤模型中实验组中VM的数量(13.85±3.96)较对照组(26.40±5.06)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:体内外实验证实BGJ398通过抑制FGFR的激活可以抑制胶质瘤细胞形成VM,提示FGFR信号通路具有调节VM形成的作用.

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