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基于ATP7A探讨粉防己碱对乳腺癌细胞顺铂耐药的逆转作用及机制
目的 基于ATP7A探讨粉防己碱对乳腺癌细胞顺铂耐药的逆转作用及机制.方法 建立两种人乳腺癌顺铂耐药细胞株及ATP7A高表达细胞.检测粉防己碱对顺铂耐药细胞的逆转作用,高效液相色谱测定胞内顺铂含量,检测ATP7A蛋白表达.结果 耐药乳腺癌细胞的顺铂敏感性显著降低(P<0.05),ATP7A表达升高(P<0.05),胞内顺铂含量明显降低(P<0.05);ATP7A高表达细胞较正常乳腺癌细胞顺铂敏感性下降(P<0.05),胞内顺铂含量降低(P<0.05).而粉防己碱对细胞耐药性具有明显的逆转作用,较耐药细胞及转染细胞可升高胞中顺铂含量(P<0.05),降低ATP7A表达(P<0.05).结论 粉防己碱对人乳腺癌顺铂耐药细胞及ATP高表达细胞的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与抑制ATP7A表达相关.
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ATP7A在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨晚期非小细胞肺癌 (NSCLC) 组织中P型铜转运ATP酶 (ATP7A) 的表达与患者临床病理特征及预后的关系.方法:采用免疫组织化学法检测89例未接受手术及放疗而只接受含顺铂方案一线化疗的晚期非小细胞肺癌组织中ATP7A的表达情况,并分析ATP7A表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果:ATP7A的免疫阳性反应主要定位于非小细胞肺癌细胞的细胞质,ATP7A的标本阳性率为41.6% (37/89),而在间质及正常肺组织均未见表达; ATP7A表达状态与含顺铂方案的化疗反应及组织分化分级呈正相关 (P=0.001,P=0.039),而与年龄(P=0.469)、性别(P=0.442)、分期(P=0.436)、PS(P=0.361)、组织学分型(P=0.670) 及CEA水平 (P=0.661) 无关; Kaplan-Meier法生存分析显示ATP7A阳性表达的患者总生存 (OS) 低于ATP7A阴性表达患者 (P=0.021); 单因素分析显示ATP7A、分期、PS、CEA水平和组织分化分级和OS呈正相关 (P值=0.021、P=0.019、P=0.004、P=0.022、P=0.010); 多因素分析显示ATP7A、分期、CEA水平和组织分化分级是接受含铂方案化疗的晚期非小细胞肺癌患者OS的独立预后因子 (P=0.045、P=0.001、P=0.003、P=0.009).结论:ATP7A在大部分晚期非小细胞肺癌组织中均有表达,ATP7A表达水平与晚期非小细胞肺癌的组织分化分级、含铂方案化疗疗效及患者生存期密切相关,提示ATP7A与非小细胞肺癌的发生发展有关,可以作为含铂方案化疗的疗效预测因子及生存期的预后因子.
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Menkes 病临床及实验室特点与基因诊断
目的 探讨Menkes病的临床及实验室特点与基因诊断方法.方法 对2例确诊为Menkes病患儿的临床和实验室特点及基因诊断方法进行回顾性分析.结果 1.临床特点:2例患儿均为男童,出生3～4个月起病,毛发卷曲、肤色白、脸颊饱满、皮肤松弛,有腹股沟疝、血管异常,有癫痫、神经发育迟滞.2.实验室特点:2例患儿血浆铜蓝蛋白分别为＜ 20 mg/L及47 mg/L,均明显降低.例1头颅磁共振血管造影提示颅内血管蛇形迂曲,例2头颅磁共振成像在0.5年内由无明显异常迅速进展为全脑萎缩.3.基因诊断:例1基因二代测序ATP7A基因第14外显子核苷酸第2 110位碱基存在c.2110 C ＞T的无义突变,该突变的致病性目前国内外尚未见报道.例2基因二代测序未见致病性突变,多重连接探针扩增技术检测ATP7A基因第8-12号外显子大片段缺失,该突变为已知的Menkes病致病性突变.2例患儿母亲均为表型正常的杂合携带者.结论 Menkes病是一种由于ATP7A基因突变、铜代谢紊乱所致的多系统受累的遗传性神经变性病,呈X-连锁隐性遗传.以特征性卷发、结缔组织异常及进行性加重的神经系统退行性变为主要表现.依据临床特征、血生化检查及影像学特点可行临床诊断,基因二代测序及多重连接探针扩增技术可完成基因诊断.
关键词： Menkes病 铜蓝蛋白 ATP7A 多重连接探针扩增技术 -
ATP7A对结肠癌细胞耐奥沙利铂的机制初探
目的 探讨铜转运蛋白ATP7A对人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP耐奥沙利铂的作用机制.方法 选用RNA沉默(siRNA)ATP7A稳转结肠癌耐药细胞siATP7A-HCT116/L-OHP,同时设立空转染组negATP7A-HCT116/L-OHP,以化疗药奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)作为用药组,分别采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC/PI双染法及蛋白免疫印迹法检测ATP7A蛋白沉默前后对HCT116/L-OHP细胞抑制率、凋亡率及ATP7A蛋白表达的影响.结果 (1)随着L-OHP浓度的增加对细胞抑制率增强,IC50(μg/mL)由85.81±2.76降至41.30±3.31,逆转耐药2.07倍.(2)negATP7A-HCT116/L-OHP和siATP7A-HCT116/L-OHP细胞空白组48 h凋亡率分别为(1.4±0.1)％和(4.47±0.15)％,L-OHP组细胞凋亡率分别为(4.97±0.06)％和(25.87±0.21)％.与negATP7A-HCT116/L-OHP细胞相比,同一组别siATP7A-HCT116/L-OHP细胞凋亡率均显著升高(P<0.001).(3)与negATP7A-HCT116/L-OHP细胞L-OHP组相比,siATP7A-HCT116/L-OHP细胞L-OHP组内除CTR1蛋白上调外,ATP7A、ATP7B、ATOX1蛋白均呈不同程度的下调(P<0.001).结论 ATP7A降低结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP对L-OHP的敏感性及细胞凋亡,沉默后能上调铜转运相关蛋白CTR1的表达、下调ATP7B、ATOX1表达,可能是人结肠癌细胞耐奥沙利铂的重要机制之一.
