首页 > 文献资料
-
ISL-1诱导脂肪干细胞向起搏样细胞分化
目的 探讨过表达胰岛素基因增强子结合蛋白1(insulin gene enhancer binding protein 1,ISL-1)的慢病毒在体外转染脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),能否诱导ADSCs向起搏样细胞分化.方法 取第3～5代ADSCs,随机分成Bank、mCherry和胰岛素基因增强子结合蛋白1(insulin gene enhancer binding protein 1,ISL-1)3组,按分组分别转染病毒,经荧光强度和流式分析确定适感染复数,与乳鼠心室肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRVMs)共培养7天后迸行实时荧光定量聚合酶式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹、免疫荧光检测分析,期间观察细胞形态和搏动频率变化,并用膜片钳技术记录细胞内电流活动.结果 分离贴壁后的ADSCs呈长梭形,慢病毒转染ADSCs的适感染复数为50.ISL-1组ADSCs形态呈多样化,窦房结特异性基因HCN4、Cx45和Tbx3的mRNA表达水平上调,而工作心肌特异性基因Nkx2.5下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).ISL-1组大多数细胞可检测到HCN4表达并且可记录到超极化内向电流.结论 经ISL-1基因修饰的ADSCs通过体外心肌微环境诱导,产生了一定的高表达窦房结标志性基因并具有细胞内典型超极化电活动的起搏样细胞.
-
ISL-1和Tbx18联合转染对乳鼠心室肌细胞重编程的作用研究
目的:探讨ISL-1和 T bx18联合转染对乳鼠心室肌细胞重编程的作用,及能否在体外构建生物起搏点. 方法:将乳鼠心室肌细胞随机分成空白对照组、GFP组、ISL-1组、T bx18组、ISL-1+ T bx18组,分别转染相应病毒,培养5～7 d后 qRT-PCR 、Western blot和免疫荧光检测超极化激活环核苷酸门控离子通道蛋白亚型4(HCN4)的表达情况,观察细胞形态和搏动频率变化,并用膜片钳技术记录细胞内电流活动. 结果:ISL-1组、Tbx18组和ISL-1+ Tbx18组的细胞搏动频率和 HCN4的mRNA 和蛋白表达水平较空白对照组和 GFP组明显升高,其中ISL-1+ Tbx18组的细胞搏动频率和HCN4的mRNA和蛋白表达水平明显高于ISL-1组和Tbx18组(P均＜0 .05).通过免疫荧光技术,ISL-1组和T bx18组可检测到HCN4不连续表达,ISL-1+ T bx18组 HCN4连续高表达.通过膜片钳技术,ISL-1组和T bx18组均仅有少数细胞可记录到起搏电流活动,而ISL-1+ T bx18组大多数细胞可记录到起搏电流活动. 结论:ISL-1和 T bx18联合表达能提高乳鼠心室肌细胞重编程为起搏样细胞的效率.
-
转录因子Brn3 a及胰岛因子1在三个时期中三叉神经节的表达情况
目的：探讨转录因子Brn3a及胰岛因子1(Islet1,Isl-1)转录因子在生长发育的三个时期中三叉神经节中的表达情况。方法取发育不同时期的小鼠胚胎头部第13.5天、15.5天、17.5天,各个时期为相互对照。用免疫荧光的方法标记相关蛋白,观察比较不同时期的Brn3a及Isl-1在三叉神经节的表达情况。结果三个时期中Brn3a及Isl-1在三叉神经节均有共表达,在生长发育早期Isl-1没有明显增殖,在生长发育晚期Brn3a没有明显凋亡。结论在发育后期Brn3a及Isl-1标记的神经元,依旧共表达于神经元中,且随生长发育,标记Brn3a及Isl-1的神经元逐渐减少。Brn3a及Isl-1标记的神经元,在生长发育过程中分化为亚型神经元,对上下游转录因子起调控作用。
-
胰岛因子1在牙胚不同发育时期对上颌牙髓神经投射表达的影响
目的：探讨胰岛因子1（Islet1，Isl－1）在上颌牙牙髓神经生长发育的3个不同时期中投射表达的影响。方法：用Wnt1cre／＋雄鼠与Isl1f／f雌鼠配出Wnt1cre／＋；Isl1－／－基因敲除的小鼠，做基因鉴定（PCR）。取发育不同时期第13．5 d、14．5 d、15．5 d小鼠胚胎头部（实验组），同窝非基因敲除小鼠为对照，冰冻切片。用免疫荧光方法标记牙髓神经，比较第13．5 d、14．5 d、15．5 d小鼠上颌牙胚在基因敲除小鼠中与同窝对照小鼠中神经分布情况。结果：PCR结果鉴定为基因敲除小鼠以及同窝对照小鼠；分别在第13．5 d、14．5 d、15．5 d观察基因敲除小鼠与同窝对照小鼠牙髓神经，且各个时期的实验组中神经分布明显减少，对照组中神经分布较多。结论：在牙髓神经的生长发育过程中，Isl－1这一转录因子对牙髓神经的投射表达产生影响，可能是Isl－1调控牙胚周围的转录因子，并影响牙髓神经的投射。
