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AB SCIEX快速检测乳制品中双氰胺的解决方案
近日,媒体曝光新西兰农场主在牧场使用双氰胺(Dicyandiamide,DCD),奶牛吃到受污染牧草,导致奶制品中含有双氰胺.新西兰牛奶产品中约有80％销往海外,而目前尚无双氰胺在食品中检测的相关国际和国家标准,引发世界消费者的广泛关注和担忧.经研究,双氰胺可利用LC/MS/MS测定分析,ABSCIEX公司第一时间为广大分析工作者提供了奶制品中DCD快速、准确、灵敏、高效的检测方法.除此之外,还为用户提供三聚氰胺、三聚氰酸等在内的多种类似物质的分析检测方法,为客户提供全套的解决方案.实验内容1.仪器设备和试剂AB SCIEX公司API 4000系统配Ultra100液相,艾杰尔公司Venusil(R) HILIC (5μm,100A,2.1mm×150mm)色谱柱.双氰胺标准物质(纯品)、乙腈(色谱纯)、醋酸铵(色谱纯)、甲酸(色谱纯).
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三聚氰胺与三聚氰酸联合作用致大鼠的肾损伤
三聚氰胺和三聚氰酸是重要的有机化工中间体,三聚氰胺主要用于生产三聚氰胺.甲醛树脂,广泛用于涂料、塑料等工业生产中[1].目前研究认为,三聚氰胺在机体内属于惰性代谢,对环境和人的潜在危险性较小[2-3].2007年"宠物事件"后的研究认为三聚氰胺和三聚氰酸的联合作用是宠物猫发生肾衰的原因,本文作者之前的三聚氰胺和三聚氰酸致实验大鼠肾损伤的回顾性研究亦证实肾组织中含有三聚氰胺和三聚氰酸[4].目前对两者的联合毒性研究资料甚少,本研究旨在探讨三聚氰胺和三聚氰酸毒作用靶器官的病变特点及病变发生机制.
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胃酸分解三聚氰胺导致肾损伤及其自行修复的研究
目的 分析动物三聚氰胺染毒后三聚氰酸的来源及所致肾损伤的修复过程.方法 800 ng/ml的三聚氰胺溶液调节pH值分别为3、4、5和6h后放置于37℃的恒温水域锅内酸化以模拟胃部条件,分别设定反应时间为1、2和3h后,70℃氮气吹干后用气相色谱-质谱法检测反应终液中所含三聚氰胺和三聚氰酸浓度.78只Wistar雄性大鼠随机分成对照组与实验组,实验组60只,对照组18只.实验组动物染毒剂量为25 mg/kg,掺入饲料染毒5周.分别于染毒2周、3周和5周,及染毒停止后2周、6周和12周取实验组动物10只和对照组3只进行肾功能检测及肾脏组织病理学检查.结果 三聚氰胺在体外模拟胃酸条件下可逐步分解成三聚氰酸,且分解量与pH值和反应时间呈线性关系.大鼠经三聚氰胺处理5周后BUN和CRE明显高于对照组动物,同时病理学也有明显变化.但在停止染毒过后不经任何干预处理,动物肾损伤可逐渐自行恢复.结论 体外实验证明三聚氰胺至三聚氰酸在胃酸作用下的分解过程可以是纯化学反应;体内实验表明大鼠停止三聚氰胺染毒后,肾损伤可逐渐自行修复.
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三聚氰胺的毒理学研究进展
三聚氰胺(Melamine)又名蜜胺,氰尿三酰胺,三聚氰酰胺,由德国化学家Justus von Liebig于1834年首次合成,它是一种用途广泛的基本有机化工中间产品,目前主要的用途是作为生产三聚氰胺/甲醛树脂的原料,普遍应用于建材、灭火剂、纺织、皮革和造纸等行业,也常作为生产塑料食品包装材料的单体和助剂,还可以作为合成药物的中间体或药物载体的原料.
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HPLC-MS/MS同时检测大鼠体内三聚氰胺和三聚氰酸含量
目的 建立HPLC-MS/MS同时检测大鼠血浆和组织中三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法.方法 以同位素标记的三聚氰胺和三聚氰酸作为内标物,大鼠血浆和组织经二氯甲烷-乙腈前处理后,经色谱柱分离,串联离子阱质谱采用ESI源按运行时间段切换正、负离子模式进行测定.结果 在0.3～75μg/ml范围内,三聚氰酸和三聚氰胺具有良好的线性(r≥0.998).在0.9、5.0、50 μg/ml的给药大鼠的血浆样本中,三聚氯酸和三聚氰胺的回收率分别为97.4％～99.4％、96.8％～98.9％,两者的变异系数为2.43％～6.35％(日内)、1.70％～4.12％(日间)和0.30％～9.17％(日内)、0.75％～3.39％(日间);在0.9、5.0、50 μg/ml的给药大鼠肝组织样本中,三聚氰酸和三聚氰胺的回收率分别为90.8％～104.6％、91.7％～106.0％,对应的变异系数为3.70％～5.14％(日内)、2.84％～4.50％(日间)和1.31％～2.21％(日内)、1.12％～3.36％(日间).结论 该方法样品前处理简单,基质干扰小,分析效率高,具有良好的精密度、准确度和特异性,是进行三聚氰酸、三聚氰胺在动物体内的组织代谢和毒性研究的理想分析方法.
关键词： 三聚氰酸 三聚氰胺 血浆 组织 HPLC-MS/MS -
三聚氰酸毒理学研究进展
三聚氰酸是三聚氰胺的同类物,它与三聚氰胺在一定条件下形成结晶,在人和动物体内这种结晶易于对膀胱和肾脏造成损伤.本文对三聚氰酸的毒理学安全性资料(包括代谢、急性毒性、遗传毒性、亚慢性毒性、慢性毒性和致癌性)、与三聚氰胺的联合作用以及人群可能暴露水平进行综述.
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固相萃取-亲水作用液相色谱-串联质谱法同时测定水和尿中三聚氰胺及三聚氰酸
目的 建立固相萃取结合亲水作用液相色谱-串联质谱联用法测定各种水体和尿中三聚氰胺及三聚氰酸的方法,并对采自全国的501份水样和216份尿样中三聚氰胺和三聚氰酸的含量进行调查.方法 取100 ml水样或10 ml尿样,用浓盐酸调节pH至3.0,加入15N3-三聚氰胺和15N3-13C3-三聚氰酸混合内标溶液,再于水样中加入100 ml乙腈(尿样加10 ml乙腈),混匀后用MCT固相萃取柱净化,用3 ml甲醇洗脱一次,然后采用2.5 ml含体积分数为5％氨水的甲醇溶液洗脱两次,收集流出液,于40℃下用氮气吹干,加入含体积分数为90％乙腈的2 mmol/L乙酸铵水溶液,漩涡振荡,充分溶解,用0.22 μm有机滤膜过滤,滤液采用液相色谱-串联四极杆质谱联用仪测定,采用内标法定量,并对方法的检测限、精密度和准确度进行评价.并用此法检测了501份水祥和216份尿样中三聚氰胺和三聚氰酸的含量.结果 分别采用15N3-三聚氰胺和15N3-13C3-三聚氰酸作为内标物,测得三聚氰胺和三聚氰酸在2.0～1000.0 g/L范围内线性关系良好(r值分别为0.9998和0.9997).水中三聚氰胺、三聚氰酸方法检出限分别为0.4、0.3 ng/L,尿中三聚氰胺、三聚氰酸方法检出限分别为4.0、3.0 ng/L.水、尿样在3个添加水平范围内的平均回收率为95.3％ ～ 100.1％,RSD＜4.02％.在501份水样中,19.9％(100/501)水样中检出三聚氰胺,5.2％(26/501)水样中检出三聚氰酸,含量在0.03～5.00 g/L之间,24.5％(53/216)的尿样中检出三聚氰胺或三聚氰酸,含量在0.01～1.00 g/L之间.结论 建立的MCT固相萃取结合亲水作用液相色谱-电喷雾串联质谱联用测定法可以满足各种水体和尿液中三聚氰胺和三聚氰酸的检测要求.同时,这两种物质在我国环境水体和人群中存在较为广泛的污染.
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乳品中三聚氰胺和三聚氰酸的气相色谱-质谱-质谱测定方法
2008年我国发生了三聚氰胺污染乳制品的突发公共卫生事件,造成了严重的婴幼儿肾结石,使得我国面临食品安全的重大危机[1-2].在此事件的调查过程中,迫切需要了解污染奶制品中三聚氰胺和三聚氰酸的含量,从而为判断结石的形成机制提供可靠的依据,这就需要准确可靠的三聚氰胺和三聚氰酸测定方法.
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三聚氰胺与三聚氰酸联合灌胃致大鼠泌尿系统损害研究
目的 研究三聚氰胺及三聚氰酸联合应用导致泌尿系统损害的机制.方法 将24只SD大鼠随机分成A组(对照组)和B组(干预组),每组12只,A组大鼠每只每天以蒸馏水2ml灌胃一次,B组每天以30mg/kg三聚氰胺和30mg/kg三聚氰酸联合灌胃一次.用代谢笼收集前3d的24h尿液,进行24h尿量、pH值和24h尿酸排泄量检测及尿沉渣涂片检查;分别于第4、31天灌胃前采集每组6只大鼠的血液标本检测血肌酐、尿素氮、尿酸;取双侧肾脏用外科显微镜观察后,制作快速冰冻切片及石蜡切片(HE染色)观察肾脏病理改变及结石晶体形成情况.肾脏冰冻组织切成5μm薄片后,用红外显微光谱仪分析晶体成分.结果 A组大鼠血、尿生化及肾脏病理检查均无明显异常.B组大鼠出现少尿、尿pH值偏低、尿酸排泄量减少(P＜0.05),血肌酐、血尿素氮、血尿酸升高(P＜0.05);尿沉渣涂片发现特异性晶体;肾脏体积变大、结构模糊,肾组织中有许多淡黄色颗粒沉积;病理切片发现许多淡黄色、半透明同心圆形晶体,主要集聚于肾小管中,造成肾小管明显扩张、上皮受损等病理改变,经红外显微光谱鉴定,为三聚氰胺氰尿酸盐.结论 三聚氰胺和三聚氰酸联合灌胃大鼠的肾脏内会形成一种不溶于水的三聚氰胺氰尿酸盐晶体,堵塞肾小管造成肾脏损害甚至急性肾功能衰竭,并可能与尿酸等成分一起诱发泌尿系结石.
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三聚氰胺等物质给予幼年恒河猴的毒性试验
目的 观察三聚氰胺及其同系物给予动物后,导致肾脏损伤、形成结石的过程,及肾脏损伤的恢复过程.方法 选择6月龄恒河猴6只,雌雄各半,随机分为3组,2只/组,分别为T1(140 mg/kg三聚氰胺和14 mg/kg三聚氰酸),T2(140 mg/kg三聚氰胺和50mg/kg腺嘌呤)和T3组(140mg/kg三聚氰胺).连续70 d口服受试物,观察动物的一般状态,分别于不同时间点进行血液学、血生化、尿常规和肾脏B超的检测;并连续观察18个月,观察动物的生长发育情况.结果 1.各剂量组动物在给予受试物8周后所有动物肾脏中均出现多个结石;停止给予受试物后,所有动物结石数量和大小均呈下降趋势,至停止给予受试物16个月后,全部动物肾脏均未检测出结石.2.各剂量组,血清中β2微球蛋白(β2-MG)和尿酸(UA)等指标随着给药时间的延长而有所增高,但在正常范围内.在动物的恢复期,此两项指标的数值明显下降.结论 1、单纯三聚氰胺(相当于人体使用量48 mg/kg·w·d)不能造成恒河猴肾脏功能的明显损害,可形成肾结石.2.在三聚氰酸或腺嘌呤存在的情况下,三聚氰胺可以造成恒河猴肾功能指标β2-MG和UA在正常范围内升高,并可在肾脏形成结石;.3.经过16个月的恢复所有动物结石无法检出,其中三聚氰胺组动物恢复快.
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三聚氰胺单独及与三聚氰酸联合染毒致大鼠的肾毒性
目的 探讨三聚氰胺单独及与三聚氰酸联合染毒致大鼠的肾毒性.方法 将初断乳清洁级雄性Wistar大鼠36只按体重随机分为3组,分别为三聚氰胺(25 mg/kg)+三聚氰酸(25 mg/kg)染毒组、三聚氰胺(25 mg/kg)染毒组和对照组,每组12只.采用饲料掺入法进行染毒,连续染毒4周.染毒后,处死动物,取血清测定肌酐、尿素氮、甘油三酯,取肾脏称重并计算脏器系数,观察肾脏的形态学和组织病理学变化.采用X射线衍射仪对肾脏中的晶体进行定性,采用液相色谱.质谱联用法测定三聚氰胺和三聚氰酸的含量.结果 两染毒组大鼠均出现食欲减低,多尿,少动,体重下降(P＜0.01),肾脏系数升高(P＜0.01).与对照组比较,三聚氰胺染毒组以及三聚氰胺+三聚氰酸染毒组血清中尿素氮、肌酐和甘油三酯含量均升高,差异有统计学意义(P＜0.01).肉眼观察可见,三聚氰胺+三聚氰酸染毒组和三聚氰胺染毒组肾脏肿胀明显,体积增大,呈土黄色沙石样外观;组织病理学检查可见,肾小管中存在大量晶体,肾小管上皮受损.X射线衍射法确认肾脏中含有三聚氰胺-三聚氰酸晶体.三聚氰胺+三聚氰酸染毒组和三聚氰胺染毒组肾组织中三聚氰胺、三聚氰酸含量间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 单独给予一定量的三聚氰胺及同时给予三聚氰酸均可在大鼠肾脏形成晶体,造成不同程度的肾小管继发性损伤,并终导致肾功能衰竭,三聚氰胺+三聚氰酸染毒组肾功能和组织病理学改变更为严重.
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三聚氰胺与三聚氰酸对兔肾损害的超声表现及病理所见的对照研究
2008年的三聚氰胺奶粉事件给许多婴幼儿带来了身体损害.虽然通过大量超声筛查判断出三聚氰胺与婴幼儿肾结石和肾衰竭有一定的关系,但仍然缺乏确凿的证据[1].通过比较中国大陆和港台的各地学者所做筛查的结果发现,三聚氰胺所致的结石发病率有很大差异[2],所以有必要进行动物实验加以证实.
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三聚氰胺及三聚氰酸致实验大鼠肾损伤的回顾性研究
目的 确认实验用大白鼠肾损伤的致病因子为三聚氰胺、三聚氰酸,探讨三聚氰胺、三聚氰酸的肾毒性.方法 清洁级Wistar大白鼠,在清洁级动物室喂饲含致病因子的饲料,30天后处死动物做血液生化检测、脏器系数计算,取肾组织常规制片,进行病理组织学检查.取包埋于石蜡块中的肾组织用液相色谱-质谱联用法分析肾组织中是否含有三聚氰胺、三聚氰酸.结果大鼠喂饲含致病因子的饲料后,大鼠肾内形成结晶体,并引起严重肾功能损伤,甚至衰竭;每克肾组织中含有三聚氰胺15微克、三聚氰酸60微克.结论 肾脏为三聚氰胺、三聚氰酸毒作用的主要靶器官,大鼠经口喂饲一定量三聚氰胺、三聚氰酸,可致严重肾损伤.
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三聚氰胺致肾损伤机制研究进展
对三聚氰胺理化性质、肾脏毒性表征进行了描述,并总结了关于三聚氰胺致肾损伤机制的不同研究进展,其中一种观点认为肾损伤是三聚氰胺、三聚氰酸及三聚氰胺-三聚氰酸结晶体共同作用的结果;而另一种观点认为肾损伤与动物肠道细菌,特别是克雷伯菌属细菌的代谢密切相关.
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三聚氰胺及其同系物三聚氰酸的生物学效应和毒理学研究进展
三聚氰胺因为近的奶粉事件成为食品公共安全的焦点,所以针对三聚氰胺及其同系物三聚氰酸的生物学效应和毒理学研究作一综述,主要从理化性质、代谢、毒理机制,以及检测等方面进行总结.三聚氰胺和三聚氰酸本身的急性毒性作用很低,体内为惰性代谢,大部分以原型从尿液排出,大剂量应用时主要对肾脏产生毒性,产生结石,急性肾衰和结石相关的膀胱肿瘤,但同时可能对心脏等肾脏以外的器官产生毒性作用.它们的毒性具有对动物物种的选择性,相对于小鼠、猫和大鼠的肾脏毒性反应更大,而且在雄性动物更加明显.在检测上,HPLC/MS/MS正在成为主要的检测手段.尽管对这一类化合物的生物学效应和毒理学特性已有一定的理解,但仍然存在一些问题,比如,为何肾脏成为结晶产生的主要器官,对肾脏以外器官/系统的作用如何,体内同时存在的三聚氰胺及其同系物可能的累加和协同作用机制等等,亟待进一步从生理、病理、生化实验方面作出解答,为未来生物毒理研究和研制出解决措施提供科学依据.
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液相色谱-电喷雾串联质谱法测定人尿中三聚氰胺和三聚氰酸
目的 建立人尿中三聚氰胺和三聚氰酸的亲水作用液相色谱-电喷雾串联质谱法,对门诊病人尿液中三聚氰胺和三聚氰酸进行调查.方法 样品加入同位素内标后采用亲水性键合硅胶和阳离子交换树脂复合填料固相萃取小柱(MCT)浓缩净化,甲醇和5％氨水甲醇溶液两次洗脱,收集流出液,用氮气吹干,用1ml乙腈+2 mmol/L乙酸铵(90+10)充分溶解后,亲水作用色谱柱分离,采用电喷雾串联四极杆质谱进行检测.结果 在2.0 μg/L～1000.0 μg/L时,三聚氰胺和三聚氰酸线性关系良好(相关系数r分别为0.9998和0.9997).在50.0 ng/L、200.0 ng/L和5000 ng/L 3个添加水平范围内的平均回收率为97.8％ ～ 100.1％,相对标准偏差小于4.02％,方法检出限为三聚氰胺4.0 ng/L、三聚氰酸3.0 ng/L.结论 采用建立的方法测定了尿中三聚氰胺和三聚氰酸,结果表明,该法快速、准确、灵敏,优于现有分析方法.
关键词： 亲水作用色谱 高效液相色谱-电喷雾串联质谱 三聚氰胺 三聚氰酸 尿 -
液相色谱-串联质谱法测定奶粉和液态奶中三聚氰酸
目的:建立奶粉和液态奶中三聚氰酸的液相色谱-串联质谱检测方法( LC-MS/MS).方法:样品加水混匀后加乙腈超声波提取,经固相萃取柱净化,采用亲水作用色谱柱分离,在电喷雾负电离多反应监测模式下进行定性和内标法定量.结果:本法线性范围为0μg/kg～500 μg/kg,定量限为200 μg/kg,3个添加水平的平均回收率在92.1％～104.3％,精密度(RSD％)为3.22％ ～7.61％.结论:该法简便、快速、准确,适于奶粉和液态奶中三聚氰酸的检测.
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LC-APCI-MS/MS法同时测定尿液中的三聚氰胺和三聚氰酸
目的:建立尿液中三聚氰胺和三聚氰酸的液相色谱-大气压化学离子化-串联质谱(LC-APCI-MS/MS)同时测定法.方法:尿液样晶以三聚氰胺-15N3 和三聚氰酸-13C3为内标,加乙腈稀释、离心、Waters XBridgeTM Amide色谱柱分离后,采用APCI源、正负离子切换、多反应监测模式(MRM)进行检测.结果:三聚氰胺和三聚氰酸均在20 rig/ml～1000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数均人于0.995,批内、批间精密度均小于10%,提取同收率和准确度均在89.9%～111.2%之间.结论:该方法前处理简便,检测灵敏、专属,可用于尿液中三聚氰胺和三聚氰酸的快速检测.
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反相高效液相色谱法测定乳与乳制品中三聚氰酸
目的:建立乳与乳制品中三聚氰酸反相高效液相色谱测定方法.方法:乳与乳制品中三聚氰酸经透析,采用ZORBAX Eclipse XDB-C8色谱柱分离,以甲醇-四丁基氯化铵缓冲液作流动相,高效液相色谱二极管阵列检测器(PAD)测定.结果:方法线性范围1～100μg/ml,相关系数r=0.9999,加标回收率为79.4%～99.1%,RSD为6.7%,检出限:配方奶粉5 mg/kg,液态奶制品2 mg/kg.结论:该方法选择性好、净化效果好、操作简便,能满足实际样品检测的要求.
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三氯异氰尿酸杀菌试验观察
三氯异氰尿酸(简称TCCA)是一类高效低毒的消毒剂,为异三聚氰酸的氰化产物,有效氯含量为85%[1].为了解TCCA的杀菌作用,作者在常温下,采用浸泡法和薰蒸法,对大肠杆菌、白色葡萄球菌、枯草杆菌芽胞进行了杀菌效果观察,现将结果报告如下.
