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  • 康柏西普非还原SDS-PAGE纯度方法研究

    作者:于传飞;张峰;刘爱兵;张亚飞;罗祖秀;陈粟;柯潇;王兰

    建立非还原SDS-PAGE纯度检测方法,以研究康柏西普降解物或片段的含量.本文针对凝胶的筛选、凝胶成像系统的比较、主带灰度值线性范围和脱色条件开展研究,确定了康柏西普非还原SDS-PAGE纯度测定方法的实验条件.结果显示:4%~15%梯度浓度胶分离效果好,带型清晰平整;高分辨率的凝胶成像系统能使主带、杂带响应峰基线分离;当上样量≤3 μg时,主带灰度值线性好,因此,以3 μg作为非还原SDS-PAGE纯度方法的上样量;脱色条件确定为60 min更换一次脱色液,每次100 mL,脱色时间不超过3h.所建立的非还原SDS-PAGE纯度测定方法能够更客观测定康柏西普的纯度,该方法经过验证后,以补充材料的形式提交美国FDA,为康柏西普在美国直接进入临床Ⅲ期研究奠定了质量基础.

  • 重组抗人表皮生长因子受体(EGFR)嵌合单克隆抗体CH225非还原电泳纯度分析

    作者:付换成;卢秋丽;刘浩;张文秋;赵云

    目的:分析CH225在非还原电泳时抗体条带主条带以外在高分子量和低分子量产生杂条带的原因。方法:在不同的供试品缓冲液和不同电泳条件下进行SDS-PAGE电泳比较。结果:上样前100℃煮样1 min与加碘乙酰胺结果相同。结论:高分子量和低分子量杂条带可以用电泳上样前100℃煮样1 min消除即可。

  • 重组单抗药物的非还原电泳纯度分析

    作者:程立均;魏敬双;张世雄;李耿;贾茜

    目的 对重组单抗药物的非还原电泳纯度进行分析,排除样品制备过程中形成的一些假象.方法 结合重组单抗的分子结构特征,改变常规SDS-PAGE条件,将抗体样品在不同的缓冲液及电泳条件下进行比较.结果 抗体在非还原SDS-PAGE纯度检测中出现的次带,可通过在供试品缓冲液中加入烷基化试剂封闭自由巯基而几乎全部消除;通过降低电泳过程的环境温度,可有效降低主带上方高相对分子质量带的出现.结论 单抗药物中由于含有多对二硫键引起的一些因电泳样品制备而形成的假象带,可以通过试验方法的修正而去除.

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