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牛磺鹅去氧胆酸抗炎作用机制的网络药理学研究
为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)的抗炎作用机制,通过PubChem查找TCDCA的分子结构并下载SDF格式文件,经PharmMapper服务器、GeneCards数据库预测并筛选TCDCA抗炎靶点.将靶点导入STRING数据库得到蛋白互作关系并通过Cytoscape进行可视化处理,然后将靶点导入STRING数据库进行GO及KEGG通路分析,通过分子对接对TCDCA与主要靶点结合活性进行验证,并通过DisGeNET数据库获取靶点类型信息.筛选得到TCDCA涉及抗炎作用的靶点89个,网络分析结果表明,TCDCA主要涉及刺激反应(response to stimulus)、多细胞生物过程(multicellular organismal process)、单细胞生物过程(single-multicellular organism process)、对化学刺激反应(response to chemical)及有机物反应(response to organic substance)等68个生物过程,通过调节癌症相关通路(pathways in cancer)、孕酮介导的卵母细胞成熟(progesterone-mediated oocyte maturation)、MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)、蛋白多糖在癌症中的作用(proteoglycans in cancer)等51条信号通路来发挥抗炎作用.本研究反映出TCDCA经多靶点、多途径发挥抗炎作用的特点,为后续开展其抗炎作用机制的研究指明了方向.
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熊胆粉中3个新胆汁酸的结构研究与确定
为了研究熊胆粉中的新胆汁酸结构,采用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(LC-QTOF/MS)结合化学反应进行分析.首先取牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸对照品,经氯铬酸吡啶氧化后,以LC-QTOF/MS对氧化产物进行分析,可确证所有4个氧化产物的结构,其中含3个同分异构体.再取熊胆粉样品,以甲醇提取后进行LC-QTOF/MS测定,并与上述氧化产物的结果进行比较,可推断熊胆粉中含其中3个氧化产物.
关键词： 液相色谱-四极杆-飞行时间质谱 熊胆粉 牛磺熊去氧胆酸 牛磺鹅去氧胆酸 -
熊胆粉药材研究进展
目的 探讨熊胆粉药材研究进展情况.方法 检索近几年有关熊胆及熊胆粉的研究报道,并分别对其化学成分、质量控制和药理作用进行归纳总结.结果与结论 熊胆粉药理作用较明确,目前对其胆汁酸类成分研究较多,对非胆汁酸类成分的研究较少,有待进一步深入.
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天然熊胆粉与人工合成熊胆粉的红外吸收特征比较
熊胆为中医药瑰宝,自古以来被视为中医药圣药,雄居各胆之首,为名贵中药.来源于熊科动物黑熊Selenarctos thibetanus Cuvier、棕熊 Ursus arctosL.的干燥胆或黑熊引流之胆汁(其干燥物称熊胆粉)[1].熊胆具有清热,平肝,明目之功效,临床用于惊风抽搐,咽喉肿痛.文献报道,熊胆的主要化学成分为牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺胆酸(TCA)、少量的熊去氧胆酸(UDCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、胆酸(CA)、去氧胆酸(DCA)、胆固醇(CS)、胆红素,以及各种氨基酸和微量的无机元素,其中TUDCA的量高,是熊胆的特有成分[2].现代药理研究证实熊胆具有保肝利胆、溶解胆石、镇静、抗惊厥、解痉,抗炎、抑菌、解热,临床上广泛用于眼科、五官科、消化科、神经科[3].
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藿胆丸质量分析
建立了超高效液相色谱测定藿胆丸猪胆粉中的猪磺去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸,并采用气相色谱法测定广藿香叶中的百秋李醇.共检测了73批藿胆丸样品,10批藿胆丸和18批广藿香叶不符合规定.
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牛磺鹅去氧胆酸对小鼠免疫功能的调节作用
目的 探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对体外培养的小鼠免疫细胞及其机体免疫功能的影响.方法 实验中设计了0.043、0.065、0.1、0.153和0.189 g·kg-1 5个体内给药的剂量梯度;体外设计了终浓度为0.01、0.05、0.1、1和10 mg·L-1 5个浓度梯度.开展TCDCA对小鼠体外腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、小鼠正常机体、免疫抑制模型以及神经-内分泌-免疫调节系统的影响研究.结果 TCDCA对小鼠正常机体具有药物剂量依赖性的向下抛物线形式的双向免疫调节作用;0.1 g·kg-1 TCDCA对采用环孢菌素A和环磷酰胺制成的免疫抑制模型具有明显的恢复作用;TCDCA可以直接作用于体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,并对这两种免疫细胞表现出了药物浓度依赖性的基本为向上抛物线形式的免疫调节作用;0.1 g·kg-1 TCDCA可以极显著地提高小鼠机体神经-内分泌-免疫调节系统皮质醇的含量.结论 TCDCA对小鼠免疫功能具有明显的调节作用.
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人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和牛磺去氧胆酸的反相高效液相色谱法测定
采用反相高效液相色谱法测定人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸及牛磺去氧胆酸3种主成分的含量.其色谱条件为:Nova Pa k C18(4 μm)柱,流动相:乙腈-水(1∶2),流速:0.9 ml/min, 检测波长:21 0 nm.平均加样回收率分别为:牛磺胆酸100.5%、牛磺鹅去氧胆酸102.2%及牛磺去氧胆酸1 00 .9%,RSD分别为1.48%、1.60%及1.97%.该法快速、灵敏、准确,适用于人工蛇胆汁中3 种主要有效成分的同时测定.
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HPLC-ELSD法同时测定生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸等5种成分含量
目的:建立同时测定生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸5种成分含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,检测器为蒸发光散射检测器.色谱柱为Agilent XBD-C18,流动相为0.05％三氟乙酸-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min;漂移管温度为80℃,N2流量为3.0 ml/min,柱温为40℃.结果:牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸检测质量浓度线性范围分别为10.00～200.08、10.22～204.32、10.00～199.92、9.85～197.08、10.25～204.92 μg/ml(r=0.999 5～0.999 8);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均不大于2.0％.5种成分的平均回收率分别为97.9％、98.4％、97.9％、98.1％、98.3％,RSD分别为0.49％、0.63％、0.81％、0.72％、0.78％(n=3).结论:该方法快速、准确、重复性好,可用于生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸等5种成分的定量测定.
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HPLC法测定熊胆舒喉片中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量
采用HPLC法测定熊胆舒喉片中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)的含量,以μ-BonndapakC18为分析柱(10μm,4.6×250mm),甲醇-磷酸二氢钠溶液(0.03mol/L,65:30)为流动相,紫外检测波长为210nm,平均回收率分别为98.8%(RSD=1.41%,n=5))和101.3%(RSD=0.74%,n=5).
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HPLC测定牛磺熊去氧胆酸胶囊中的有关物质
目的 采用RP - HPLC法测定牛磺熊去氧胆酸胶囊中的有关物质.方法 采用Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm),流动相为0.02 mol· L-1磷酸二氢钠-乙腈(60∶40,磷酸调pH5.5),检测波长为205 nm,流速为1.0 mL· min-1,柱温30℃.结果 牛磺熊去氧胆酸0.9694 ～ 96.94 μg· mL-1与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),检测限为0.3635 ng,定量限为1.454 ng.牛磺鹅去氧胆酸0.9443 ～ 94.43 μg·mL-1与峰面积的线性关系良好(r =0.9999),检测限为9.447 ng,定量限为23.62 ng,方法回收率为99.54％.结论 所用方法准确、灵敏、快速,适用于牛磺熊去氧胆酸胶囊中微量杂质的控制.
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人工引流熊胆粉中结合胆汁酸成分的研究
目的 研究人工引流熊胆粉中的结合型胆汁酸成分.方法 采用反相树脂柱层析法对人工引流熊胆粉进行分离,然后通过IR、1H-NMR和13C-NMR等波谱数据进行结构鉴定.结果 从人工引流熊胆粉中分离得到3个化合物,鉴定为:牛磺熊去氧胆酸(Ⅰ)、牛磺鹅去氧胆酸(Ⅱ)和牛磺熊去氧酮胆酸(Ⅲ).结论 直接得到结合型胆汁酸Ⅰ和Ⅱ,化合物Ⅲ为首次从熊胆中分离.
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RP-HPLC梯度法测定8种蛇胆中结合型胆汁酸的含量
目的:用HPLC梯度洗脱法同时测定蛇胆中牛磺胆酸(TCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺去氧胆酸(TDCA)、甘氨胆酸(GCA)4种结合型胆汁酸的含量.方法:用美国Zorbax Extend C18柱,乙腈-0.15%磷酸氢二钠溶液梯度洗脱0～20min(15:85～40:60).流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm.结果:TCA、TCDCA、TDCA、GCA在进样量为2～39μg范围内线性关系良好.该方法回收率TCA为99.5%(RSD=0.5%),TCDCA为100.3%(RSD=1.8%),TDCA为100.0%(RSD=1.8%),GCA为98.9%(RSD=2.2%).结论:HPLC梯度法能将蛇胆中结合型胆汁酸很好分离,方法简单,准确.
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HPLC-ELSD法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量
目的:建立熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)含量的测定方法.方法:应用HPLC-ELSD法直接测定熊胆粉中TUDCA和TCDCA的含量.色谱条件:色谱柱:Varian C18(4.6 mn×250 mm,5μm),流动相:甲醇-醋酸-醋酸铵缓冲液(pH 4.5)(70:30),流速:0.8 mL·min-1;ELSD漂移管温度:105℃,载气流速:3.2 L·min-1,雾化气体(空气)压力:0.5 MPa.结果:在选定的色谱条件下,TUDCA和TCDCA可达到很好的分离.TUDCA进样量在0.378～6.056μg范围内,TCDCA进样量在0.489～7.829μg范围内均呈良好的线性关系.结论:该方法简便、快速,结果准确,重现性好.
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RP-HPLC法同时测定猪胆粉药材中3种牛磺结合型胆酸的含量
目的:建立同时测定猪胆粉药材中牛磺猪胆酸、牛磺猪去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸含量的RP - HPLC方法.方法:采用Welchrom C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸二氢钠溶液(0.03 mol·L-1) (70∶ 30),用磷酸调节pH为4.4,流速为1.0 mL·min-1,检测波长200 nm,柱温25℃.结果:牛磺猪胆酸、牛磺猪去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸进样量分别在1.65 ～16.5 μg (r=0.9998),2.03～20.3 μg(r=0.9998),1.09～10.9 μg(r=0.9996)范围内线性关系良好；检测限分别为26.4,7.6,38.2 ng;平均加样回收率(n=9)分别为101.2％ (RSD=1.9％),99.1％ (RSD=1.7％),100.6％( RSD=2.1％).结论:该方法简便、准确,重复性好,在同一色谱条件下实现多指标成分的同时测定,为猪胆粉的全面质量评价提供参考.
