首页 > 文献资料
-
敲除ABRO1不影响小鼠肝巨噬细胞重建
目的 建立一种高效清除并重建肝巨噬细胞的方法,检测敲除ABRO1对肝巨噬细胞重建的影响.方法8周龄CD45.1亚型C57BL/6J小鼠,尾静脉注射氯氟松(clophosome)清除肝巨噬细胞,钴源照射后,移植Abro1+/+或Abro1-/-小鼠(CD45.2)骨髓,8周后分离小鼠肝非实质细胞,流式分析检测肝巨噬细胞的重建效率.结果常规骨髓移植后,肝脏中单核来源巨噬细胞(CD11bhi F4/80lo)重建率高达90％,但Kupffer细胞(CD11bint F4/80hi)的重建率只有约10％;提前注射氯氟松后再进行骨髓移植,肝脏中单核来源巨噬细胞和Kupffer细胞的重建率都>90％.利用氯氟松清除肝巨噬细胞后再进行骨髓移植的方法,检测发现敲除ABRO1并不影响肝巨噬细胞的重建.结论通过采用尾静脉注射氯氟松联合骨髓移植的方法,成功建立了一种安全、高效清除并重建肝内巨噬细胞的方法,敲除ABRO1并不影响肝巨噬细胞的重建.
-
ABRO1基因敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞的永生化及其LPS/TLR4通路活化的检测
目的 永生化ABRO1基因敲除(KO)小鼠骨髓来源的巨噬细胞系(BMDM),并确定缺失ABRO1对巨噬细胞LPS/TLR4通路活化的影响.方法 用pCDH-SV40LT-puro慢病毒分别感染野生型(WT)及ABRO1 KO小鼠的BMDM,连续传代培养>50代,得到永生化细胞系.利用MTS法和EdU掺入法检测细胞增殖,AnnexinⅤ/7-AAD双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡.脂多糖(LPS)刺激细胞后,Western印迹法检测NF-κB及MAPK信号通路,并用流式微球阵列(CBA)检测细胞产生IL-6、TNF-α的水平.结果 成功构建了ABRO1 WT和KO的永生化BMDM(iBMDM).正常培养下,WT及KO iBMDM细胞增殖能力和细胞凋亡均无明显差异,但撤除血清后,KO iBMDM细胞凋亡明显高于WT.LPS刺激后,NF-κB、MAPK信号通路激活及IL-6、TNF-α的产生无明显差异.结论 ABRO1缺失不影响LPS/TLR4信号通路.敲除ABRO1促进血清撤除诱导的iBMDM凋亡.
-
Abro1在LPS诱导的急性肺损伤中的作用探讨
目的 探讨基因Abro1在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤中的作用.方法 Abro1基因敲除型(KO)小鼠和野生型(WT)C57BL/6小鼠各14只,随机各等分为两组,分别采用肺部气溶胶给药系统给予LPS(10 mg/kg)或等体积生理盐水预处理,给药6 h和24 h后收集样本.应用HE染色观察肺组织病理改变;比较各组支气管肺泡灌洗液中的细胞数目和肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量,检测支气管肺泡灌洗液中IL-6水平以及肺组织mRNA水平.结果 给药24 h后,与肺部接受生理盐水相比,LPS处理组小鼠肺组织显著损伤,主要表现为炎性细胞浸润,肺泡壁增厚,但Abro1 KO小鼠的肺组织病理损伤程度显著低于WT小鼠;LPS处理6 h后,KO小鼠支气管肺泡灌洗液中募集的炎性细胞数目和肺组织MPO含量显著低于WT小鼠(P<0.05),而其IL-6水平及肺组织mRNA水平均低于WT小鼠(P<0.05).结论 敲除Abro1可减轻LPS诱导的肺部炎症反应,减轻肺损伤.
