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配对盒基因2和细胞周期蛋白D1在晚期卵巢浆液性腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨配对盒基因2(Pax2)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在晚期卵巢浆液性腺癌中的表达及临床意义.方法 2003年1月至2013年12月间行初治卵巢癌肿瘤细胞减灭术的晚期(Ⅲ～Ⅳ期)卵巢浆液性腺癌患者202例,应用组织芯片和免疫组化法检测肿瘤组织中Pax2和cyclin D1蛋白的表达,分析其与患者临床病理特征及预后的关系.结果 202例卵巢浆液性腺癌患者中,Pax2蛋白的阳性率为24.8％(50/202),cyclin D1蛋白的阳性率为25.2％(51/202).Pax2和cyclin D1在不同年龄、临床分期和病理分级的卵巢浆液性腺癌患者中的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05).Pax2阴性患者的中位生存时间为53个月,中位无进展生存时间为29个月.Pax2阳性患者的中位生存时间为66个月,中位无进展生存时间为33个月.Pax2阴性和阳性患者的中位生存时间差异有统计学意义(χ2=4.06,P=0.04),Pax2阴性和阳性患者的中位无进展生存时间差异无统计学意义(χ2=2.43,P=0.11).cyclin D1阴性患者的中位生存时间为62个月,中位无进展生存时间为30个月.cyclin D1阳性患者的中位生存时间为48个月,中位无进展生存时间为22个月.cyclin D1阴性和阳性患者的中位生存时间差异有统计学意义(χ2=4.71,P=0.03),cyclin D1阴性和阳性患者的中位无进展生存时间差异无统计学意义(χ2=0.59,P=0.41).多因素分析显示,Pax2表达为影响卵巢浆液性腺癌患者预后的独立因素(RR为0.597,95％CI为0.371～0.962,P<0.034).结论 Pax2和cyclin D1表达与晚期卵巢浆液性腺癌患者的预后有关,Pax2为影响晚期卵巢浆液性腺癌患者预后的独立因素.
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配对盒基因8和配对盒基因2蛋白在上皮及肿瘤组织中的表达差异
目的 探讨配对盒基因8(Pax8)和配对盒基因2(Pax2)蛋白在不同类型的上皮及肿瘤组织中的表达差异和临床意义. 方法 采用组织芯片和免疫组化染色方法研究Pax8和Pax2蛋白在255例肿瘤组织和75例正常上皮组织中的表达差异. 结果 Pax2和Pax8蛋白在不同系统正常上皮组织中的表达呈现出一定的特异性.Pax8蛋白集中表达于甲状腺、泌尿系统及女性生殖系统的上皮组织,其阳性表达率分别为100%(2/2)、60.0%(3/5)和76.9%(10/13).Pax2蛋白集中表达于泌尿系统和女性生殖系统的上皮组织,其阳性表达率分别为40.0%(2/5)和38.5%(5/13).Pax2蛋白在正常甲状腺组织中不表达.Pax8蛋白在女性生殖系统中的阳性表达率高于Pax2蛋白(P<0.05).Pax2和Pax8蛋白在不同系统肿瘤组织中的表达呈现出一定的特异性.Pax8蛋白在甲状腺癌组织中的阳性表达率为66.7%(10/15),在肾细胞癌组织中的阳性表达率为65.2%(15/23),在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率为80.0%(4/5).Pax2蛋白的表达相对较弱,在甲状腺癌组织中的阳性表达率为13.3%(2/15),在肾细胞癌组织中的阳性表达率为34.8%(8/23),在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率为20.0%(1/5).Pax8蛋白在甲状腺癌、肾细胞癌和子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率均明显高于Pax2蛋白在相关癌组织中的阳性表达率(均P<0.05).Pax8蛋白在卵巢浆液性癌、卵巢宫内膜样癌、卵巢透明细胞癌组织中的阳性表达率分别为92.9%(26/28)、81.8%(9/11)和82.4%(14/17),Pax2蛋白在卵巢浆液性癌、卵巢宫内膜样癌、卵巢透明细胞癌组织中的阳性表达率分别为28.6%(8/28)、9.1%(1/11)和17.6%(3/17),Pax8蛋白在卵巢浆液性癌、卵巢宫内膜样癌、卵巢透明细胞癌组织中的表达明显高于Pax2蛋白在相关癌组织中的表达(均P<0.05). 结论 Pax2和Pax8蛋白均可特异性表达于女性生殖道上皮和泌尿系统上皮,但Pax8蛋白的阳性表达率明显优于Pax2蛋白,二者联合使用对于不同器官来源的上皮性肿瘤的鉴别具有一定的临床意义.
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WIF-1阻断WNT通路对PAX2诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化作用的影响
目的 体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制.方法 应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选建立稳定表达PAX2细胞系,将实验细胞分为转染组、空载组和对照组,采用Western blot和实时PCR对各组进行WNT通路分子WNT4及β-catenin表达检测.加入WIF-1至稳定转染PAX2细胞中,分为WIF-1 5 μg/mL组、WIF-1 10 μg/mL组、WIF-1 15 μg/mL组及稳转组.加药后48 h收集细胞,应用免疫荧光法、Western blot和实时PCR检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物d-肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 Western blot和实时PCR结果显示,转染组WNT4和β-catenin蛋白和mRNA表达水平较空载组及对照组明显增加(P＜0.05).免疫荧光法、Western blot和实时PCR结果显示,WIF-1 5 μg/mL组、WIF-1 10 μg/mL组和WIF-1 15 μg/mL组3-catenin和α-SMA蛋白及mRNA表达较稳转组下调(P＜0.05),WIF-1 15 μg/mL组下降明显,各浓度WIF-1组E-cadherin蛋白及mRNA较稳转组明显上调(P＜0.05),WIF-1 15 μg/mL组明显.结论 PAX2基因可以在体外肾小管上皮细胞激活WNT通路.应用WIF-1阻断WNT通路后出现转分化逆转.推测PAX2基因可能通过WNT通路诱导上皮细胞间充质转分化.
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沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响
目的:探讨沉默WNT4基因对稳定转染配对盒基因2(PAX2)大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明PAX2基因是否通过WNT4基因调控细胞生物学活性.方法:选取对数生长期的PAX2基因稳转细胞系,分为稳转组和对照组.稳转组细胞分为稳转对照组(不应用WNT siRNA沉默)和沉默72 h组(应用WNT siRNA沉默72 h).Western blotting法检测稳转组和对照组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白的相对表达量,Real time PCR法检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量,细胞划痕实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率,Transwell实验检测稳转对照组和沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数.结果:Western blotting法检测,稳转组大鼠肾小管上皮细胞中PAX2和WNT4蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05).Real-time PCR法检测,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞中WNT4 mRNA相对表达量低于稳转对照组(P<0.05).细胞划痕实验10 h后,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);细胞划痕实验18 h后,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的细胞迁移率低于稳转对照组(P>0.05).Transwwell实验,沉默72 h组大鼠肾小管上皮细胞的穿膜细胞数低于稳转对照组(P<0.05).结论:PAX2基因可能通过WNT4基因调控细胞的生物学活性.
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配对盒基因2对正常肾小管上皮细胞间充质转分化的诱导作用
目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对肾小管上皮细胞表型标志物的影响,探讨PAX2诱导转分化的作用,为肾纤维化治疗提供依据.方法:正常肾小管上皮细胞株NRK52E分为对照组、空载组(转染pGC-Fu空质粒)和转染组(采用脂质体转染法将pGC-FU-GFP-PAX2质粒转染至细胞中).转染72 h后应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,应用Western blotting法和Real-time PCR法检测PAX2蛋白和mRNA表达水平；转染72 h后应用免疫组织化学法、Western blotting法和Real-time PCR法检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α肌动蛋白(α-SMA)及其mRNA表达水平.结果:pGC-FU-GFP-PAX2转染72 h后,转染组细胞绿色荧光强度较对照组明显增强,且肾小管上皮细胞的形态伸长；Western blotting法检测,转染组PAX2蛋白表达水平明显高于空载组和对照组(P＜0.05)；Real-time PCR检测,转染组细胞的PAX2mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P＜0.05)；转染组细胞中的E-cadherin染色较空载组和对照组明显减弱；α-SMA染色较空载组和对照组明显增强.Western blotting法检测,转染组细胞中E-cadherin表达水平明显低于空载组和对照组(P＜0.05)；α-SMA表达水平明显高于空载组和对照组(P＜0.05)；Real-time PCR检测,转染组细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显低于空载组和对照组(P＜0.05)；α-SMA mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P＜0.05).结论:PAX2转染正常肾小管上皮细胞后E-cadherin表达减少,α-SMA表达增加,PAX2可能在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化.
