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  • PHLPP2在胃癌中的表达及其临床意义探讨

    作者:杨东杰;王志雄;徐建波;吴晖;李广华;张信华;蔡世荣;陈创奇;王昭;何裕隆

    目的 探讨PHLPP2在癌旁正常胃黏膜、胃癌原发灶和淋巴结转移灶中的表达差异.并分析PHLPP2表达水平和胃癌病人临床病例特征和总生存时间的关系.方法 应用免疫组化方法检测PHLPP2在221例胃癌原发灶、30癌旁正常组织和175例淋巴结转移灶中的表达情况,并统计分析了PHLPP2表达与胃癌临床病理特征及其对生存预后的关系.结果 癌旁正常胃黏膜、 胃癌原发灶和淋巴结转移灶中的PHLPP2的阳性表达率分别为:70.0%、31.3%和18.3%,组间差异均有统计学意义(31.3%vs.70.0%,18.3%vs.70.0%,31.3%vs.18.3%,P值均<0.001);并且,PHLPP2的表达与远处转移和TNM分期存在显著相关性;PHLPP2阳性表达的胃癌患者5年生存率为57%,阴性表达胃癌患者5年生存时间仅为35%,差别有统计学意义,P=0.03.多因素生存分析发现PHLPP2是胃癌的独立预后因素(HR 0.56,95%CI 0.37~0.85,P=0.006).结论 PHLPP2在胃癌及转移淋巴结中呈低表达,PHLPP2阴性与肿瘤远处转移及更差的预后相关.PHLPP2蛋白有可能成为胃癌预后预测的标志物.

    关键词: PHLPP2 胃癌 5年生存率
  • PHLPP2基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及对舌癌细胞Tca8113增殖的影响

    作者:林佳佳;程龙;杜佩云;姜丽娜;麦宏旭;夏靖霖;张菊会;叶棋浓;王恩群

    目的 构建稳定表达PHLPP2小发夹RNA( shRNA)的Tca8113细胞系,研究敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113细胞生长的影响. 方法 利用RNA干扰( RNAi )技术,设计并合成针对PHLPP2 基因的shRNA,并将其克隆到shRNA表达载体PSIH-H1上. 经测序成功后,包装病毒并感染舌癌细胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的稳定细胞株. 通过实时定量PCR( qRT-PCR)和Western印迹实验检测RNAi的干扰效果. 利用Western印迹实验和细胞生长曲线检测敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化及细胞生长的影响. 结果 经测序证明,成功构建PHLPP2 shRNA真核表达载体. qRT-PCR和Western印迹实验证明,构建的shRNA能有效抑制PHLPP2的表达,并构建敲低PHLPP2基因的Tca8113稳定细胞系. 实验表明,敲低PHLPP2可促进细胞的生长并升高Akt Ser473的磷酸化水平. 结论 成功构建PHLPP2基因的shRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制PHLPP2基因的表达,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促进细胞的生长,为进一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及机制奠定了基础.

  • 不同照射方式对结直肠癌CL187细胞的抑制作用和分子机制初探

    作者:王皓;王俊杰;曲昂;李金娜;刘敬佳

    目的 研究单次、分次和125Ⅰ粒子持续低剂量率照射对结直肠癌CL187细胞生物学效应的影响.方法 实验分高剂量率单次照射组(400 cGy/min,单次组)、分次照射组(2 Gy/次/d,400 cGy/min,分次组)和125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组(2.77 cGy/h,125Ⅰ组).3组细胞照射0、2、4和8 Gy后,24和48 h进行细胞计数和锥虫蓝染色,比较细胞总数和细胞存活率的差异.利用克隆形成实验比较3组细胞增殖能力的差异.通过流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白免疫印迹法分析PHLPP2、PTEN和Bax蛋白表达的变化.结果 与单次组和分次组相比,125Ⅰ组细胞总数减少(t=34.28和29.48,P<0.05)、存活细胞比例减少(t=-12.38和-14.61,P<0.05),细胞克隆形成能力下降,相对生物学效应是1.41.照射后48 h细胞凋亡检测发现125Ⅰ组细胞凋亡比例增加(t=-15.08和-11.99,P<0.05).蛋白免疫印迹法检测发现125Ⅰ组Bax表达量升高,PHLPP2和PTEN的表达量3组间差异无统计学意义.结论 单次、分次和持续低剂量率照射后细胞PHLPP2蛋白表达水平均升高,但剂量率的高低并不影响其表达水平.不同方式照射后,凋亡相关蛋白Bax的表达水平上升,125Ⅰ组升高更加明显,125Ⅰ持续低剂量粒子照射可能通过影响凋亡相关蛋白Bax的表达水平实现对结直肠癌CL187细胞的杀伤作用.

  • 食管鳞癌组织中PHLPP1及PHLPP2的表达及其临床意义

    作者:何晓燕;张志梅;李硕;施瑞华

    目的:探讨PHLPP1及PHLPP2在食管上皮内瘤变及食管鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用qRT-PCR方法检测40对食管上皮内瘤变及其正常对照组织和63对食管鳞癌及其正常对照组织中PHLPP1及PHLPP2 mRNA的表达情况,并探讨其表达量与临床病理资料的关系.结果:食管鳞癌组织中PHLPP1和PHLPP2 mRNA的表达水平均明显低于正常对照组织及上皮内瘤变组织(P<0.05).食管上皮内瘤变组织中PHLPP1和PHLPP2 mRNA的表达水平与正常对照组织无统计学差异(P>0.05).病理分级Ⅲ级的食管鳞癌患者组织中PHLPP1和PHLPP2 mRNA的表达水平均明显低于Ⅰ~Ⅱ级患者(P<0.01),TNM分期Ⅲ期的食管鳞癌患者组织中PHLPP1和PHLPP2 mRNA的表达水平均明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.01).结论:PHLPP1及PHLPP2表达水平与食管鳞癌发生发展与恶性程度密切相关,有望成为食管鳞癌诊断的新靶点.

  • 结直肠癌中PHLPP2、PTEN与p-Akt1表达的相关性及其临床意义

    作者:许晓阳;吴淑华;孙晨博;温菲菲;何双;高向前;刘远航

    目的 检测PHLPP2、PTEN与p-Akt1及其下游分子VEGF、BCL-2及Cyclin D1在结直肠癌中的表达,探讨蛋白表达的相关性及其临床意义.方法 采用免疫组化EnVision法和RT-PCR法检测结直肠癌及正常结直肠黏膜组织中PHLPP2、PTEN、p-Akt1、VEGF、BCL-2及Cyclin D1的表达,并分析蛋白表达与临床病理特征及预后的相关性.结果 结直肠癌组织中PHLPP2和PTEN阳性率低于正常结直肠黏膜组织;p-Akt1、VEGF、BCL-2及Cyclin D1在结直肠癌组织中的阳性率明显高于正常结直肠黏膜组织(P<0.05).结直肠癌中PHLPP2与p-Akt1、VEGF、BCL-2、Cyclin D1表达均呈负相关(P<0.05).PHLPP2、PTEN均阳性的结直肠癌组织中p-Akt1阳性率明显低于其他组;PHLPP2、PTEN均阴性结直肠癌组中p-Akt1阳性率明显高于其他分组(P<0.05).PHLPP2、PTEN蛋白表达水平与分化程度及淋巴结转移具有相关性;p-Akt1蛋白表达水平与分化程度、浸润深度和淋巴结转移密切相关(P<0.05).Kaplan-Meier分析显示,PHLPP2、PTEN、p-Akt1与结直肠癌患者预后相关.Cox回归模型分析显示,PHLPP2、PTEN、p-Akt1、分化程度及淋巴结转移是结直肠癌预后的独立危险因素.结论 PHLPP2与PTEN做为抑癌基因共同影响Akt1磷酸化,PHLPP2在结直肠癌中表达缺失与肿瘤的发生、发展及转移密切相关,可作为评估结直肠癌患者预后的潜在分子标志物.

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