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  • 乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白与烯酰辅酶A水合酶相互作用对肝细胞胆固醇代谢的影响

    作者:张凯;姚雯;林苏;王明芳;朱月永

    目的 探究乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白(SHBs)与烯酰辅酶A水合酶(ECHS1)相互作用对肝细胞胆固醇代谢的影响.方法 通过在人肝癌细胞株HepG2中瞬时转染SHBs,建立SHBs瞬时转染细胞模型,分别设置空白对照组、空质粒转染组、单纯SHBs转染组、SHBs + 阴性序列对照组、ECHS1过表达组以及ECHS1干扰组.在转染后48 h检测ECHS1及载脂蛋白A1(ApoA1)基因的表达和各转染组转氨酶水平及细胞内总胆固醇(TC)含量.结果 与空白组相比,单纯SHBs转染组在核酸水平ECHS1、ApoA1的表达均下降(P均< 0.001),蛋白水平表达趋势同核酸一致(P < 0.001、P =0.0025),细胞内TC水平升高(P < 0.001),转氨酶水平升高(PALT< 0.001、PAST< 0.001).较单纯SHBs转染组,ECHS1过表达组可在核酸和蛋白水平下调ApoA1(P = 0.0072、P < 0.001),且细胞内TC水平下降(P < 0.001),转氨酶水平降低(PALT< 0.001、PAST= 0.0049).与单纯SHBs转染组相比较,ECHS1干扰组ApoA1核酸和蛋白水平亦降低(P = 0.0096、P < 0.001),TC水平降低(P <0.001),ALT水平无显著变化(P = 0.28),AST水平升高(P = 0.0069).结论 SHBs能够通过下调ApoA1表达来提高肝细胞TC水平,同时ECHS1通过相关信号通路及分子机制抑制TC的生成.

  • 烯酰辅酶A水合酶单克隆抗体的制备与鉴定

    作者:鞠艳芳;刘蓉;柳晓兰;杨金菊;高建恩;孙启鸿

    目的 制备抗人烯酰辅酶A水合酶(ECH1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb.并通过问接ELISA法、Western blotting及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果 获得1株可稳定分泌抗人ECH1 mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(K),该mAb可用于EUSA检测、Western blotting、免疫组化和免疫沉淀实验.结论 成功制备了抗人ECHI的mAb,为ECH1的研究提供了有力的工具.

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