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绝经后骨质疏松小鼠中Hedgehog信号对破骨细胞的作用
目的 探讨绝经后骨质疏松破骨细胞中Hedgehog信号的活性及其对破骨细胞的作用,了解雌激素与 Hedgehog 信号的关系.方法 利用绝经后骨质疏松模型 (OVX,Ovariotomized)小鼠3只与假手术组小鼠3只来源的破骨细胞进行培养,对比两组细胞 Hedgehog 信号的活性.将 RAW264.7细胞用无酚红培养基进行破骨诱导培养,并随机分为6组:雌激素组,给予雌二醇以 10-8 M 浓度干预;雌激素+激动剂组,给予10-8 M浓度雌二醇和1μm浓度的 Hedgehog信号激动剂Purmorphamine进行干预;雌激素+拮抗剂组,给予 10-8 M浓度雌二醇和1μm浓度的Hedgehog信号拮抗剂Vismdegib进行干预;对照组,不给予任何干预;激动剂组,给予1μm浓度的Purmorphamine进行干预;拮抗剂组,给予1μm浓度的Vismdegib进行干预,定量PCR检测各组Hedgehog信号水平Gli1和Ptch1的表达.对雌激素组、拮抗剂组和对照组分别进行TRAP染色和F-actin染色,以检测破骨细胞数量.结果 (1) 与正常小鼠来源的破骨细胞相比,OVX小鼠来源的破骨细胞中Ptch1 Gli1和 Ptch1 Gli1表达量0.72400±0.04272、0.66794±0.07331水平更高于正常小鼠来源的量0.44196±0.06822、0.45229±0.05750,差异有统计学意义 (P＜0.05);(2) Gli1 Ptch1表达量0.4131±0.02511、0.54165±0.03931 较对照组1.00000±0.11771、0.74160±0.07632 低,差异有统计学意义 (P＜0.05);雌激 素+激动剂组中Ptch1和Gli1表达水平0.38557±0.06785、1.00000±0.03138 较激动剂组0.86403±0.05886、1.45856±0.05911 低,差异有统计学意义(P＜0.01);(3) 与对照组相比,拮抗剂组与雌激素组破骨细胞数量均较低 (P＜0.05).结论 (1) 绝经后骨质疏松破骨细胞中Hedgehog 信号活性提高;(2) 破骨细胞中雌激素对Hedgehog信号有抑制作用;(3) 体外培养时,抑制Hedgehog信号能降低破骨细胞的数量,改善雌激素缺乏时破骨细胞过多的情况.
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右美托咪定对大鼠肺缺血再灌注时脑信号素7A表达的影响
目的 评价右美托咪定对大鼠肺缺血再灌注时脑信号素7A表达的影响.方法 健康清洁级成年雄性SD大鼠30只,8～12周龄,体重200～240g,采用随机数字表法分为3组(n=10):假手术组(S组)、肺缺血再灌注组(I/R组)和右美托咪定组(D组).S组仅开胸不阻断左肺门;I/R组采用阻断左侧肺门45 min,再灌注120 min的方法制备大鼠肺缺血再灌注损伤模型;D组于缺血前30min腹腔注射右美托咪定50μg/kg,然后制备大鼠肺缺血再灌注损伤模型.于再灌注120 min时取左肺组织,计算湿重/干重(W/D)比值;采用HE染色法观察肺组织病理学结果,并行肺损伤评分;分别采用Western blot法和RT-PCR法检测缺血区肺组织脑信号素7A及其mRNA的表达水平;采用ELISA法测定肺组织TNF-α和IL-1β的含量.结果 与S组比较,I/R组和D组肺组织W/D比值、肺损伤评分均升高,脑信号素7A及其mRNA表达均上调,TNF-α和IL-1β含量均升高(P＜0.05);与I/R组比较,D组肺组织W/D比值和肺损伤评分降低,脑信号素7A及其mRNA表达下调,TNF-α和IL-1β含量降低(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的机制可能与下调肺组织脑信号素7A的表达,从而抑制炎症反应有关.
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神经导向分子Semaphorin5A在人胃癌侵袭和转移过程中作用的研究
目的 探讨神经轴突导向分子Semaphorin 5A表达与胃癌患者临床病理特征的关系及其在胃癌侵袭和转移过程中的作用.方法 使用免疫组织化学方法检测Semaphorin 5A在171例不同性别、年龄、组织学类型和TNM分期胃癌患者组织中的表达.使用Western印迹方法检测Semaphorin 5A在具转移能力的胃癌细胞株(SGC7901和MKN-45)和无转移能力的胃癌细胞株(SNU-1和AGS)中的表达情况.运用RNA干扰技术构建Semaphorin 5A-siRNA表达载体并转染胃癌细胞株SGC7901,建立Semaphorin 5A稳定低表达的胃癌细胞株,经细胞粘附实验、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测Semaphorin 5A基因沉默后对胃癌细胞粘附、运动和侵袭的影响.结果 Semaphorin 5A表达水平与胃癌分化程度(x2=6.32,P=0.01)、胃癌淋巴结转移(x2=7.68,P=0.01)和远处转移(x2=13.6,P=0.00)有关,与患者年龄(x2=0.21,P=0.79)、性别(x2=1.79,P=0.15)和胃癌浸润深度无关(x2=1.34,P=0.55).SGC7901和MKN-45细胞株中Semaphorin 5A的表达水平明显高于SNU-1和AGS细胞株(P＜0.01).Semaphorin 5A基因表达沉默可抑制胃癌细胞的粘附、运动和侵袭能力.结论 Semaphorin 5A可能通过提高胃癌细胞粘附、运动和侵袭能力,在胃癌侵袭和转移过程中发挥促进作用.
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Semaphorin家族与胶质瘤
Semaphorin是一类分泌型或结合于细胞表面的轴突导向分子,该家族成员均含有一个由约500个氨基酸残基构成的Sema结构域,这一结构对于其生物学活性的发挥是必需的.研究发现该家族不同成员间的作用各不相同,可发挥癌基因或抑癌基因的作用,与胶质瘤细胞的异常增殖、迁移和侵袭相关,提示可将其作为治疗靶点用于胶质瘤的临床治疗.
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Sema4D和HER-2在乳腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨Sema4D和人类表皮生长因子受体2(HER-2)在乳腺癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测110例乳腺癌组织中Sema4D和HER-2的表达,并检测肿瘤微淋巴管密度(Microlymphtic vessel density,MLVD).结果 乳腺癌组织中Sema4D和HER-2 蛋白的阳性表达率分别为71.82％ (79/110)和33.64％ (37/110),与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；淋巴结转移阳性组的Sema4D阳性表达率和MLVD值显著高于淋巴结转移阴性组(P＜0.01)；Sema4D和HER-2阳性表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及ER表达状态显著相关(P＜0.05),而与肿瘤大小及PR表达状态无关(P＞0.05).相关分析结果显示Sema4D与HER-2表达呈正相关(r=0.535,P＜0.01)；单因素生存分析显示,Sema4D高表达组的5年生存率(74.19％)高于低表达组(53.16％),其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Sema4D可能对乳腺癌的发生、发展起重要作用.
