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  • 黄芪的醇提有效部位对心肌细胞的保护作用

    作者:贾俊骅;王仓;贾海骅

    目的 观察黄芪醇提有效部位在病毒性心肌炎体外细胞培养模型中的药效作用.方法 柯萨奇病毒感染乳鼠原代心肌细胞后不同时间加入黄芪总提取物和/或病毒,逐日观察心肌细胞搏动次数,细胞病变、MTT染色比较各组间活细胞数的变化,病毒繁殖抑制实验比较TCID50的差别以验证黄芪总提取物的抗病毒活性.实验以盐酸胍作为阳性对照药.结果 黄芪醇提有效部位在体外实验中能有效抑制CVB3引起的细胞病变(P<0.01),加药组比病毒对照组TCID50降低两个以上对数值.结论 黄芪总提取物对体外培养的心肌细胞具有保护作用.

  • 黄芪三萜皂苷通过抑制TGF-β1/Smad2、p38MAPK信号抑制CVB3诱导的心肌纤维化

    作者:张兰;刘晶;刘天龙;张勇;刘小玲;肖云峰;刘小雷

    目的 本文旨在研究黄芪三萜皂苷(astragalus saponins,AST)对CVB3诱导心肌纤维化的保护作用及机制.方法 使用CVB3病毒和BALB/c小鼠制备病毒性心肌炎模型并使用AST进行干预.记录不同处理组小鼠的生存曲线、检测不同干预组小鼠外周血中CK-MB水平、心肌组织HE染色和天狼星红染色检测心肌损伤和纤维化水平及通过western blot和qPCR检测心肌组织中TGF-β1、Smad2及p38MAPK水平以研究AST的作用机制.结果 AST能够显著提高小鼠的生存率,显著降低CVB3诱导的心肌损伤和外周血中CK-MB水平.与CVB3组小鼠比较,AST干预组小鼠心肌组织纤维化面积显著减少.无论是RNA水平还是蛋白水平,CVB3能够显著诱导TGF-β1、Smad2及p38MAPK在心肌组织中的表达,而AST对此具有显著地抑制作用.结论 AST对CVB3诱导的心肌组织纤维化具有显著地抑制作用,这种保护作用与抑制CVB3诱导的TGF-β 1/Smad2、p38MAPK信号在心肌组织中的活化有关.

  • 21-清咽滴丸抗柯萨奇病毒CVB3,CVB5作用的研究

    作者:王小龙;陈霞;迟玮;褚玉晶;李志媛;李晓眠

    目的:探究清咽滴丸及其六种中药成分(甘草、青黛、冰片、诃子、牛黄和薄荷)提取物对柯萨奇病毒B3、B5的抑制作用.方法:采用MTT法检测活细胞生存率,结合观察CPE,在细胞水平上检验清咽滴丸及其六种成分对CVB3、CVB5增殖的抑制作用.取其有效成分后,进一步用血清药理学的方法,检验经机体吸收后药物是否仍然具有抗病毒的效果.结果:在细胞水平上,清咽滴丸及其六种主要成分都对细胞有明显毒性作用,但只有清咽滴丸、甘草、诃子可以抑制CVB3、CVB5在细胞内的增殖.血清药理学进一步验证清咽滴丸、甘草、诃子对CVB3、CVB5有抑制作用.结论:清咽滴丸对CVB3 、CVB5有一定的抗感染能力和治疗效果,其中起主要作用的成分是甘草和诃子,且抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性.

  • 茱萸颗粒体外抗CVB3病毒的实验研究

    作者:朱萱萱;张赤兵;邱召娟;彭青

    茱萸颗粒是我院心内科李七一教授经临床多年摸索,拟定治疗病毒性心肌炎的有效良方.目的:观察茱萸颗粒对CVB3病毒的作用.方法:采用体外抗CVB3病毒和大鼠心肌细胞感染CVB3实验.结果:茱萸颗粒20mg/ml对CVB3感染Vero细胞具有明显保护作用,同时可抑制CVB3毒力.茱萸颗粒0.5mg/ml至4mg/ml可减轻CVB3感染心肌细胞CPE,心肌酶谱显示:茱萸颗粒可明显降低感染CVB3心肌细胞中LDH,LDH1,AST和HBDH释放,减少心肌细胞损坏.结论:茱萸颗粒具有抗CVB3感染和保护心肌细胞的作用.

  • Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用

    作者:徐薇;沈燕;王立新;许从峰;储以微;熊思东

    目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗.将该质粒转染Hela细胞,观察其体外表达情况.以50 μg DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答;隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠,观察攻击后存活情况.结果:制备了直径为80~100 nm的Chitosan-DNA复合物颗粒,体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平.该疫苗滴鼻3次免疫后,不仅诱生了高水平的IgG,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体,第6周抗体P/N值分别达3.5和3.2.特异性细胞免疫应答研究发现,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用,并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组.CVB3攻击后,可保护33.3%小鼠长期存活,而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8.5和10.8天.病理学研究显示:Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润.结论:Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应,具有一定的抗CVB感染的免疫保护力.

  • 苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠模型心肌组织IFN—γ的影响

    作者:运锋;田源;陈会君

    目的:通过观察苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠模型心肌组织中干扰素-γ(Interferon gamma,IFN-γ)水平及其心肌组织病理形态学改变的影响,探讨苏木对病毒性心肌炎的治疗机制.方法:选用清洁级、4周龄近交系纯种健康雄性Balb/c小鼠50只,随机分为3组,苏木乙酸乙酯提取物组20只,模型对照组20只,空白对照组10只,苏木乙酸乙酯提取物组、模型对照组小鼠给予腹腔注射接种半数组织培养感染剂量为10-7/mL的柯萨奇病毒B3(CVB3) Nancy株病毒稀释液0.3 mL.空白对照组小鼠注射同体积的RM1640溶液;接种病毒0.5h后,苏木乙酸乙酯提取物组小鼠给药苏木乙酸乙酯提取物溶液0.2 mL;模型对照组及空白对照组按体质量计算等容量0.2%羧甲基纤维素钠溶液给药,每日1次,连续给药14 d后,小鼠断颈处死并取出心脏,常规石蜡包埋,采用免疫组化法测定小鼠心肌组织IFN-γ的含量,光镜下观察心肌病理形态学改变.结果:与模型对照组比较,苏木乙酸乙酯提取物组小鼠心肌组织IFN-γ的表达水平明显降低(P<0.05).结论:苏木乙酸乙酯提取物能够显著降低CVB3感染小鼠心肌组织中IFN-γ表达水平,从而发挥治疗病毒性心肌炎的作用.

  • 苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡和相关Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

    作者:翟文姬;代洪绪;陈会君

    目的:观察苏木乙酸乙酯提取物对CVB3小鼠心肌细胞凋亡和相关Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨苏木乙酸乙酯提取物在急性病毒性心肌炎的作用机制.方法:50只雄性Balb/c小鼠随机分为3组:空白组10只,苏木乙酸乙酯提取物组(苏木组)20只,模型对照组(模型组)20只.模型组、苏木组每只小鼠腹腔注射1×TCID50为10-7CVB3Nancy标准株病毒液0.3ml,建立VMC小鼠模型,连续给药14天,第14天无菌摘取心脏,浸泡于4%多聚甲醛溶液中.采用HE染色观察心肌病理变化、TUNEL法检测心肌细胞凋亡及免疫组化法检测心肌细胞Bcl-2、Bax的蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组、苏木组小鼠心肌细胞凋亡指数增加,有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,苏木组心肌组织中细胞凋亡指数明显减少,具有显著性差异(P<0.05).Bcl-2蛋白在空白组呈高表达,模型组呈低表达,苏木组较模型组明显增强,呈中表达.Bax蛋白在空白组呈低表达,模型组呈高表达,苏木组较模型组明显减弱,呈中表达.结论:苏木乙酸乙酯提取物能够上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,抑制心肌组织的细胞凋亡,这可能是苏木治疗病毒性心肌炎的作用机制之一.

  • 桂皮醛衍生物的合成及其对CVB3的作用

    作者:刘欣欣;孙晓莉;张松;丁媛媛;王四旺

    目的:合成桂皮醛衍生物,观测其对心肌细胞的毒性及抗CVB3病毒的作用.方法:化学合成6种桂皮醛衍生物,其中3种进行了红外、质谱等结构表征;MTT法检测被CVB3病毒感染和用桂皮醛衍生物治疗后的心肌细胞活性.结果:α-溴代对氨肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛3种桂皮醛衍生物对心肌细胞的半教毒性浓度(TC50)分别为2151.28μ g·mL-1,1475.32μg·mL-1,22460.32μ g·mL-1;对CVB3病毒的半数抑制浓度(IC50)分别为178.94μg·mL-1、173.35μg·mL-1,6045.25μg·mL-1;对CVB3病毒的治疗指数(TI)分别为12.02,8.51,3.71.结论:桂皮醛3种衍生物具有直接抑制CVB3病毒作用,但对病毒的细胞合成和吸附无明显作用.

  • 心肌特异性microRNA修饰型CVB3病毒诱导小鼠免疫保护作用的研究

    作者:何峰;肖宗慧;刘卓;姚海兰;冯淼;刘哲伟

    利用基因组中含肌肉特异性miRNA互补序列的修饰型CVB3病毒感染小鼠,研究修饰型病毒在小鼠体内的复制状况以及诱导小鼠免疫保护作用的能力.前期我们在CVB3m株病毒基因组中插入miRNA-133和miRNA-206的互补序列获得修饰型CVB3病毒,命名为CVB-3*T.以对照组(CVB-CON)和紫外灭活野生型CVB3m株病毒组(UV-CVB3-WT)作为对照,测定各组病毒对小鼠的LD50剂量、CVB-3*T对小鼠的致死率、感染小鼠心脏和胰腺的病毒滴度以及心脏病理损伤情况,并检测小鼠血清中炎性细胞因子及中和抗体表达水平以及免疫后小鼠抗病毒能力.结果显示,CVB-3*T对小鼠的LD50明显高于对照组;以相同剂量病毒感染小鼠,CVB-3*T可以明显改善小鼠的生存率,心肌部位的病毒量较对照组明显降低,心肌处病理损伤减轻,而胰腺部位的病毒滴度无明显改变;CVB-3*T组小鼠血清中IFN-γ和TNF-α的含量较UV-CVB3-WT组明显升高,IL-4含量无差异;免疫后,CVB-3*T可诱发机体产生高效价抗CVB3中和抗体,可提高小鼠抵抗病毒再次感染的能力.修饰型CVB3病毒感染可以降低病毒对心肌的亲嗜性,激发小鼠抗病毒免疫,还可以诱导小鼠产生抵抗病毒再次感染的能力.本研究为探索制备CVB3疫苗新途径提供了实验证据.

  • 生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠脾脏T淋巴细胞影响的研究

    作者:郝金凤;郭亚春

    研究中药生脉饮与黄芩茎叶总黄酮合剂(以下简称生黄合剂)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠免疫调节机制的影响,探讨生黄合剂治疗VMC的免疫调节机制.用柯萨奇病毒B组3型(CVB3)感染BALB/c小鼠建立VMC模型,随机分为正常组、生黄合剂治疗组、生脉饮组、抗病毒口服液组、病毒对照组.药物治疗组均灌胃给药,0.2 ml/10g,一日2次.感染病毒10d后,应用HE染色观察各组小鼠心肌损伤情况及小鼠的生存情况,应用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD3+、CD4-、CD8+T淋巴细胞水平.应用生黄合剂治疗后小鼠各脏器出现的病理性损伤明显减轻,CD3+及CD4+T细胞数量增加(P<0.05),CD4-/CD8+比值明显高于模型组(P<0.05).生黄合剂可通过调节机体的T淋巴细胞比例来发挥其有益的免疫调节作用.

  • 小鼠柯萨奇病毒性心肌炎模型的优化

    作者:熊飞;万方方;钱乾;徐薇

    在两种品系小鼠中建立、优化和规范B组3型柯萨奇病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠模型.首先以100TCID50-10 000TCID50之间剂量的CVB3 Nancy株病毒经腹腔感染易感BALB/c雄性小鼠,通过体重减轻率、死亡率和心脏病理及心肌CK-MB水平,评估建立佳病毒性心肌炎的佳剂量;而后摸索了在C57BL/6小鼠建立病毒性心肌炎的CVB3剂量.通过精细比较发现雄性BALB/c小鼠致心肌炎的佳CVB3病毒滴度数量级在1000TCID50;进一步确定1500TCID50是在雄性BALB/c小鼠中诱导病毒性心肌炎的佳剂量;C57BL/6小鼠不是易感小鼠,但在1500TCID50CVB3感染下也可诱导轻微可见的病毒性心肌炎,便于在多数基因敲除鼠内的病毒性心肌炎研究.本研究为规范病毒性心肌炎模型的建立、为后续病毒性心肌炎机制的深入研究奠定了重要的基础模型.

  • 肿瘤坏死因子α诱导蛋白3对NF-κB信号通路的抑制作用

    作者:桂俊;李桥;熊思东;徐薇

    研究肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(A20)在病毒诱导的NF-κB信号通路中的调控功能.用TNF-α刺激RAW264.7细胞,获得其细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增鼠A20基因,经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后插入pcDNA3.1-myc-His(-).经鉴定,将真核表达质粒pcDNA3.1-A20转染293T细胞.用Western blot方法鉴定A20蛋白的表达.用荧光素酶报告基因的方法检测A20对NF-κB启动子的转录活性的影响.结果显示:成功构建了鼠源A20表达质粒,其在293T细胞后能够有效表达;A20能显著抑制TNF-α上调的NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖效应;并能抑制柯萨奇病毒CVB3上调的NF-κB启动子活性,提示A20可调节病毒介导的炎症信号通路,为进一步研究A20参与抗病毒免疫调节机制奠定了基础.

    关键词: A20 真核表达 CVB3 NF-κB
  • C家族趋化因子XCL 1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用

    作者:岳艳;徐薇;蒋正刚;胡林昆;李康;熊思东

    为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果.将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生.结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答.5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%.3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶.提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生.

  • Chitosan-pcDNA3-VP1 DNA疫苗预防病毒性心肌炎的实验研究

    作者:徐薇;张进平;陈瑞珍;熊思东

    为研究新型chitosan-DNA疫苗预防CVB3病毒性心肌炎的效果,以天然生物多糖chitosan包裹含CVB3主要结构蛋白VP1编码基因的质粒pcDNA3-VP1,制备新型chitosan-pcDNA3-VP1疫苗.以含50μgDNA的该疫苗于0、7、14、21d滴鼻免疫小鼠4次,末次免疫后3周以3×LD50剂量CVB3经腹腔感染小鼠,称量小鼠体重、心脏重,并行心脏HE染色.结果:chitosan-pcDNA3-VP1疫苗滴鼻免疫诱生了高水平的血清特异IgG和肠粘膜IgA;同时诱生了较高强度的特异性CTL活性.以致病毒性心肌炎剂量CVB3感染小鼠7 d后发现:pcDNA3组小鼠100%出现病毒性心肌炎,其心室壁呈现严重灶性坏死和炎性浸润;而chitosan-pcDNA3-VP1组仅16.7%小鼠产生心肌炎,坏死灶少且程度轻.其它病毒性心肌炎体征显示:pcDNA3组体重降幅为4.50%;而chitosan-pcDNA3-VP1组类似正常小鼠,体重略增1.75%;pcDNA3免疫组体重/心脏重比为171.75;chitosan-pcDNA3-VP1免疫组为186.36.提示chitosan-pcDNA3-VP1疫苗滴鼻可诱生全身及粘膜特异免疫,并可有效预防病毒性心肌炎的发生,可能成为CVB3及病毒性心肌炎预防性候选疫苗.

  • 酵母双杂交筛选与CVB33A相互作用的人心脏蛋白

    作者:张静怡;赵颖洁;李秀珍;方舒;何冰清;刘曦;罗军;黄孝天

    目的 以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定.方法 构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等实验将阳性克隆归类,并通过测序、相似性比对分析和回返配合实验去除假阳性蛋白.结果 成功构建诱饵质粒pGBKT7-3A,Western Blot结果表明,pGBKT7-3A重组质粒在酵母菌中成功表达3A融合蛋白;经双杂交筛选和回返配合实验,获得了7个相互作用的蛋白,分别为:兰尼碱受体2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信号肽酶 2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24 protein transport domain containing 4,TMED4),细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),细胞色素c氧化酶亚基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脱氢酶亚基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD).结论 应用酵母双杂交技术,以CVB3 3A为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得7种不同的阳性基因:RyR2 、SPCS2 、TMED4、COX1、COX3、MYH7和 SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能.

    关键词: 酵母双杂交 CVB3 3A
  • 酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白

    作者:刘发娣;余克花;罗达亚;徐秋芳;莫冰;罗军;刘晶星;黄孝天

    目的 以CVB3 VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3 VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定.方法 酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱.结果 在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LIM结构域结合蛋白1), NADH脱氢酶亚单位4.将筛选的GOLGA2 cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用.结论 本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3 VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4.

  • CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制研究

    作者:金桂林;莫冰;刘发娣;徐秋芳;刘昕;应颖;赵颖洁;罗军;黄孝天

    目的 研究CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制,为进一步探讨CVB3的致病机制奠定基础.方法 采用MOI为5的CVB3感染HeLa细胞,免疫荧光双标法检测病毒感染后不同时间点VP1和GM130在细胞中的定位情况,观察细胞高尔基带的变化;同时,选择CVB3感染后不同时间点收集细胞,Bradford法蛋白定量后.Western blot测定VP1、GM130和GRASP65蛋白的表达变化.结果 正常HeLa细胞中GM130和GRASP65免疫荧光呈带状分布,高尔基体结构正常;而CVB3病毒感染HeLa细胞3h后,GM130的荧光呈现散点状分布,高尔基体结构损伤.与此同时,GM130和GRASP65蛋白表达量逐渐下降;而VP1蛋白表达量持续上升,且6h后一直维持在较高水平.结论 CVB3感染引起HeLa细胞蛋白GM130和GRASP65表达量下调,导致GM130和GRASP65荧光带弥散,高尔基带断裂,这可能是CVB3感染导致宿主细胞高尔基体结构损伤的机制之一.

  • 酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白

    作者:张志勤;赵颖洁;夏燕华;王静;项国仕;邹叶青;黄孝天

    目的:从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白VP3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-VP3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-cMyc-VP3融合蛋白自激活,应用酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白。对阳性候选克隆进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析 V P3与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果诱饵质粒pGBKT7-VP3构建成功,检测到BD-cMyc-VP3融合蛋白在AH109中表达,且诱饵蛋白VP3在酵母中不存在自激活,从人心脏cDNA文库中筛选到10个与CVB3 VP3相互作用的蛋白:真核翻译起始因子4A2、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3、肌钙蛋白I3型、平滑肌蛋白3、线粒体乙醛脱氢酶2等。结论本研究成功应用酵母双杂交技术筛选出与CVB3 VP3相互作用的10个蛋白。为研究CVB3引起心肌炎和心肌疾病的分子致病机制提供了一些新的线索。

  • 空心莲子草抗柯萨奇病毒B3的实验研究

    作者:申元英;杨占秋;邱雨石;刘建军;肖红;文利;毛琳

    本文采用微量细胞培养法观察细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE)测定经不同剂量空心莲子草作用后的病毒滴度,用逆转录-聚合物酶链反应(RT-PCR)检测药物作用后细胞裂解液中的病毒核酸(CVB3-RNA),结果药物直接作用组和药物抗病毒吸附组均不能阻止病毒感染宿主细胞,药物抗病毒生物合成组则随培养液中药物浓度加大,细胞裂解液中病毒滴度下降,但CVB3-RNA却一直可检出.结论:①空心莲子草不能直接杀灭CVB3;②空心莲子草不能阻止CVB3吸附、穿入易感细胞;③空心莲子草可阻止CVB3生物合成或/和以后环节发挥抗病毒作用.

  • 孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B3活性

    作者:罗振宇;陈薪研;王小燕;瞿畅;张美英;安卫征;熊盛

    目的 从绿藻孔石莼中分离具有抗病毒活性蛋白多糖提取物. 方法 新鲜孔石莼经pH 7.0的磷酸盐缓冲液提取和硫酸铵沉淀得到粗提取物,大孔树脂层析分离得到蛋白多糖.经紫外扫描、高温高压处理(121℃,15min)和糖苷酶水解测定提取物的性质.MTT法检测蛋白多糖对Hela细胞的毒性,细胞病变法(CPE)检测蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)引起的细胞病变抑制作用.通过样品对细胞的保护作用、对CVB3增殖的影响、对CVB3感染细胞的综合作用,初步研究了样品抗病毒作用的机理.结果 从孔石莼中提取了蛋白多糖,得率为0.5%.毒性试验结果表明,孔石莼蛋白多糖对HeLa细胞的半数中毒浓度TC50大于8mg·ml-1.孔石莼蛋白多糖具有显著的抗CVB3活性,通过试验测得孔石莼蛋白多糖对CVB3主要是预防作用和直接杀灭作用,其IC50为3.7μg·ml-1.结论 从孔石莼中分离到具有抗病毒活性的蛋白多糖,具有很好的抗CVB3活性.

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