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  • 一种新型HIV-1 DNA检测试剂的临床应用评价

    作者:李龙;杜聪;赵芳凝;徐斌;郑敏娜;李宗娜;周宁;龚卉;郭燕;程绍辉;于茂河

    目的 对一种新型HIV-1 DNA检测试剂的临床应用性能进行评价.方法 本实验选择抗体确证实验确诊的HIV-1感染人群、未感染的正常人群血样,及弱阳性样本、不确定样本、特异性样本等比较考核试剂的检测结果与HIV-1感染状态结果(参考《全国艾滋病检测技术规范》2015版)的一致性,验证考核试剂在临床检测中的准确性;同时选择已上市的RNA定量检测试剂盒作为对比试剂进行平行检测,评价考核试剂与HIV RNA定量检测试剂检测结果的差异.结果 本次补充实验考核试剂检测全血样本95例,结果表明,以HIV-1感染状态为相对标准,考核试剂检测的阳性符合率为100%(95%CI:93.94% ~100%),阴性符合率为100%(95%CI:90.26% ~100%),总符合率为100%(95%CI:96.19% ~100%),所得Kappa值为1(95%CI:1.00~1.00),考核试剂对于弱阳性、早期感染不确定标本均可检出,能有效区分抗原抗体试剂检测假阳性标本,特异性样本无假阳性结果.结论 考核试剂检测结果与HIV-1感染状态一致,可以认为与现在我国所采用的HIV-1检测试剂等效,能有效鉴别出感染早期的不确定标本.与RNA定量检测试剂相比,能有效检测出病毒储存库中HIV-1 DNA.

  • 实时荧光定量PCR技术快速评价恒河猴外周血SIV病毒储存库的方法学建立

    作者:朱丽妍;范雪营;谢喆;沈弢;邵一鸣

    目的:实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR)技术快速评估恒河猴外周血细胞中的猴免疫缺陷病毒( SIV)病毒储存库的方法学及初步应用。方法以SIVmac239毒株序列为标准,在gag保守区设计1对引物和TaqMan探针,用于实时定量PCR扩增。 EcoRⅠ和SpeⅠ酶切含有SIVmac239毒株5′端长片段(含SIV-gag区)的质粒p239SpSp5,得到长度为2090 bp的SIV-gag区保守片段,纯化后定量系列标准品以绘制标准曲线。测定SIVmac239毒株感染恒河猴急性期和慢性期的外周血单个核细胞中SIV DNA拷贝数以反映病毒储存库水平,并分析该水平在不同感染状态中的病毒学特征。结果标准品浓度在10~1010拷贝/μl之间与Ct值呈线性正相关。 SIV急性期感染14~22 d可测出高水平的SIV病毒DNA,急性期病毒DNA水平高于慢性期1~2个log水平。相同动物样本的每106个细胞中的病毒DNA水平较其血清中病毒载量低将近1个log左右。 SIV病毒DNA水平与病毒载量比值( DNA/RNA)在慢性感染期显著高于急性期。结论本研究制备的SIV病毒DNA荧光探针定量RT-PCR方法特异性、敏感性高,线性范围广,可用于评估猴免疫缺陷病毒潜伏的病毒储存库水平。higher than those in the acute phase. Conclusion The established TaqMan probe-based real-time fluores-cent quantitative PCR was a highly sensitive and specific assay for the detection of SIV DNA with an advan-tage of wide linear range. It could be used for the quantitative evaluation of latent reservoirs of SIV.

  • NK细胞在HIV感染中的作用:进展和展望

    作者:曾永秦;逄晓莉;汪笛;李蓓;樊立娜;郝禹;李国立;杜娟;赵红心

    NK细胞作为免疫系统的一个重要组成部分,在免疫防御和免疫监视的过程中起着关键作用.NK细胞是重要的抗病毒免疫细胞,识别被感染细胞后,能快速分泌颗粒酶和穿孔素裂解细胞,并分泌促炎症因子如IFN-γ、TNF-α引起更广泛的免疫应答,控制机体病毒的数量.目前研究表明,HIV感染可以引起NK细胞亚群数量及功能的改变,NK细胞也能控制HIV及感染细胞,有助于病毒的清除与控制.抗反转录病毒治疗能在一定程度上恢复HIV感染者CD4+T细胞的数量,将病毒载量控制在低水平,但病毒储存库的存在仍然是HIV治疗所面临的一个巨大的挑战.近对猴免疫缺陷病毒感染的猕猴和HIV感染者的研究发现,存在于B细胞滤泡中的NK细胞可抑制病毒复制、清除储存库,为病毒储存库的清除提供新的研究方向.随着对NK细胞研究的深入,其在HIV感染中发挥的作用也越来越受到重视.本文对NK细胞的表型、功能及其在HIV感染中的改变与作用进行介绍,为今后的研究提供思路.

  • 接受48周高效抗逆转录病毒治疗的艾滋病患者细胞内HIV DNA定量检测及其意义

    作者:郑煜煌;Diallo Mamadou Alius;陈霞;何艳;贺波;贺梅;王红艳;肖水灵;罗艳;姚运海;林一鹤;谌资;周华英

    目的 观察中国艾滋病患者外周血T淋巴细胞及单核细胞作为HIV-1病毒储存库的情况,了解其在接受48周高效抗逆转录病毒治疗( HAART)中的动态变化及其临床意义.方法 35例慢性HIV-1感染的成人在初治HAART的0、24、48周,使用流式细胞仪测定血T淋巴细胞亚群数量,使用磁珠分选法从外周血单个核细胞中分离T淋巴细胞和单核细胞并提取细胞DNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清HIV RNA、用SYBR Green实时PCR对T淋巴细胞和单核细胞内的前病毒HIV DNA载量进行定量测定;使用SPSS 18.0软件对收集的数据进行分析.结果 35例艾滋病患者在HAART初次启动的0、24、48周,外周血HIV RNA水平分别为(4.12±1.41)、≤1.69、≤1.69lg拷贝/ml,CD4+ T淋巴细胞数分别为(196±101)、(321±112)、(392±127)个/μl;在T淋巴细胞中HIV DNA水平分别为(4.03±0.53)、(2.74±1.16)、(2.45±0.41)lg拷贝/106细胞,在单核细胞中HIV DNA水平分别为(2.51 ±0.68)、(2.16±0.34)、(2.03±0.25) lg拷贝/106细胞.统计学分析显示,在48周HAART过程中,外周血HIV RNA水平与CD4+ T淋巴细胞数呈负相关,与T淋巴细胞及单核细胞中的前病毒HIV DNA水平均呈正相关;T淋巴细胞中的HIV DNA下降速度慢于单核细胞;外周血CD4+ T淋巴细胞与T淋巴细胞前病毒HIV DNA载量呈负相关.结论 HIV感染者T淋巴细胞和单核细胞均可作为HIV病毒储存库,而淋巴细胞是更主要的储存库细胞;细胞内HIV DNA水平与血HIV RNA水平变化正相关,与血CD4+T淋巴细胞数呈负相关,T淋巴细胞内前病毒HIV DNA水平变化可能作为HAART中AIDS病程进展的观察指标之一.

  • 组蛋白去乙酰化酶抑制剂激活HIV储存库的研究进展

    作者:白帆;康文;汪春付;孙永涛

    即使是极早期接受规范化抗反转录病毒治疗(ART)的艾滋病病毒(HIV)感染者,HIV也会在CD+4T淋巴细胞中形成病毒储存库.储存库的形成与整合的前病毒的转录沉默相关,且至少部分由组蛋白去乙酰化酶(HDACs)所诱导.HDACs是一组染色质相关的蛋白质,可以调节组蛋白的乙酰化水平以及脱氧核糖核酸(DNA)与转录因子的亲和程度.值得注意的是,通过抑制HDACs的活性,可以有效地激活储存库中的HIV.这一发现衍生出“shock and kill”的设想,可能达到清除储存库的目的,也可能成为HIV功能性治愈的策略之一.

  • HIV-1病毒储存库的清除策略研究进展

    作者:温春燕;冯理智;胡凤玉;蔡卫平

    HAART可有效控制HIV复制,使HIV/AIDS患者生存期延长和死亡率降低,但由于HIV-1病毒储存库的存在,无法根除HIV。此文将介绍HIV-1病毒库的定义、病毒库检测方法及可能的清除机制,包括IFN联合HAART治疗、重新激活静息的HIV感染细胞、采用免疫疗法杀灭潜伏感染的细胞、编辑基因诱导目标细胞产生抗性等,为实现治愈HIV的目标提供参考依据。

  • 高效抗逆转录病毒治疗对HIV感染者外周血病毒储存库的影响

    作者:何惠达;李玉枝;何瑞英;唐漾波

    目的 探讨接受与未接受HAART的HIV-1感染者外周血淋巴细胞亚群内HIV-1病毒储存库的差异.方法 采集及分离21例未经HAART和22例经HAART的HIV-1感染者外周血单核细胞(PBMC),采用磁珠分选法分选出CD4+T细胞、CD8+T细胞和非T细胞亚群,采用高敏感度实时荧光定量PCR法检测患者外周血HIV-1 RNA及上述3类分选后淋巴细胞亚群内HIV-1整合DNA容量(Alu-PCR方法);流式细胞术检测患者血中的CD3+、CD4+、CD8+T细胞数.结果 两组非T细胞中HIV-1整合DNA容量比较差异有统计学意义(Z=-3.326,P<0.01),CD4+和CD8+T细胞中的HIV-1整合DNA容量比较差异均无统计学意义(Z=-1.871、-1.360,P>0.05).未HAART组患者CD4+T细胞中HIV-1整合DNA容量与外周血HIV-1 RNA水平呈正相关(r=0.594,P<0.05),与CD4+T细胞数和CD4+/CD8+比值呈负相关(r=-0.547、-0.482,P<0.05),与CD8+T细胞数无相关性(P>0.05);CD8+T细胞和非T细胞中HIV-1整合DNA与CD4+T、CD8+T细胞数和CD4+/CD8+比值均无相关性(P均>0.05).HAART组患者T细胞亚群中HIV-1整合DNA容量与CD4+T、CD8+T细胞数和CD4+/CD8+比值均无相关性(P均>0.05).结论 HIV-1感染者病毒储存库主要存在于外周血CD4+T细胞中,少量存在于CD8+T细胞和非T细胞中;接受HAART可能并不能有效减少T细胞中的病毒储存库.

  • 艾滋病功能性治愈的挑战

    作者:陈蓉;卢洪洲

    艾滋病功能性治愈是指艾滋病患者在停止抗逆转录病毒治疗后,体内病毒低于检测下限且机体免疫功能维持正常的一种治疗目标.目前关于功能性治愈策略的研究主要面临三个巨大的挑战:病毒储存库难以清除,免疫治疗无法长时间抑制病毒,以及干细胞移植和基因疗法的疗效不确定.病毒储存库难以清除艾滋病功能性治愈是根本的障碍.只有不断加深对病毒储存库的了解,结合激活储存库并清除、治疗性疫苗、广谱中和抗体、改造干细胞后自体移植、基因疗法等研究方向的不断尝试,才有可能达到功能性治愈的目标.

  • PCR-荧光探针法在成人HIV/AIDS接受长期高效抗逆转录病毒治疗后的应用研究

    作者:魏柯雯;王继宝;高先;张园园;姚均;段松

    目的 探讨PCR-荧光探针法检测成人艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后病毒储存库及病毒储存库与治疗效果的关系.方法 对91例规范接受HAART治疗5~10年的HIV-1患者采集外周血标本进行横断面研究.通过分支DNA (bDNA)法检测血浆HIV-1 RNA病毒载量;用PCR-荧光探针法检测外周血HIV-1 DNA水平;用流式细胞术检测外周血CD4+T细胞数量;对数据进行统计学处理.结果 91例接受5~10年HAART治疗的HIV-1患者外周血HIV-1 RNA均低于检测下限(<50 CPs/ml);细胞中HIV-1前病毒DNA的平均含量为1.77±0.76(lgCPs/106个细胞);CD4+T细胞平均数量为(479.56±188.11)个/μl.结论 在血浆HIV-1 RNA低于检测下限时,PCR-荧光探针法能够检测出经过长期HAART治疗(5~10年)后成人HIV/AIDS的前病毒HIV-1 DNA,对于抗病毒治疗疗效的判断以及病情进展的预测都有重要的意义.

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