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基于同轴流技术的肝组织生物3D打印研究
生物三维打印为医疗领域提供全新的技术可能,可广泛应用于制造人工组织和器官.人工组织的功能和尺寸大小受限于组织的血管化,可利用同轴流挤出系统制造封装肝细胞的中空细丝,结合生物3D打印系统,叠层制造含微通道网络的肝组织.首先搭建集成化的同轴流生物3D打印系统,研究材料挤出速率、材料浓度等参数对中空细丝尺寸及出丝速度的影响;然后以肝细胞株C3A为材料,打印含多层管网机构的仿生肝组织;后,对含微通道的肝组织进行分组培养,利用细胞活死染色法检测第24、48、72 h肝细胞在灌流组和非灌流组中的细胞存活率.实验表明,同轴流3D打印的组织,中空细丝之间有效融合,支架内部的立体微通道网络完整;打印过程对肝细胞损伤较小,中空细丝中的肝细胞存活率达90％以上;灌流组和非灌流组在培养72 h后,细胞存活率有显著的差异,证明对微通道灌流可以促进组织内部的物质交换,提高微通道周围肝细胞的存活率.研究提出打印方法和灌流系统,为人工组织的血管化以及培养方式提供全新的思路.
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生物反应器培养Vero细胞制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗
目的 在生物反应器中用微载体连续灌流培养Vero细胞,制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗.方法 在50 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的DMEM培养基,接种Vero细胞,当细胞密度约达5× 106个/ml时,感染肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)毒种,接毒后72 h开始收获,连续收获17 d,收获的病毒原液经浓缩、灭活、Sepharose 4FF凝胶层析纯化后制备疫苗,检测病毒滴度、抗原含量及残余牛血清白蛋白、DNA、宿主蛋白含量,并接种新西兰家兔,检测疫苗效力.结果 确定佳Vero细胞接种浓度为1×105个/ml,病毒佳MOI为0.015.利用优化后的培养条件收获的病毒滴度在6.5～8.0 logCCID50/ml,且各项检测指标均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定.结论 用生物反应器微载体灌流培养制备Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗的小试工艺可行.
关键词： 生物反应器 灌流培养 Vero细胞 Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗 -
30 L生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂
目的 应用30 L填充床生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA).方法 将表达rht-PA的CHO细胞株用含10%胎牛血清的IMDM复苏并放大培养,接种至30 L生物反应器中,并采用Biocommand Plus 软件系统实时监控.先用含血清的培养基生长培养,再更换为无血清培养基进行表达培养.在整个培养过程中,采用灌流培养方式,每日采样测定培养上清中葡萄糖浓度,隔日测定rht-PA的表达水平及生物学活性.采用Lysine-Sepharose 4B和Zn~(2+)-Sepharose 4B两步亲和层析法纯化rht-PA,并检测纯化产物的比活、产率及纯度.结果 整个培养过程持续51 d,包括生长培养6 d,表达培养45 d,平均日灌流量为46.7 L,高达60 L,共收获表达培养液约2 100 L;rht-PA的平均表达水平为15.15 mg/L,高可达19.25 mg/L,生物学活性平均约为8 000 IU/ml;表达培养至第13天时,葡萄糖消耗量达高水平(15.97 g/L·d);纯化的rht-PA比活达6×10~5 IU/mg,产率为63%,纯度达99%以上.结论 应用30 L填充床生物反应器可实现重组CHO细胞的长时间连续培养及产物rht-PA的高效表达.
关键词： 人组织型纤溶酶原激活剂 重组CHO细胞 生物反应器 灌流培养 -
器官培养角膜保存的现状及展望
器官培养角膜保存法经过不断改进和发展,临床应用取得了满意的效果,故越来越受到研究者的关注,现就该保存法近年来的发展作一综述,并对目前仍需解决的问题及其前景进行分析和展望.
