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艾美耳球虫转基因研究进展
艾美耳属Eimeria球虫是寄生于多种动物的一类细胞内寄生原虫。近年来随着荧光报告基因及药物筛选基因的应用，艾美耳属球虫的转基因研究取得了较为可喜的突破。转基因艾美耳球虫为球虫生物学、免疫学和遗传学研究提供了很好的研究材料。本文将对艾美耳球虫转基因研究取得的突破、所使用的转基因及鉴定技术，以及转基因球虫的潜在应用作一综述。
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艾美耳球虫转基因技术研究进展
艾美耳属球虫是一类胞内寄生原虫,其造成的球虫病对畜禽养殖造成巨大经济损失.近年来随着分子生物学的飞速发展,艾美耳球虫的转基因研究取得较大突破,使转基因技术成为推动球虫研究的有力工具.本文综合近几年转基因球虫的研究成果,对艾美耳球虫转基因技术的建立与优化以及转基因球虫的潜在应用作一综述.
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斯氏艾美耳球虫兰州株Rhomboid基因的克隆及原核表达
目的 克隆并原核表达斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)兰州株Rhomboid基因.方法 通过分析基因保守区设计引物,采用RT-PCR方法与3'RACE技术相结合,扩增获得兔斯氏艾美耳球虫Rhomboid基因cDNA全序列,并对其进行序列分析；将获得的Rhomboid基因克隆至原核表达载体pET-28a中,转化E.coli Rosetta (DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 Rhomboid基因开放阅读框全长774 bp,编码257个氨基酸残基,预测蛋白质相对分子质量和等电点分别为28 120和8.64,与鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tellan)Rhomboid蛋白氨基酸序列的同源性为84.44％;构建的重组原核表达质粒pET-Rhomboid经双酶切和测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,并可与兔抗E.stiedai阳性血清发生特异性反应.结论 成功克隆并表达了Rhomboid基因,为其生物学功能及以其作为斯氏艾美耳球虫疫苗候选基因的研究奠定了基础.
关键词： 艾美耳球虫 Rhomboid基因 RACE 原核细胞 基因表达 -
顶复器原虫钙依赖蛋白激酶的研究进展
钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase,CDPKs)全称为钙依赖的而钙调素不依赖的蛋白激酶,在结构上具有明显的特征,从N端到C端存在4个结构域,依次为可变区、催化区、连接区和调控区.研究发现CDPKs存在于植物、绿藻、纤毛虫及顶复器原虫中,参与调控顶复器原虫(如疟原虫、弓形虫、球虫等)的运动,以及参与对宿主细胞的黏附和入侵,在入侵宿主细胞中发挥了重要功能.由于在脊椎动物体内没有发现CDPKs,顶复器原虫的CDPKs将有可能作为新治疗药物的靶标和新型疫苗的靶分子.本文介绍了CDPKs的结构与功能,以及疟原虫、弓形虫、球虫的CDPKs研究现状.
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"检科Ⅰ号"消毒剂抑制体内外鸡球虫发育的研究
[目的]探讨"检科1号"消毒剂对鸡球虫的抑制作用.[方法]用1∶19"检科Ⅰ号"消毒剂在体外与柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株卵囊分别作用10min、20min、30min和60min,观察孢子化率;将消毒剂作用1h以及未经消毒剂处理的卵囊分别感染14日龄的AA肉鸡后,用"检科Ⅰ号"消毒剂进行带鸡消毒(1∶30舍内超低容量喷雾消毒,同时1∶150或1∶300饮水消毒),对感染后144～168h之问排出的粪便进行克粪便卵囊计数,168h对鸡只称重,屠宰后对盲肠病变记分.[结果]作用10min和60min的卵囊孢子化率分别为67.01%(P＜0.05)、63.99%(P＜0.01),比空白对照76.45%的孢子化率低;带鸡消毒对各组鸡感染球虫后的增重无明显影响,且能够抑制球虫在鸡体内的发育,减轻肠道病交,减少粪便中球虫卵囊的排出量.[结论]"检科Ⅰ号"消毒剂能抑制鸡球虫的体内外发育.
