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线粒体转录终止因子蛋白家族的表达以及在MPTP/MPP+诱导下的表达变化
目的 探讨线粒体转录终止因子(MTERFs)蛋白家族在组织和细胞中的表达以及在神经毒素MPTP/MPP+诱导下的表达变化.方法 取正常C57BL小黑鼠的脑、肝、肾组织,以及人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y、人心肌细胞HCM、人肝细胞L-02,检测MTERFs的蛋白表达情况;通过MPTP/MPP+构建帕金森病(PD)动物/细胞模型,检测MTERFs的蛋白表达变化情况.结果 MTERFs在小鼠脑中和SH-SY5Y细胞中蛋白表达水平较高;MPTP/MPP+诱导的PD模型中,MTERF3蛋白表达水平明显降低.结论 在小鼠脑和SH-SY5Y细胞中,MTERFs表达较高;MPTP/MPP+诱导下MTERF3蛋白表达明显降低,影响了线粒体转录水平,这可能参与了帕金森病发生的过程.
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帕金森病小鼠模型脑黑质区热休克蛋白的表达
目的应用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病小鼠模型,观察中脑黑质部位热休克蛋白(hsps)的表达.方法175只C57BL小鼠分为4组:MPTP组,56只小鼠连续5d腹腔注射MPTP[30mg/(kg·d)],制备帕金森病小鼠模型;生理盐水组,56只小鼠连续5d腹腔注射生理盐水0.3ml/d(容积与MPTP组同);假手术组,56只小鼠仅用注射器刺穿腹部皮肤;另7只小鼠作为正常对照组.分别于后1次注射后4h(视为0d)及第2、4、7、10、14、21、28天处死小鼠,应用免疫印迹法(Western blot)和免疫组化检测方法观察热休克蛋白的动态变化以及在中脑的定位;经原位杂交法检测MPTP对hsp40和hsp70 mRNA表达的影响.结果免疫印迹法检测显示,MPTP组小鼠于药物注射后4h即出现hsp70表达升高,两周内与正常对照组、生理盐水组和假手术组相比差异均有显著性意义(P＜0.01),其中以第2,4天为表达高峰,之后缓慢下降,至第21天降至正常水平.MPTP组小鼠在注射后2～14d,hsp40/HDJ-1表达水平高于其余各组(P＜0.01),第4天为表达高峰.HDJ-2表达不如HDJ-1明显,仅第4天与另3组相比差异有显著性意义(P＜0.01).MPTP组小鼠在注射后第2～4天,hsp90表达水平高于正常对照组、生理盐水组和假手术组(P＜0.01);生理盐水组和假手术组小鼠hsp90的表达与正常对照组差异无显著性意义(P＞0.05).免疫组化染色显示,MPTP组小鼠hsp70和hsp40在整个黑质区均呈阳性染色;而hsp90是在黑质致密部呈阳性染色;免疫染色的变化趋势与免疫印迹法检测一致.而mRNA原位杂交检测结果表明,MPTP组小鼠的黑质致密部hsp70和hsp40 mRNA表达增加,其变化趋势亦与免疫印迹法检测结果一致.结论在经MPTP制备的帕金森病小鼠模型中,脑黑质区热休克蛋白的转录和翻译均有增加,增加的热休克蛋白可能参与拮抗MPTP的毒性而起到神经细胞保护作用.
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经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究
目的研究经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对帕金森病(Parkinson disease,PD)模型小鼠中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用.方法利用1-甲基-4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)制备成年小鼠PD模型,通过单侧纹状体定位注射GDNF,取中脑黑质节段,做连续冠状石蜡切片,结合免疫组织化学染色方法,观察各组酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、钙结合蛋白(calbindin D28k,CB)的表达,光镜观察并细胞计数,统计学分析.结果在模型制备的第4、6天,单侧纹状体定位注射GDNF后,小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量显著多于注射PBS组.结论经纹状体注射GDNF对成年PD小鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用,且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关.
关键词： 胶质细胞系源性神经营养因子 多巴胺能神经元 1-甲基4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 -
雷沙吉兰对MPTP诱发急性帕金森病小鼠模型的神经保护和行为学改善作用
通过免疫组化方法检测黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化,HPLC-ECD检测纹状体内多巴胺(DA)及其代谢产物含量变化,Western blot检测黑质酪氨酸羟化酶的表达,探讨雷沙吉兰对1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发C57BL/6小鼠帕金森病模型的疗效和行为学影响.结果显示,腹腔注射MPTP的小鼠出现一系列的急性行为学改变,雷沙吉兰(20 mg/kg)治疗后黑质致密部酪氨酸羟化酶阳性细胞数目较模型组显著增加,纹状体内DA及DA代谢产物HVA和DOPAC含量也明显升高,雷沙吉兰明显改善MPTP诱导帕金森小鼠的运动行为学障碍,对帕金森小鼠模型的多巴胺系统具有保护作用.
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尼克酰胺对帕金森病模型小鼠的保护作用
目的:观察尼克酰胺对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的小鼠帕金森病(PD)模型中多巴胺能神经元的保护作用,并初步探讨其可能的作用机制.方法:在MPTP(每天30mg/kg×5 d,i.p.)注射前1h腹腔注射尼克酰胺(500 mg/kg),后1次注射后5天观察小鼠运动能力的改变,检测纹状体多巴胺含量,并分析小鼠全脑及纹状体中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮合酶(NOS)的活性变化.结果:1)尼克酰胺能显著改善MPTP小鼠的自主运动能力(P＜0.01),但对游泳、爬杆和悬挂等行为没有显著影响；2)尼克酰胺能显著减轻MPTP诱发的纹状体多巴胺含量的降低(P＜0.01)；3)全脑的LDH和NOS活性在各组之间没有显著差别,但纹状体的LDH和NOS活性在MPTP处理的小鼠中显著升高(P＜0.01),尼克酰胺能显著降低MPTP引起的LDH和NOS活性升高(P＜0.01),并且与对照组相比没有显著区别(P＞0.05).结论:尼克酰胺可以有效减轻MPTP诱发的帕金森病小鼠模型中多巴胺能神经元的损伤,这种保护作用可能与降低神经元的坏死和抑制NOS活性有关.
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klotho基因对MPTP诱致小鼠黑质神经元损伤的保护作用
将C57BL/6小鼠分成klotho基因转基因型+生理盐水对照组(A组)、Idotho基因转基因型+1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)组(B组)、野生型+生理盐水对照组(C组)、野生型+MPTP组(D组).B、D组皮下注射MPTP,A、C组皮下注射等体积生理盐水.注药后对小鼠进行行为学观察,用免疫组化法观察小鼠黑质神经元酪氨酸羟化酶(TH)染色阳性细胞数.结果 A、B组黑质致密带(SNc)TH阳性细胞数比较无统计学差异,C、D组比较有统计学差异(P<0.01).提示klotho基因对MPTP制备的C57BL/6小鼠帕金森病模型多巴胺能神经元有保护作用.
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慢性帕金森病小鼠模型的建立及其行为学稳定性研究
目的 探讨慢性MPTP帕金森病小鼠模型的建立方法及其行为学稳定的评价. 方法 小鼠先腹腔注射辅佐剂二丙苯磺胺(250mg/kg),0.5h后皮下注射MPTP(15mg/kg),每周2次,5周内总共注射10次.第7周开始观察小鼠的行为学变化,每周1次,连续观察6周.然后用免组化方法观察黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞数的变化. 结果 模型组与对照组(腹腔及皮下注射生理盐水)相比,造型结束后连续6周表现出稳定而明显的行为困难,第6周对照组与模型组的行为得分分别为(1996.7±281.3)分和(1369.0±149.4)分,(P＜0.05),开始制模起12周后黑质部位酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞仍显著减少,对照组黑质部位TH阳性细胞数为(30.4±4.7)个,平均灰度为182.29±8.67,而模型组则分别为(20.5±3.9)个和(158.88±13.88)个,2组间差异显著(P＜0.01),显示出帕金森动物模型的典型特征. 结论 联合使用MPTP与Probenecid可以成功制作帕金森病慢性小鼠模型,且该模型在造型结束后至少可稳定6周以上.
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G-CSF对帕金森病小鼠运动能力和黑质纹状体神经元的影响
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中脑黑质致密部(SNpc)及纹状体(STR)多巴胺(DA)能神经元的影响.方法:正常健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、MPTP组及MPTP+ G-CSF组,采用腹腔注射MPTP法制作小鼠PD模型,MPTP+G-CSF组于后一次MPTP注射后再腹腔注射G-CSF.爬杆实验观察小鼠的行为学改变;尼氏染色技术观察各组小鼠黑质致密部神经元数量及形态学变化;免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(TH)在各组小鼠中脑黑质致密部及纹状体的表达;Western Blot法检测各组小鼠中脑TH蛋白的表达量.结果:与对照组相比,MPTP组小鼠较对照组爬杆用时显著延长(P＜0.05),尼氏染色显示黑质致密部神经元数量显著减少(P＜0.05),黑质致密部、纹状体TH表达量显著减少(P ＜0.05);MPTP+ G-CSF组较MPTP组爬杆用时显著缩短(P＜0.05),神经元丢失减少(P＜0.05),神经元形态较完整;与MPTP组比较,MPTP+ G-CSF组黑质致密部、纹状体TH表达水平显著增高(P＜0.05).结论:G-CSF能够改善PD小鼠运动功能,减少黑质致密部多巴胺能神经元丢失,增加TH表达水平.
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蝎毒耐热蛋白保护MPTP小鼠空间学习记忆障碍的一氧化氮机制
本研究的目的是探讨蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)处理的伴有空间学习记忆障碍的Parkinson病(PD)小鼠的保护机制.实验共分4组:(1)正常对照组(NS+NS),C57BL/6小鼠颈部皮下注射生理盐水(NS)连续8 d,同时腹腔注射生理盐水,连续8 d;(2)阴性对照组(NS+SVHRP):C57BL/6小鼠颈部皮下注射生理盐水,连续8d,同时腹腔注射SVHRP(0.01 mg/kg)连续8 d;(3)PD模型组(MPTP+NS):C57BL/6小鼠颈部皮下注射MPTP(20 mg/kg)连续8 d制备小鼠PD模型,腹腔注射生理盐水连续8 d;(4)蝎毒治疗组(MPTP+SVHRP):C57BL/6小鼠颈部皮下注射MPTP(20mg/kg)连续8 d,给药后腹腔注射SVHRP(0.01 mg/kg)连续8 d.行为学和形态学研究结果表明,正常对照组和阴性对照组的各项实验数据均无明显差别.爬竿和游泳实验结果表明,与正常对照组相比较,MPTP处理小鼠爬竿(P＜0.01)和游泳(P＜0.01)分数明显降低.Morris水迷宫实验中,MPTP处理小鼠寻找平台潜伏期明显延长(P＜0.01);向目标游泳时间所占百分比明显降低(P＜0.01),而向对侧象限游泳时间所占百分比明显增加(P＜0.01).免疫细胞化学染色结果表明,PD模型组小鼠中脑内黑质致密部呈酪氨酸羟化酶免疫反应阳性的神经元的数目较正常组明显减少(P＜0.01);而海马内神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫反应阳性的神经元数(P＜0.01)以及NO含量(P＜0.01)均较正常组明显增多.行为学结果表明,与PD组比较,SVHRP处理的PD小鼠的运动协调能力(P＜0.01)和空间学习记忆能力(P＜0.01)均具有明显改善.
关键词： 1-甲基4-苯基-1 2 3 6-四氢吡 Parkinson病 一氧化氮 蝎毒耐热蛋白 神经保护
