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USP22 siRNA通过TIMP-2抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭
目的 探讨泛素特异性蛋白酶22(USP22)调控基质金属蛋白酶组织抑制物-2( TIMP-2)对人结肠癌细胞侵袭的影响.方法 Western blot检测USP22在不同结肠癌细胞系的表达,选定高表达USP22的SW480细胞用于后续实验;将SW480细胞分为对照组(NC siRNA)和转染组;实时荧光定量PCR( RT-qPCR)检测对照组及转染组 Hif-1α、Hif-1β、cdc42、RhoA、Smad7、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达;RT-qPCR和Western blot检测对照组及2种转染组中USP22及TIMP-2蛋白的表达;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力.结果 USP22在SW480细胞中表达量较高(P<0. 05);与对照组相比敲低USP22基因后,TIMP-2表达及SW480细胞侵袭能力均下降( P<0. 05);敲低TIMP-2基因后,USP22表达无明显变化,SW480细胞侵袭能力下降( P<0. 05).结论 USP22可能通过调控TIMP-2的表达抑制人结肠癌细胞的侵袭与转移.
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USP22在肿瘤发生发展中的作用研究进展
USP22是一种泛素特异肽酶,属于DUBs家族,是hSAGA复合物的一个亚单位,参与组蛋白去泛素化、乙酰化进而参与hSAGA复合物所调节的基因转录与表达等.目前认为USP22是癌死亡标签之一,并且它与癌的增殖、侵袭转移和治疗预后相关.USP22与肿瘤发生发展的机制主要与Polycomb家族成员之一BMI-1和MYC、FBP1、TRF1等多种因子有关,这一特点使其可能成为肿瘤干细胞标志物之一.
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USP22和Nanog在结肠癌组织中的表达及临床意义
目的:研究USP22和Nanog在结肠癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:采用免疫组织化学法检测USP22和Nanog在80例结肠癌组织,35例结肠腺瘤组织及40例癌旁正常结肠组织中的表达.结果:USP22在结肠癌中的阳性表达率明显高于结肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织(P＜0.05),但结肠腺瘤和癌旁正常组织的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05),Nanog在癌旁正常组织,结肠腺瘤和结肠腺癌中的阳性表达率差异均有统计学意义(P＜0.05).USP22和Nanog的表达与Dukes分期,组织学分级,淋巴结转移以及浸润深度均有关(P＜0.05); USP22和Nanog 在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.509,P＜0.01).结论:USP22和Nanog的表达与结肠癌的发生发展有关,二者在结肠癌的细胞增殖、浸润和转移中有协同作用.他们有望成为结肠癌的早期诊断指标和治疗靶点.
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USP22、MTA1及Ki-67蛋白在食管鳞癌中的表达及相关性
目的:探讨泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22),转移相关基因1(metastasis associated gene 1,MTAl)及细胞增殖核抗原(nuclear associated antigen,Ki-67)在人食管鳞癌组织中的表达、与肿瘤生物学行为的关系以及他们三者之间的相关性.方法:采用免疫组织化学的方法检测USP22、MTA1及Ki-67在人食管鳞癌组织、癌旁组织及正常组织的表达,探讨上述三者在不同组织中表达的特点及他们相互之间的相关性.结果:(1)USP22的阳性表达率:食管鳞癌组织68.18％,癌旁组织36.36％,正常组织15.91％,两两组间比较,均P＜0.05,差异均具有统计学意义;USP22蛋白的阳性表达率与肿瘤浸润深度及组织学分级有显著的关系,而与淋巴结转移、年龄、性别无关;(2)MTA1的阳性表达率:食管鳞癌组织61.36％,癌旁组织31.82％,正常组织6.82％,两两组间比较,均P＜0.05,差异均具有统计学意义;MTA1蛋白的阳性表达率与淋巴结转移、肿瘤浸润深度及组织学分级有显著的关系,而与年龄、性别无关;(3)Ki-67的阳性表达率:食管鳞癌组织70.45％,癌旁组织43.18％,正常组织11.36％,两两组间比较,均P＜0.05,差异均具有统计学意义;Ki-67蛋白的阳性表达率与淋巴结转移、肿瘤浸润深度及组织学分级有显著的关系,而与年龄、性别无关;(4)USP22蛋白的表达与MTA1蛋白的表达呈正相关;USP22蛋白的表达与Ki-67蛋白的表达呈正相关;MTA1蛋白的表达与Ki-67蛋白的表达无相关性.结论:USP22、MTA1及Ki-67参与食管癌的发生发展、浸润转移,三者联合检测将有助于食管癌的诊断,可更准确地判断食管癌的生物学行为,并有望成为食管癌基因治疗的新靶点.
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USP22及其可能靶点在结直肠癌中的表达研究
目的：探讨USP22及其可能靶点在大肠癌组织中的表达及意义。方法应用RT-PCR方法检测82例大肠癌组织中USP22及其可能靶点的mRNA表达情况。结果 USP22 mRNA的表达与BMI-1 mRNA（r＝0．790，P＜0．0001），c-Myc mRNA（r＝0．528，P＜0．0001）、cyclin D2 mRNA （r＝0．657，P＜0．0001），但是与p16INK4a mRNA（r＝0．103，P＝0．358）和p14ARF mRNA（r＝0．039， P＝0．731）无关。结论 USP22可能是通过不依赖INK4a/ARF的方式，而通过调节Akt的活性来控制细胞周期的进展。
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USP22在结直肠癌中的活化状态研究
目的：探讨USP22蛋白在大肠癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学检测192例大肠癌组织中USP22蛋白的表达情况。结果在结直肠癌发生及转移过程中USP22的表达量逐步上调，USP22的表达与患者的性别（P＝0．031）、肿瘤大小（P ＝0．003）、浸润深度（P ＜0．0001）、淋巴结状态（P＝0．005）及Ki-67的表达（P＜0．0001）高度相关。结论 USP22蛋白可作为一种判断大肠癌恶性程度及侵袭转移的生物学指标。
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咪达唑仑下调USP22抑制结肠癌SW480细胞增殖
目的 探讨咪达唑仑(midazolam)抑制人结肠癌SW480细胞增殖的可能机制.方法 不同浓度咪达唑仑处理SW480细胞后,甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)及BrdU掺入比色法检测细胞活性和增殖情况,Western blot及RT-PCR检测USP22蛋白及mRNA表达;构建USP22干扰稳定细胞株,沉默USP22表达,Western blot检测USP22及细胞周期相关蛋白的表达水平.结果 咪达唑仑呈时间和剂量依赖性抑制SW480细胞增殖.咪达唑仑浓度依赖性抑制USP22表达.si-USP-22能有效干扰USP-22蛋白及mRNA水平的表达,达到沉默USP-22的效果.干扰USP22后,肿瘤细胞增殖受抑制,CDK抑制蛋白P21及P27表达上调,干扰USP22可能通过CDKI/RB通路介导SW480细胞增殖抑制.结论 咪达唑仑抑制人结肠癌SW480细胞增殖,可能机制为其下调USP22,通过CDKI/RB通路介导SW480细胞增殖抑制.
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USP22 ShRNA慢病毒载体的构建及鉴定
目的：构建并鉴定USP22基因ShRNA慢病毒载体,为进一步研究USP22基因在鼻咽癌中的作用机制奠定基础。方法针对USP22基因的编码序列设计并合成2条特异性干扰序列,序列两端含有限制性内切酶位点HpaⅠ和X hoⅠ。寡核苷酸链退火生成寡核苷酸双链,5'端磷酸化后将含有酶切位点的寡核苷酸双链克隆到pLL3.7慢病毒表达载体。连接产物经转化、培养,提取其质粒,提取出来的质粒经HpaⅠ和XhoⅠ酶切电泳鉴定,鉴定正确的质粒进行测序。构建成功的慢病毒表达载体pLL-USP22-shRNA与包装载体质粒混匀共转染于293T细胞。通过荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)情况,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果成功构建慢病毒表达载体pLL-USP22-shRNA。与包装载体质粒共转染293T细胞后测定慢病毒滴度为4×107 TU/ml。结论本实验应用相关技术成功构建USP22 ShRNA慢病毒载体,为进一步研究USP22基因的生物学功能奠定了基础。
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大肠癌组织中联合检测USP22和BMI-1表达的临床意义
目的:探讨大肠癌组织中联合检测USP22和BMI-1表达的临床意义.方法:应用定量RT-PCR检测82例大肠癌手术切除标本及相应的癌旁组织中USP22及BMI-1 mRNA的表达水平,并分析其表达的差异,研究其表达水平与大肠癌患者临床病理特征及预后的关系.结果:USP22、BMI-1 mRNA在大肠癌及癌旁组织中均可被检出,大肠癌组织中USP22、BMI-1 mRNA的相对表达水平均显著高于癌旁组织(P＜0.01),且二者之间呈显著正相关(r=0.708,P＜0.01).USP22、BMI-1 mRNA的高表达均与大肠癌的美国癌症分期联合委员会(AJCC)分期密切相关(P＜0.01).COX回归分析显示USP22及BMI-1的共表达可作为大肠癌患者预后的独立预测因素(P＜0.01).结论:USP22和BMI-1的共同激活可促进大肠癌的进展,并预示预后不良.
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USP22在恶性肿瘤中的研究进展
去泛素化酶从不同底物上移除泛素，起到调控蛋白质活性和维持细胞内环境稳态的作用。去泛素化酶在细胞的转录后修饰过程中发挥重要作用，当去泛素化酶调控机制出现异常则会引起不同类型疾病的发生。而异常表达特异性去泛素化酶22（ USP22）常与癌症预后不良有关。本文就USP22在肿瘤中的研究现状进行综述。
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USP22在胃癌中的表达及其临床意义
目的 检测USP22在胃癌组织中的表达,并探讨其与胃癌患者临床病理特征及预后的相关性.方法 收集125例胃癌患者的存档蜡块,应用免疫组化染色法检测USP22在正常胃黏膜组织及胃癌组织中的表达,并采用SPSS 13.0软件对结果进行统计学分析.结果 USP22在胃癌组织的阳性表达率高于正常组织;USP22的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小无相关性,而与肿瘤分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移以及MCC临床分期相关(P＜0.05);USP22阴性表达的患者5年生存率明显高于阳性表达组(P＜0.05).结论 USP22在胃癌的发生、发展过程中起到了一定作用,USP22蛋白高表达的胃癌患者预后差.
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USP22和PTEN在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 探讨USP22在非小细胞肺癌(NSCLC)中的活化状态并分析其可能的靶因子PTEN影响NSCLC的发生.方法 收集200例NSCLC患者的蜡块,免疫组化法检测USP22和PTEN的表达;临床相关指标通过统计学分析其表达的临床意义.结果 200例NSCLC中USP22和PTEN的阳性表达率分别为66.5％和42.5％,USP22与PTEN的表达呈负相关(r=-0.365,P＜0.0001).USP22高表达同时PTEN低表达时,与病理类型(P =0.002)、pN分期(P=0.014)和AJCC临床分期(P=0.01)以及总生存期(P ＜0.0001)和无病生存期(P ＜0.0001)密切相关.并且,多变量Cox比例风险模型分析提示,年龄(P=0.006),分化程度(P=0.006),AJCC临床分期(P =0.004),USP22高表达同时PTEN低表达组(P＜0.0001)是患者总生存期(OS)的独立预后指标;同时,年龄(P =0.030),病理类型(P =0.041),分化程度(P=0.041),AJCC临床分期(P =0.002),USP22高表达同时PTEN低表达组(P＜0.0001)是患者无病生存期(DFS)的独立预后指标.结论 USP22-PTEN的表达模型有望成为NSCLC诊断、分期、预后的分子表型.
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siRNA沉默USP22表达对神经母细胞瘤细胞增殖作用的影响
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific protease 22,USP22)对入神经母细胞瘤细胞增殖的影响和作用机制.方法 合成USP22 siRNA及阴性对照siRNA(control siRNA),用脂质体Lipofectamine 2000转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞和SK-NSH细胞,且设立阴性对照组和实验组.通过Western blot法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组神经母细胞瘤细胞的USP22的蛋白表达和mRNA表达水平的变化.采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测USP22siRNA对两组神经母细胞瘤细胞的增殖抑制率.通过原位凋亡TUNEL法检测USP22 siRNA对两组神经母细胞瘤细胞凋亡情况.流式细胞仪定量检测USP22 siRNA对神经母细胞瘤细胞凋亡及细胞周期分布的影响.结果 与设立的阴性对照组相比较,实验组中神经母细胞瘤细胞中USP22蛋白和mRNA表达显著下降(P＜0.05),神经母细胞瘤细胞增殖明显受到抑制(P＜0.05),凋亡率随时间延长明显上升(P＜0.05),细胞周期中G2/M期的细胞比例明显增高.结论 USP22基因在神经母细胞瘤细胞的增殖中发挥重要的作用,采用siRNA技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖,其机制可能与调节细胞周期及细胞凋亡相关.
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USP22和Akt在胃癌中的表达及临床意义
目的 检测USP22与Akt在胃癌组织中的表达,并探讨二者在胃癌组织中表达的相关性及二者共表达与胃癌患者临床病理特征及预后的关系.方法 收集125例胃癌患者的存档蜡块,应用免疫组化染色法检测USP22与Akt在胃癌组织中的表达.结果 USP22与Akt在胃癌组织中的表达呈正相关(P ＜0.05);USP22与Akt共表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小无相关性,而与肿瘤分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移以及AJCC临床分期相关(P＜0.05);USP22与Akt非共表达组患者5年生存率明显高于共表达组(P＜0.05).结论 USP22可能为Akt的上游基因,通过激活Akt通路来促进胃癌的进展.
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去泛素化酶USP22与肿瘤关系的研究进展
去泛素化酶USP22为人类基因组编码的50多种特异性蛋白酶之一,属去泛素化酶的亚家族,是一种重要的去泛素化酶.USP22通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻止其降解.研究表明,USP22可通过多种途径影响肿瘤的发生及发展,如细胞的凋亡和自噬、肿瘤信号通路、细胞周期的调节和DNA损伤修复等,而且抑制USP22表达可影响细胞的增殖、成瘤和浸润.该文就USP22与肿瘤发生及发展的关系作一综述.
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肿瘤细胞新的标记基因——USP22
2005年,G.V.Glinsky等[1-2]利用mRNA微集阵列(microarray)技术,对不同组织来源的肿瘤细胞进行大量分析,归纳出11个在多数细胞中普遍高表达的标记基因,包括BMI-1、cyclin B1、FGFR-2、USP22、BUB1、HEC1、GBX2、Ankyrin3、RNF2、Mad2、Ki67等.以上基因在肿瘤发生、进展中扮演着重要的角色,不仅编码促使肿瘤生长的蛋白质,并且其表达程度与肿瘤转移的潜能、化疗耐药性及患者预后密切相关,因此,也被认为是肿瘤细胞的标记基因[3].其中去泛素化酶DUB基因家族成员USP22尚不为研究者熟知,本文就USP22的研究进展作一综述.
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泛素特异性肽酶22对肝癌细胞凋亡的影响及机制研究
目的 探讨泛素特异性肽酶22( USP22)对肝癌细胞凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 采用RT-PCR和Western blotting分别检测人正常肝Chang liver细胞和人肝癌HepG2细胞中USP22 mRNA及蛋白表达.利用脂质体转染USP22-siRNA靶向沉默USP22基因,并采用RT-PCR和Western blotting检测其沉默效果;流式细胞仪检测USP22基因沉默对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blotting检测USP22基因沉默对HepG2细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3( Cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved caspase-9)、细胞周期素 D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2 (CDK2)表达的影响.结果 USP22基因在人肝癌HepG2细胞中表达明显高于人正常肝Chang liver细胞(P<0. 05);siRNA干扰HepG2细胞后,与对照组相比,干预组中USP22 mRNA和蛋白的表达均显著降低(P<0. 05),而阴性组差异无统计学意义(P>0. 05).靶向沉默USP22基因后,与对照组相比,干扰组中G0/G1期细胞所占比例显著升高,S期和G2/M期细胞所占比例显著下降,细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0. 05);阴性组与对照组间G0/G1期、S期、G2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率相比,差异无统计学意义(P>0. 05).与对照组相比,干预组中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、CyclinD1和CDK2蛋白的相对表达量均显著降低(P<0. 05),阴性组与对照组间差异无统计学意义(P>0. 05).结论 USP22基因沉默可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与周期蛋白Cyclin D1、CDK2及凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9的表达下降有关.
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膀胱移行细胞癌中候选肿瘤干细胞标记物USP22mRNA水平定量分析及其与肿瘤分级的关系
目的:研究肿瘤干细胞标记物USP22 mRNA在不同级别膀胱移行细胞癌和正常膀胱黏膜中的表达差异.并探讨其与肿瘤分级,临床分期的关系.方法:分别抽提不同级别的膀胱移行细胞癌组织标本和正常膀胱黏膜组织标本的总RNA,经RT为cDNA后,采用qRT-PCR法检测USP22 mRNA的表达情况.结果:正常膀胱黏膜组织中USP22的表达明显低于膀胱肿瘤组织,几乎不表达;不同级别膀胱肿瘤组织中,低度恶性潜能的乳头状尿路上皮癌和低级尿路上皮癌中USP22的表达要明显高于其在高级尿路上皮癌中的表达;特别是Ⅲ级膀胱移行细胞癌组,USP22的表达仪略高于其在正常膀胱黏膜中的表达.结论:USP22可能是正常干细胞向肿瘤干细胞恶变的关键调节分子,可能成为一个新的诊断移行上皮癌侵袭性的有效指标.干扰其蛋白质合成将成为一个抗肿瘤生长的新靶点.
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usp22和ki67在大肠癌组织中的表达及其临床意义
目的 检测usp22和ki67在大肠癌组织中的表达,探讨其与大肠癌发展的关系以及两者的相关性.方法 采用免疫组织化学法检测usp22和ki67在大肠癌和正常肠组织中的表达.结果 在大肠癌中,usp22的阳性表达率以及染色强度均随组织分化程度的降低而呈现出上升趋势(P＜0.05).ki67的阳性表达率随分化程度的降低而呈现出上升趋势(P＜0.05).usp22与ki67的表达呈现正相关性.结论 在大肠癌组织中usp22的高表达与ki67的表达升高显示二者存在正相关,对大肠癌的发生发展起一定促进作用.
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口腔鳞状细胞癌组织中USP22的表达及其意义
目的:检测USP22在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中的表达,并探讨其与OSCC的发生、发展及预后的相关性.方法:应用免疫组化染色法检测USP22在正常口腔黏膜、OSCC组织及转移淋巴结组织中的表达,并采用SPSS17.0软件对结果进行统计学分析.结果:USP22在OSCC组织中的阳性率和染色强度随组织分化程度的降低而呈增高趋势(P＜0.05),USP22在转移的淋巴结组织中的表达较OSCC组织更为明显(P＜0.05),OSCC病人术后5年生存率随着USP22表达的升高而降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:USP22在OSCC的发生、发展及转移起到一定作用.USP22蛋白的高表达提示病人有一个差的预后.
