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益肾疏肝方对胚胎着床障碍小鼠子宫基质金属蛋白酶的影响
目的 探讨益肾疏肝方促进胚胎着床的可能作用机制.方法 雌、雄ICR小鼠按照3:1的比例合笼饲养,次日清晨8:00检查雌鼠阴道栓,以见栓当日作为妊娠第1天.将见栓小鼠50只随机分为正常对照组、模型组、黄体酮组和中药低、高剂量组,每组10只.除正常对照组外其余各组小鼠妊娠第4天颈背部皮下注射米非司酮溶液(0.03 mg/kg)建立胚胎着床障碍模型.从妊娠第1天开始,模型组、正常对照组每日给予生理盐水0.2ml/只灌胃,黄体酮组给予黄体酮溶液(浓度2 mg/ml)每日皮下注射20μl/只,中药低、高剂量组每日分别给予3.9g/ml、15.6 g/ml的益肾疏肝方灌胃0.2ml/只,连续给药7天.妊娠第8天处死小鼠,记录孕鼠数和着床总胚泡数,计算着床率和平均着床胚泡数;取下子宫,免疫组化法和Western blot法对子宫中MMP-2和MMP-9表达和蛋白含量进行检测.结果 与正常对照组比较,模型组孕鼠数明显减少,着床率显著降低,平均着床胚泡数明显减少(P＜0.05);与模型组比较,中药低、高剂量组和黄体酮组的平均着床胚泡数增高(P＜0.05).中药高剂量组、黄体酮组子宫中MMP-2的表达和蛋白含量较模型组显著升高(P＜0.05);中药低、高剂量组和黄体酮组子宫中MMP-9的表达和蛋白含量明显高于模型组(P＜0.05).结论 益肾疏肝方可以增加胚胎着床障碍小鼠的平均着床胚泡数,提高受孕率,可能与上调子宫中MMP-2和MMP-9的表达有关.
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孕康口服液对胚胎着床障碍大鼠的安胎作用
目的:通过建立胚胎着床障碍致流产模型,探讨已上市中成药孕康口服液的安胎作用.方法:将妊娠大鼠分为6组:正常对照组(NC),模型组(MG),地屈孕酮组(DT),孕康口服液低、中、高3个剂量组(YK-L、YK-M、YK-H),每组11只.自妊娠第1日起,每天灌胃给药,DT组灌胃剂量为3.02 mg/kg,孕康口服液各组灌胃剂量分别为4、6、9 ml/kg,NC组、MG组给予等体积的纯化水,连续10 d.妊娠第3日,除NC组外,其余各组按5 mg/kg体质量颈背部皮下注射米非司酮造成胚胎着床障碍模型.妊娠第10日,各组腹主动脉采血,酶联免疫法测定血清卵泡刺激素(FSH)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素(IL-4);取连胎子宫观察胚胎着床数目,HE染色观察子宫病理变化.结果:与NC组相比,MG组胚胎着床数目和血清FSH、IL-4水平均显著降低(P<0.05,0.01),并出现子宫腺上皮增生、腺腔内炎性细胞浸润等病理变化.与MG组相比,YK-M、YK-H组均能显著性升高胚胎着床数目和血清FSH、IL-4水平(P<0.05,0.01);孕康口服液各剂量组均能明显改善模型大鼠子宫腺上皮增生、腺腔内炎性细胞浸润等病理变化.各组间血清IFN-γ水平无明显差异.结论:孕康口服液可能通过升高胚胎着床障碍大鼠血清性激素FSH和免疫细胞因子IL-4水平,改善子宫内膜病理变化,提高胚胎着床数目,从而发挥安胎作用.
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抑抗汤对胚泡着床障碍小鼠子宫白血病抑制因子表达的影响
目的 观察抑抗汤对小鼠胚泡着床障碍的影响.方法 将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组、中药组和对照组.中药组按照抑抗汤灌胃剂量进一步分为低、中、高剂量组,分别每日以0.4、0.6、0.8 ml抑抗汤灌胃；对照组每日0.8ml生理盐水灌胃.模型组和中药组于第4天晨皮下注射0.8 g/L米非司酮溶液0.1ml.第5天观察各组小鼠妊娠率和平均胚泡着床数,ELISA法检测小鼠宫腔冲洗液白血病抑制因子(LIF)蛋白浓度,实时荧光定量PCR检测子宫内膜LIF表达水平.结果 模型组妊娠率和平均胚泡着床数较正常组明显下降(P＜0.01).中药组妊娠率和平均着床胚泡数均较模型组呈剂量依赖性增加(P＜0.05).中药组LIF蛋白和mRNA水平较模型组升高.结论 抑抗汤可能通过促进LIF表达促进胚泡着床.
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应用正交设计探讨肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中药物的佳配比
目的 探索羟基脲及米非司酮在肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中的佳配比.方法 以羟基脲、米非司酮作为影响因素,选择L9(34)表安排实验,观察羟基脲及米非司酮不同剂量配比组合对小鼠肾虚胚胎着床障碍模型的影响.结果 研究范围内,当羟基脲因素A取1水平、米非司酮因素B取1水平时(AⅠBⅠ),妊娠第5天、第8天时子宫内胚胎着床点数、子宫指数是少的.在肾虚胚胎着床障碍小鼠模型的制作中,米非司酮的贡献度大,羟基脲的贡献度次之,一定程度上,胚胎的着床点和子宫指数与羟基脲和米非司酮的用量成反比.结论 综合多项指标,在研究范围内,AⅠBⅠ较为合适作为肾虚胚胎着床障碍小鼠模型用于药物干预研究.
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针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜CCR2的影响
目的观察针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜趋化因子受体CCR2表达的影响。方法将72只孕鼠随机分为正常组（N ）、胚胎着床障碍组（M ）、针刺治疗组（A ）和黄体酮治疗组（W ），每组随机再分为第6天组（D6）、第8天组（D8）、第10天组（D10）。其中M 组、A 组和W 组大鼠妊娠第1天给予米非司酮麻油溶液造模，N 组仅给予等量麻油溶液。同时，A 组固定并每天针刺三阴交、后三里，N 组和M 组仅固定，W 组肌肉注射黄体酮，直至处死。用免疫组织化学法、Western blot 和 Real-time PCR等方法测定着床点子宫内膜 CCR2的表达。结果与 N 组相比，M 组大鼠子宫内膜 CCR2蛋白和mRNA的表达均明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与 M 组相比，A 组和 W 组大鼠子宫内膜CCR2蛋白和 mRNA 的表达则明显增高（P＜0.05）。结论针刺能上调胚胎着床障碍大鼠母胎界面CCR2的表达，从而促进胚胎的着床和胎盘的形成。
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肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型的建立与评价
目的 复制肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型并对其进行评价.方法 应用羟基脲、米非司酮造模,选择L9(34)表安排实验,根据羟基脲及米非司酮不同剂量配比组合及对照组共10组,检测各组模型的超氧化物歧化酶(SOD)、雌二醇(E2)、孕激素(PRG)及体质量等指标,并观察小鼠精神状态、行为、大小便、毛发色泽、反应情况等肾虚症状.结果 研究范围内,当羟基脲取一水平、米非司酮取一水平时,妊娠第5天时血清中SOD、E2、PRG均是少的,妊娠第8天时血清中E2及PRG是少的.随着药物的代谢和怀孕动物自身机制调节,羟基脲和米非司酮各自对怀孕动物血清中雌二醇水平、孕激素的抑制力大为减弱.在肾虚胚胎着床障碍小鼠模型的复制中,羟基脲的贡献度大,米非司酮的贡献度次之,一定程度上,SOD、E2、PRG与羟基脲和米非司酮的用量成反比.结论 综合多项指标,在研究范围内,AⅠBⅠ较为合适作为肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型,既能反应胚胎着床障碍西医病的特点,又能反映中医肾虚证候特征.
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补肾安胎中药对着床障碍小鼠炎性因子含量的影响
目的:研究补肾安胎中药对着床障碍小鼠炎性因子含量的影响.方法:将受孕大鼠随机分为正常组、模型组、保胎灵组和坤元汤组,从妊娠第1天开始,保胎灵组和坤元汤组分别用保胎灵和坤元汤灌胃0.3mL,连续灌胃6天,正常组和模型组予0.3mL生理盐水,第3、4天小鼠注射吲哚美辛油剂复制小鼠着床障碍模型,第6天末次给药后收集小鼠血清及子宫组织,使用试剂盒检测小鼠血清及子宫组织血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)和一氧化氮(NO)的含量.结果:与模型组比较,坤元汤组小鼠子宫重量、子宫指数及着床位点数均提高(P＜0.05)；坤元汤明显降低着床障碍小鼠IFN-γ和NO含量(P＜0.05),显著升高IL-10含量(P＜0.05).结论:补肾安胎中药坤元汤可能通过调节炎性因子IFN-γ、IL-10及NO的含量促进胚胎着床.
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助孕增膜方对肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜容受性及相关因子时序表达的影响
[目的]探讨中药助孕增膜方对肾虚胚胎着床障碍小鼠着床窗期子宫内膜胞饮突及整合素β3和骨桥蛋白时序表达的影响.[方法]复制肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型.造模成功后,将200只妊娠小鼠随机分为正常组、模型组、中药组(给予助孕增膜方灌胃,剂量为44.4 g·kg-1·d-1)、西药组(给予戊酸雌二醇灌胃,剂量为0.02 mg·kg-1·d-1),每组50只.采用扫描电镜观察各组小鼠在妊娠第4天晚21:30-22:00时(第1时间点,T1)和妊娠第5天上午9:30-10:00时(第2时间点,T2)2个时间点子宫内膜表面胞饮突的表达.另在4组小鼠中,每组取5只小鼠于合笼第0、2、4、6、8天5个时间点取小鼠子宫内膜,并采用免疫组化和实时PCR检测各组小鼠着床窗期整合素β3和骨桥蛋白的蛋白表达及其mRNA的时序表达.[结果](1)正常组T1时子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突,T2时则表达大量发育完全的胞饮突;模型组胞饮突表达迟滞于正常组,中药组胞饮突的表达接近于正常组.(2)着床窗期模型组整合素β3和骨桥蛋白的蛋白表达和mRNA表达水平显著低于正常组(P<0.01),中药组整合素β3和骨桥蛋白的蛋白表达和mRNA表达水平较模型组显著增加(P<0.01),接近正常组水平(P>0.05).(3)正常组小鼠整合素β3和骨桥蛋白mRNA在围着床期子宫内膜的表达规律:合笼日表达较弱,随后逐渐增强,在妊娠第4天(小鼠胚胎植入当天)达到高峰(P<0.01),之后表达逐渐减弱,妊娠第8天仍高于非孕水平(P<0.05).中药组、西药组及模型组小鼠整合素β3和骨桥蛋白mRNA在围着床期子宫内膜上的时序表达规律类似于正常组.[结论]整合素β3及骨桥蛋白可作为子宫内膜容受性的客观标志.中药助孕增膜方能使着床窗期肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜胞饮突的表达同步,并上调整合素β3和骨桥蛋白的表达,改善子宫内膜容受性.
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温肾活血方改善胚胎着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究
目的:探讨温肾活血方对胚胎着床障碍模型小鼠妊娠结局及子宫内膜容受性的影响.方法:由米非司酮建立胚胎着床障碍模型小鼠200只,随机分为正常(N)组、模型(M)组、中药低剂量(L)组、中药高剂量(H)组和孕酮(P)组各40只.妊娠第1～4日早晨,H组、L组小鼠灌胃给予0.3 mL水煎剂,N组、M组小鼠每日以等体积生理盐水灌胃,P组小鼠以配制的黄体酮-橄榄油剂按照2mg/只进行颈后皮下注射,妊娠第4日上午9:00造模,N组小鼠颈后皮下注射0.1mL橄榄油溶剂,其他各组小鼠颈后皮下注射米非司酮-橄榄油剂0.1 mL(1.93 mg/kg米非司酮).分别于妊娠第4日、第5日、第8日上午9:00脱颈椎处死每组各10只小鼠,检测妊娠率、着床位点数、子宫内膜组织形态、雌激素(E2)及其受体(ER)、孕激素(P)及其受体(PR)、胞饮突.结果:N组着床位点数多于其它各组,H组与N组比较无统计学差异(P＞0.05).子宫内膜发育水平N组优,H组接近N组,M组滞后.妊娠第4日,N组的E2、P和ER、PR的表达水平与M组比较无统计学差异(P＞0.05),低于P组与H组(P＜0.01);妊娠第5日,N组的E2、P和ER、PR的表达水平显著高于M组(P＜0.05),N组的ER水平与P、H、L三组比较无统计学差异(P＞0.05),N组的PR高于P组和L组(P＜0.05),与H组比较均无统计学差异(P＞0.05).P组P水平高于其它组(P＜0.01),E2水平与ER结果相吻合.M组胞饮突发育滞后,H组胞饮突发育程度接近N组,P组偶见退化期胞饮突.结论:温肾活血方能够改善子宫内膜容受性,且其效果优于黄体酮.
