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水蛭素对特发性肺间质纤维化大鼠肺组织中纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)mRNA及蛋白表达的干预研究
目的:本研究选用天然水蛭素作为研究药物,采用RT-qPCR、Western blot方法检测IPF大鼠肺组织中PAI-1 mRNA及蛋白表达,观察水蛭素干预大鼠IPF的作用,探讨其可能的作用机制,为临床运用水蛭治疗IPF提供理论依据,从而拓宽IPF的治疗途径.方法:选取180只SPF级同月龄健康的Wistar大鼠,随机数字表法抽取18只大鼠作为空白(K)组,剩余162只大鼠气管内注射博莱霉素统一造模,造模成功后随机选取108只分为模型(M)组、激素(J)组、水蛭素高剂量(G)组、水蛭素中剂量(Z)组、水蛭素低剂量(D)组、水蛭素中剂量联合激素(ZJ)组,每组18只,造模成功后第2天开始给药,分别在造模后7 d、14 d、28 d处死大鼠并收集标本,采用Western blot法检测大鼠肺组织中PAI-1的蛋白表达,RT-qPCR法检测PAI-1的基因表达.结果:不同时间点,M组大鼠肺组织PAI-1基因和蛋白表达均强(P<0.01),而且随着时间的推移,表达强度逐渐增强,说明肺纤维化处于发展趋势,28天大鼠肺间质纤维化程度重.各用药组进行比较发现:在7 d、14 d、28 d,ZJ组大鼠肺组织PAI-1基因和蛋白表达均弱(P<0.01),G组次之(P<0.01),J组表达仅次于G组(P<0.01),J组表达显著低于Z组和D组(P<0.01),而Z组和D组相当(P>0.05).结论:本实验证明,水蛭素具有治疗大鼠肺间质纤维化的作用,通过降低PAI-1基因和蛋白表达水平从而起到治疗大鼠肺间质纤维化是其作用机理之一.同样发现,水蛭素的治疗作用有明显的剂量依赖性,而水蛭素联合激素治疗大鼠肺间质纤维化的疗效更佳.
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大肠癌HT-29细胞亚系与母系转移能力和相关因子的比较
目的:探讨大肠癌细胞转移能力与肿瘤相关因素的关系.方法:用结肠癌HT-29亚系HT-29c和HT-29d细胞在裸大鼠体内建立转移模型,比较其与母系的转移能力.用ELISA法测定3个大肠癌细胞系的尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)及纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)含量;用免疫组化技术检测癌胚抗原和3-磷酸肌醇激酶(PI3-Kinase)在体内外的表达;用流式细胞仪测定癌胚抗原表达.结果:在裸鼠体内HT-29d细胞的肝转移率明显高于母系HT-29细胞,转移累及的脏器增多.在体外培养中, HT-29d细胞的uPA 及PAI-1含量明显高于HT-29和WiDr细胞.在裸鼠体内,HT-29d细胞的PI3-Kinase表达明显高于HT-29和WiDr细胞.结论:经裸鼠体内筛选的大肠癌HT-29细胞亚系表现出增强的肿瘤转移能力.UPA 、 PAI-1的含量及PI3-Kinase的表达与肿瘤转移能力有关.
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吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响
目的:探讨吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响.方法:用LPS或2.5%葡萄糖分别与不同浓度的吲哚美辛作用于体外培养的人腹膜间皮细胞,采用酶联免疫吸附法检测上清液中纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)的含量.结果:腹膜间皮细胞在2.5%葡萄糖或10 mg/L LPS刺激下分泌FN及PAI-1明显增加,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);0.15 mg/L及0.75 mg/L吲哚美辛可明显抑制2.5%葡萄糖或10 mg/L LPS刺激的腹膜间皮细胞24 h内分泌FN及PAI-1蛋白水平(P<0.05).结论:吲哚美辛可抑制人腹膜间皮细胞合成细胞外基质,在腹膜纤维化的防治中有潜在的应用价值.
