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  • 2003-2014年浙江省宁波市肠炎沙门菌分子分型及耐药特征研究

    作者:杨元斌;宋启发;闫鹏;高红;叶硕

    目的 分析浙江省宁波市2003-2014年肠炎沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型及耐药特征.方法 采用PulseNet China网络实验室的标准方法,对2003-2014年间分离的68株肠炎沙门菌进行Xba Ⅰ和BlnⅠ酶切分型,使用BioNumerics软件对菌株的PFGE图谱进行聚类分析;使用纸片扩散法检测菌株对10种抗生素的耐药性.结果 68株肠炎沙门菌经Xba Ⅰ酶切分为8个PFGE带型.其中JEGX01.NB0001型为优势型别,共53株,带型相似度90%以上的菌株占95.6% (65/68),2003年和2013年超过80例以上的食源性暴发案例的肠炎菌株经双酶切聚类证实存在100%的同源性.所有肠炎沙门菌对抗生素耐药率为氨苄西林23.5%、强力霉素4.4%、氨曲南、头孢吡肟和头孢噻肟均为2.9%、氯霉素和复方新诺明均为1.5%,对庆大霉素、环丙沙星、亚胺培南均敏感,发现2株多重耐药菌.结论 宁波市散发和暴发的肠炎沙门菌分离株之间的分子带型差异度小,引发食源性暴发的流行株克隆之间存在流行病学关联.目前肠炎沙门菌对抗生素的耐药率处于较低水平,仍需加强对多重耐药株的监控.

  • 陕西省急性弛缓性麻痹病例中柯萨奇病毒A组4型的基因特征

    作者:王东艳;徐艺;张勇;祝双利;司源;严冬梅;朱晖;杨倩;冀天娇

    阐明从陕西省2006~2010年急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例中分离的柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CV-A4) VP1编码区的基因特征,探索其在我国流行的优势基因型及其与AFP病例之间的关系.本研究通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对连续5年从AFP病例中分离的68株非脊灰肠道病毒(non-polio enteroviruses,NPEVs)进行分子定型,其中7株鉴定为CV-A4 (7/68,10.3%);使用特异性引物扩增CV-A4 VP1编码区并进行核苷酸序列测定分析和基因进化分析,将CV-A4划分为A(基因组1)、B(基因组2)和C三个基因型,其中C基因型又划分为C1(基因组3)和C2(基因组4)两个基因亚型.中国分离的CV-A4均位于第4基因组,属于C2基因亚型,提示其可能为中国大陆CV-A4的优势基因亚型;7株陕西CV-A4毒株依据分离年代的不同位于不同的三个小进化分支里,且和来自山东和吉林两省的邻近年份的CV-A4毒株位于同一小分支,提示7株陕西CV-A4分离株和它们存在共同进化和共循环.在无脊髓灰质炎时代应进一步加强监测CV-A4在AFP病例NPEV所占的比例和动态变化.

  • 多对型特异性引物巢式PCR检测湖南省乙肝病毒基因型

    作者:温志立;谭德明

    目的:采用多对型特异性引物,通过巢式PCR法检测湖南省乙肝患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况.方法:根据从前Sl基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物,并将其中8条内引物分成A、B两组,分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV,然后将第2轮PCR的两组产物分别用3%琼脂糖进行电泳,根据PCR产物片断大小直接判定HBV基因型.与目前常用的PCR-RFLP法进行了比较,并做重复试验以证实该方法的可靠性和准确性.用此法检测了220例湖南籍慢性乙肝血清中的HBV基因型,以了解湖南人群的HBV基因型分布情况.结果:多对型特异性引物巢式PCR与PCR-RFLP法的检测结果完全一致,重现率(100%);湖南人群HBV基因分型结果为B型190例(86.4%)、C型30例(13.6%).结论:这种新的巢式PCR分型法能清晰直观地辨别HBV基因型,结果准确可靠.用此法证实了湖南人群的HBV优势基因型以B型为主,C型次之.

  • 宁波地区幽门螺杆菌优势基因型及其与耐药性的关系

    作者:寿佩勤;费红军;岑叶平;王布江;柯海萍;方夏英

    目的 探讨宁波地区幽门螺杆菌(Hp)优势基因型及其与Hp耐药性的关系.方法 选取宁波地区慢性胃炎和消化性溃疡患者的胃镜活检标本,对40株临床分离菌株,采用PCR法检测Hp的cagA、vacAm1、vacAm2、vacAs1a和babA2基因型;采用纸片扩散法作药敏试验.结果 40株Hp中cagA、vacAml、vacAm2、vaeAs1a和babA2基因型的阳性率分别为100%、52.5%、85.5%、92.5%和57.5%;慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的Hp基因型的检出率差异均无显著性(P<0.05);Hp对甲硝唑的耐药率高于阿奇霉素(P<0.05),并显著高于阿莫西林和克拉霉素(P<0.01);Hp的甲硝唑耐药株与敏感株之间cagA、vacA和babA2基因型分布差异无显著性(P>0.05).结论 宁波地区慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的Hp以cagA、vacAm2、vacAs1a、babA2、vacAs1a/m2基因型为主.Hp基因亚型的确定尚不能对Hp根治疗法中抗生素的选择提供帮助.

  • 广州东部HPV基因型分布及其优势基因型E6/E7核酸序列分析

    作者:余南;辜为为;刘红娥;孙洪青;詹希美;陈小坚

    目的 研究广州东部人乳头瘤病毒基因型分布特征,并获取优势基因型早基因E6/E7的核酸序列,进行变异分析,为本课题组下一步新型分子诊断方法的研发提供目标序列.方法 通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞标本的人乳头瘤病毒基因分型检测,分析本地区基因型分布特征,确定优势基因型;根据GenBank序列设计特异性引物,用于扩增优势基因型的早基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析.结果 通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞标本的分型检测,检测了536份宫颈脱落细胞标本, HPV阳性占27.2%(146/536),其中多基因型感染占29.5%(43/146),高危型感染中52型为优势基因型,频数达23.3%(37/159).HPV感染与52型HPV感染的年龄分布显示低年龄组(即A组,≤25岁)妇女高.3份52型HPV感染阳性标本的核酸模板,通过特异性引物均成功扩增出大小接近750bp的目的 序列;分别克隆到T载体上并测序,得到3条人乳头瘤病毒52型早表达基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析;3条序列经BLAST分析,与GenBank数据库HPV52型序列 (Accession: X74481)的E6/E7编码区序列一致性均为99%,三条序列(EU924143、EU924144、EU924145)存在6种碱基置换,其中2种可引起所编码的相应氨基酸残基改变.结论 本研究可确认广州东部地区妇女宫颈感染HPV中A组(17-25岁)具有高的感染率;宫颈感染HPV的优势基因型为52型;我们通过克隆策略得到了与HPV高危型52型X74481高度相似的E6/E7编码序列,为课题组后续进行的HPV致病机制和新型分子检测方法研究提供了重要基础.

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