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  • 仙茅水提取物灌胃给予大鼠后入血成分研究

    作者:霍秀颖;张晓萍;马长华;张冰;刘小青;段天璇;翟华强;黄建梅

    目的:测定并确认仙茅水提取物的入血成分.方法:大鼠灌胃给予仙茅水提取物,以HPLC测定不同血浆样品的色谱图,确认入血成分的色谱峰,以HPLC-MS-MS和NMR确定入血成分的结构.结果:苔黑酚葡萄糖苷和仙茅苷是仙茅水提取物的主要成分,含量分别为4.26%和0.96%.其中,苔黑酚葡萄糖苷以原型吸收入血,而仙茅苷等其他成分在本实验色谱条件下未从血中检测到.仙茅苷原型没有入血的原因可能是其在胃中很快被降解为其他成分.结论:仙茅的入血成分为苔黑酚葡萄糖苷,为仙茅的药效物质基础研究以及进一步的体内代谢研究提供参考.

  • 高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量

    作者:陆惠文;朱炳辉;梁颖康

    目的:建立中药材仙茅中仙茅苷含量的反相高效液相色谱法.方法:甲醇为溶剂,超声提取,Sep-Pak C18柱净化,色谱柱Intertsill ODS-3,流动相甲醇-水-冰醋酸(45∶80∶1),流速1.0 mL*min-1,检测波长283 nm.结果:平均回收率为99.2%,RSD=1.7%(n=5),6个不同来源的仙茅药材中仙茅苷的含量在0.11%~0.35%.结论:可作为仙茅药材的质量控制方法.

  • 高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量

    作者:潘馨;郭素华

    目的建立高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量.方法 Nova-pakC18(250 mm×4.6 mm,10 μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(40∶60),流速为1.0 mL*min-1,检测波长为275 nm.结果仙茅苷在0.348 5~2.788 μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=2×106X+34 221(r=0.999 9)),平均回收率为100.07%,RSD为0.83%.结论本法简便,快速,灵敏,准确,重现性好,可作为仙茅的质量标准.

  • HPLC法测定调经促孕丸中仙茅苷、淫羊藿苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA

    作者:朱艳琴;殷勤红;王文辉;杨俊;杨朝芬

    目的 建立测定调经促孕丸中仙茅苷、淫羊藿苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的方法.方法 采用HPLC法测定,Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长270nm;体积流量为1.0 mL/min;柱温35℃.结果 4个成分线性关系良好,各成分的平均回收率为97.3%~99.4%.结论 本方法简便、快速,结果准确,可用于调经促孕丸的质量控制.

  • 仙茅苷对老年痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马BDNF/TrkB表达的影响

    作者:隋韵声;田力;滕伟禹

    目的 探讨仙茅苷对老年痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B(BDNF/TrkB)表达的影响.方法 36只健康成年SD大鼠,随机分为对照组、模型组与仙茅苷组,每组12只.采用皮下注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35构建痴呆模型大鼠,仙茅苷灌胃8周后,Morris水迷宫方法观察各组大鼠的学习记忆能力,免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组大鼠海马BDNF与TrkB的表达,realtime PCR方法检测各组大鼠海马BDNF mRNA与TrkB mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠的平均潜伏期明显延长,探索次数明显减少;与模型组相比,仙茅苷组大鼠的平均潜伏期明显缩短,探索次数明显增加.模型组大鼠海马BDNF与TrkB mRNA与蛋白表达水平显著低于对照组;而仙茅苷组大鼠在给予治疗后显著高于模型组.结论 仙茅苷能够提高老年痴呆模型大鼠学习记忆能力,可能与激活BDNF厂rrkB信号通路相关.

  • RP-HPLC法同时测定明目颗粒中淫羊藿苷和仙茅苷含量

    作者:郭妍;殷莉莉;廉英;张蕾

    目的:采用反相高效液相色谱法同时测定明目颗粒中淫羊藿苷和仙茅苷的含量.方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-1.2%冰乙酸(B)为流动相进行梯度洗脱.梯度洗脱程序为:0~10 min,8%~15%A;10~15 min,15%~25%A;15~25 min,25%~30%A;25 min~50 min,30%A.检测波长为283 nm,柱温30 ℃,流速1.0 mL/min,进样量:10 μL.结果:淫羊藿苷在进样量为0.02~0.18μg范围内线性关系良好,Y=0.595X+1.17,r=0.999 5;仙茅苷在进样量为0.04~0.36μg范围内线性关系良好,Y=0.614X+2.737,r=0.999 5.淫羊藿苷和仙茅苷平均加样回收率符合含量测定的要求.结论:该方法准确、简单、灵敏,可用于明目颗粒中淫羊藿苷和仙茅苷的含量测定.

  • 仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷在Caco-2细胞模型中吸收的机制

    作者:鞠成国;艾雪;贾坤静;吴琦;贾天柱

    目的 研究仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷在人结肠癌细胞Caco-2细胞模型中的吸收机制.方法 利用Caco-2细胞模型研究仙茅苷(curculigoside)、苔黑酚葡萄糖苷(orcinol glucoside)的双向跨膜转运特征,通过高效液相色谱法测定二者的质量浓度,计算其表观渗透系数(Papp),考察时间、药物质量浓度对二者吸收和转运的影响.结果 仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷在Caco-2细胞模型中,各自在细胞绒毛面Apical (AP)和基底面Basolateral (BL)的双向转运基本相同,随着药物浓度的增加转运速率在减小,随着转运时间的延长转运速率略有减小.结论 仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷具有良好的肠吸收特性,在Cilco-2细胞模型中的吸收为被动转运.

  • HPLC测定骨仙片中仙茅苷的含量

    作者:李向阳;屠万倩;翟乙娟;侯文峰

    目的:建立高效液相法测定骨仙片仙茅苷的含量.方法:Hypersil C18柱,流动相:甲醇-异丙醇-1%冰醋酸溶液(20:10:70),流速:1 mL·min-1,检测波长283 nm.结果:进样量在0.075~0.375μg范围内,线性关系良好(r=0.999 8),平均加样回收率为97.6%,RSD=2.17%(n=5).结论:本方法简便,结果可靠,适用于骨仙片中仙茅苷的含量测定.

  • 正交试验法优选仙茅提取工艺的研究

    作者:聂诗明;张丽萍;卢水珍;黎祥胜;校合香

    目的:以仙茅苷、仙茅多糖为定量指标,研究仙茅的提取工艺.方法:采用正交试验法进行优选,高效液相色谱法测定仙茅苷含量,分光光度法测定多糖含量.结果:提取次数对仙茅苷和仙茅多糖有显著性和非常显著性差异,溶媒用量对仙茅多糖的提取有较大影响.结论:佳提取工艺为药材8倍量水煎煮,每次90min,提取3次.

  • 正交法优选酒炙仙茅的佳炮制工艺

    作者:杜中梅;关复敏;贾天柱

    目的:优选仙茅的佳炮制工艺.方法:以仙茅苷的含量为评价指标,选择加酒量、炒制温度及炒制时间为考察因素.采用正交设计L9(34),优选仙茅的佳炮制工艺.结果:仙茅的佳炮制工艺为药材加10%的黄酒润透,锅底温度为100℃,炒制10min.结论:酒炙仙茅的佳炮制工艺合理可行.

  • 不同地区仙茅中仙茅苷含量测定及酒炙后仙茅苷含量变化

    作者:刘振丽;宋志前;孙明杰;张玲;周艳华;隋宇;李林福;王淳

    目的:对全国主产地10个批次仙茅中仙茅苷含量进行测定,并比较仙茅酒炙后仙茅苷含量的变化及急性毒性的变化.方法:HPLC法测定仙茅苷含量.采用Waters symmetry C18(3.9 mm×150mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(13:87)为流动相,流速1.2mL/min,检测波长285nm,柱温40℃.选用昆明种小鼠测定动物大耐受量.结果:10个批次仙茅中仙茅苷含量范围为0.116%-0.196%,酒炙前后仙茅苷含量无显著变化,生品与酒炙品小鼠的大耐受量分别相当于临床人用药剂量的1392倍和1638倍.结论:仙茅酒炙后仙茅苷含量变化不大,但小鼠的大耐受量增强.

  • 淫羊藿苷和仙茅苷协同抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收功能

    作者:郭元晖;薛黎明;聂燕;汪滢;赵璐;秦路平;张巧艳;俞媛

    目的 研究淫羊藿苷和仙茅苷配伍抑制破骨细胞形成、分化和骨吸收的相互作用关系.方法 用1,25-(0H)2Vitamin D3和地塞米松;或人巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色进行阳性破骨细胞鉴定;磷酸苯二钠法测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性;将破骨细胞和骨片共同培养,以计算机图像分析测定骨吸收陷窝的面积;以Hoechst 33258和罗丹明-鬼笔环肽染色,激光共聚焦显微镜观察破骨细胞肌动蛋白环(F-actin Ring)的形态;用Western-blot分析细胞骨架相关蛋白的表达.结果 淫羊藿苷和仙茅苷在1×10-6mol/L浓度下可协同抑制破骨细胞的形成、降低抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝面积,抑制破骨细胞骨架F-actin环的构建及其调控因子Rho GTPases和灶性黏附激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达.结论 淫羊藿苷和仙茅苷协同抑制破骨细胞性的骨吸收,为药对淫羊藿仙茅的配伍提供了实验依据.

  • 反相高效液相色谱法同时测定不同产地仙茅中仙茅苷和仙茅苷乙的含量

    作者:曾倩;纪晖

    目的 测定不同产地仙茅中仙茅苷和仙茅苷乙的含量,以期为仙茅药材生产和临床应用提供科学的依据.方法 根据仙茅在我国的地理分布特点,采集12个不同地区产仙茅药材,并收集了6个商品药材,应用HPLC-DAD技术测定仙茅苷和仙茅苷乙的含量.结果 不同产地的仙茅药材、采集药材和商品药材间仙茅苷和仙茅苷乙的含量存在较大差异.12个采集样品中,仙茅苷的含量范围为0.028%~0.538%,仙茅苷乙的含量范围为0.103%~0.330%;6个仙茅商品药材中,仙茅苷的范围为0.161%~0.733%,仙茅苷乙的含量为0.033%~0.123%,商品药材中仙茅苷相对含量明显高于采集样品.结论 不同地区产仙茅药材中仙茅苷和仙茅苷乙的含量不同,表明仙茅药材的品质可能与地理位置、气候、采收时间、生长年限和加工、贮藏等因素有关.

  • 仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用

    作者:王洁;汪云开;来晏;李纪明;罗裕;刘学波

    目的 探讨仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用及机制.方法 体外培养大鼠原代心肌细胞,将其分为空白对照组、DMSO溶剂对照组(0.1%)、H2O2氧化损伤组(200 μmol/L)、槲皮素干预组(槲皮素30 μmol/L+ H2O2 200 μmol/L)、低浓度仙茅苷干预组(仙茅苷0.5 μmol/L+ H2O2 200 μmol/L)、中浓度仙茅苷干预组(仙茅苷5 μmol/L+ H2O2μmol/L)、高浓度仙茅苷干预组(仙茅苷50 μmol/L+ H2O2 200 μmol/L).用H2O2氧化损伤经槲皮素及不同浓度仙茅苷预培养24 h的心肌细胞,18h后测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、心肌细胞内丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量,并测定心肌细胞的凋亡率和生长抑制率.结果 H2O2氧化损伤后LDH、MDA含量明显升高,GSH-px活性明显下降,细胞抑制率和凋亡率均增加(P<0.01);而经槲皮素、不同浓度的仙茅苷预处理组的心肌细胞,LDH、MDA含量明显下降,GSH-px活性明显升高,细胞生长抑制率和凋亡率均降低(P<0.01);且仙茅苷对心肌细胞氧化损伤的保护作用呈浓度依赖性.结论 仙茅苷预处理心肌细胞可保护H2O2所诱导的氧化损伤,其作用可能与抑制脂质过氧化、增加抗氧化酶活性、减少心肌细胞凋亡有关.

  • 维拉帕米和仙茅苷在大鼠体内药物相互作用研究

    作者:耿传荣;孙晋瑞;邓玉晓;张宾;赵思太;段崇刚

    目的:研究维拉帕米联用仙茅苷之后,维拉帕米和仙茅苷在大鼠体内可能发生的药物相互作用。方法:24只雄性SD大鼠,随机分为单药组和联用药组,单药组灌胃仙茅苷20 mg· kg-1,联用药组灌胃维拉帕米和仙茅苷,其给药剂量分别为10 mg·kg-1和20 mg·kg-1。在不同时间点取血,采用LC-MS测定仙茅苷的的血药浓度,计算并比较仙茅苷的药代动力学参数。结果:与单药组相比,联用药组仙茅苷药代动力学参数发生明显变化,其中仙茅苷大血药浓度从189.13 ng·mL-1增加到277.53 ng·mL-1,血浆曲线下面积从949.18 ng·h·mL-1增加到1728.08 ng·h·mL-1。结论:维拉帕米联合仙茅苷用药之后,维拉帕米能明显增强仙茅苷在大鼠体内的血药浓度。

  • 仙茅苷在Caco-2细胞模型中跨膜转运特征研究

    作者:刘璐;李晓华

    目的:采用Caco-2细胞Transwell模型研究仙茅苷的跨膜转运机制。方法:建立Caco-2细胞Transwell吸收模型,用聚酯碳酸酯膜培养Caco-2细胞21天,形成致密的单层细胞模型。研究浓度、时间、温度、细胞旁路转运及跨膜转运蛋白(P-糖蛋白,多药耐药蛋白,乳腺癌耐药蛋白)在仙茅苷跨膜转运中的作用。结果:仙茅苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运存在一定的浓度及时间依赖性,细胞旁路转运不参与其转运,仙茅苷的外排转运存在一定的能量依赖性,且由P-gp参与。结论:仙茅苷在Caco-2细胞模型上主要以主动转运方式作跨膜转运,且P-gp参与其跨膜转运。

  • 仙茅苷对老年痴呆大鼠的认知功能及海马区神经元凋亡的影响

    作者:傅增辉;孙洪英;刘松;贺淑慧

    目的 仙茅提取物具有较好的清除氧自由基作用,国内外尚无仙茅提取物治疗阿尔茨海默病(AD)的研究.文中旨在探讨仙茅苷对D-半乳糖联合β-粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致老年痴呆模型大鼠的认知学习记忆功能及海马区B细胞淋巴瘤/因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、雌激素受体(ER)蛋白和mRNA表达水平的影响. 方法 健康SD大鼠40只,随机分为4组:对照组(腹腔注射等量等渗盐水,连续6周,第7周双侧海马注射等量等渗盐水)、模型组(腹腔注射半乳糖,连续6周,第7周双侧海马注射4mmol/L Aβ25-35,构建痴呆模型)、低剂量组、高剂量组(第1天即分别给予24、72mg/kg仙茅苷灌胃,连续8周),每组10只.用药结束后,Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆功能,流式细胞术分析神经元凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax及ER蛋白水平,Realtime PCR检测Bcl-2、Bax及ER mRNA水平. 结果 Morris水迷宫测试结果:对照组、低、高剂量组第2、3、4、5天平均逃避潜伏期较模型组明显缩短(P<0.01);高剂量组较低剂量组明显缩短(P<0.05).空间探索测试结果:与模型组大鼠在目标象限内游泳距离占总距离的百分比[(30.14±5.10)%]比较,低剂量组、高剂量组、对照组[(41.98±4.78)%、(46.17±9.31)%、(50.13±6.81)%]明显增大(P<0.01);且高剂量组较低剂量组增大(P<0.05).与模型组大鼠细胞凋亡率[(7.11±1.78)%]比较,高、低剂量组及对照组[(5.53±1.45)%、(4.11±1.03)%、(3.08±1.33)%]明显下降(P<0.05).与对照组比较,模型组的Bcl-2、Bax蛋白表达均明显增加,细胞Bcl-2/Bax明显降低(P<0.05).与模型组比较,高、低剂量组Bcl-2和ER蛋白表达、Bcl-2/Bax明显增加,Bax蛋白表达明显减少(P<0.05).与对照组Bcl-2、ER的mRNA表达(1.00,1.00)比较,模型组的Bcl-2、Bax的mRNA表达(1.31、1.98)明显增加(P<0.05);与模型组Bcl-2、ER的mRNA表达(1.31,1.08)比较,高、低剂量药物组Bcl-2(1.95、2.01)和ER的mRNA表达(1.81、1.96)明显增加(P<0.01). 结论 仙茅苷对老年痴呆模型大鼠空间学习记忆功能具有改善作用,其机制可能与通过上调海马ER、Bcl-2的表达,抑制Bax表达,抑制神经元凋亡,保护海马神经元有关.

  • 仙茅苷对自由基的清除作用

    作者:吴琼;程小卫;雷光青;陈士明;陈家宽;周铜水

    目的 研究仙茅(Curculigo orchioides Gaertn.)主要成分仙茅苷(curculigoside)对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用.方法 分别采用比色法及电子顺磁共振技术(ESR)测定仙茅苷对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除效果.结果 仙茅苷对羟自由基和超氧阴离子自由基均有良好的清除作用,其清除率略低于茶多酚.结论 仙茅苷对自由基具有明显的清除作用,是一种有效的天然抗氧化剂.

  • 不同产地仙茅药材薄层层析鉴别及仙茅苷的含量测定

    作者:董国明;张汉明

    目的:分析不同产地仙茅药材的化学成分并测定其中仙茅苷的含量.方法:以醋酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶1∶0.1)为展开剂,2%三氯化铁-2%铁氰化钾(1∶1)为显色剂,对各地产仙茅药材化学成分比较分析;以薄层层析-紫外分光光度法测定仙茅苷含量.结果:各地产仙茅药材均含有仙茅苷,但其它化学成分不尽相同;含量为:1.52‰(四川宜宾)、0.65‰(云南大关)、0.42%(湖献溆浦)、1.39‰(广东)、0.57‰(广西)、0.24‰(贵州凯里).结论:各地产仙茅药材化学成分不尽相同;仙茅苷含量以四川宜宾产为高.

  • ASE-HPLC测定仙茅中仙茅苷的含量及其指纹图谱研究

    作者:王丽丽;韦日伟;廖强;梁美艳

    目的 获得仙茅药材的HPLC指纹图谱,同时研究快速萃取仙茅中仙茅苷及其含量测定的方法,为其质量控制提供依据.方法 采用正交试验优选ASE 350快速溶剂萃取系统的佳提取方法,采用HPLC测定仙茅苷的量,色谱柱为Thermo Syncronis C18(100 mm×3 mm,3μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.5 mL·min-1,检测波长为285 nm,柱温为40℃.指纹图谱共有模式采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)进行处理分析.结果 采用萃取温度100℃、静态萃取时间5 min、循环提取2次的快速提取方法优.在指纹图谱研究中,标定了15个共有峰,建立了对照指纹图谱,20批药材与共有模式之间相似性良好,相似度均>0.9.结论 本方法快速、准确,可用于仙茅药材的综合质量评价.

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