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超高效液相色谱串联质谱同时测定瓦布贝母中6个生物碱成分
目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定瓦布贝母中西贝母碱苷、西贝母碱、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙和湖贝甲素的方法.方法:采用Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(2.1 mm×100mm,1.8 μm),流动相0.1％甲酸溶液(含0.01 mol· L-1甲酸铵)-乙腈,梯度洗脱,柱温35℃,流速0.4 mL· min-1;采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式扫描,质谱多反应监测(MRM)模式检测;6个生物碱成分的定量定性离子对为西贝母碱苷m/z 592.4＞574.4,138.2,96.1,西贝母碱m/z 430.4 ＞412.3,138.2,96.1,贝母辛m/z 430.4 ＞412.3,109.2,67.2,贝母素甲m/z 432.4 ＞414.4,95.2,67.2,贝母素乙m/z 430.4 ＞412.3,396.3,91.1,湖贝甲素m/z 416.4＞ 98.2,81.2,67.2.结果6个成分在各自线性范围内线性关系良好(r＞0.999 1),方法精密度、重复性、稳定性良好,加样回收率在98.07％ ～ 106.62％,RSD均＜5％.结果:样品测定结果表明各批次间6个成分含量差异较大,总体上西贝母碱和西贝母碱苷含量高,贝母辛居中,贝母素乙、贝母素甲和湖贝甲素依次递减.结论:所建立的方法灵敏准确,适用于瓦布贝母中生物碱成分的含量测定,并为瓦布贝母药材的质量控制和综合评价提供方法依据.
关键词： 瓦布贝母 超高效液相色谱-串联质谱法 生物碱成分 含量测定 多反应监测 -
瓦布贝母的生物碱成分分析
目的对瓦布贝母(Fritillaria wabuensi S.Y.Tang et S.C Yueh)的野生松贝及家种松贝、家种青贝,进行薄层层析和总生物碱、西贝碱的含量分析.方法从中性、碱性提取液两方面作了薄层层析,两相滴定法测定总生物碱百分含量,双波长薄层扫描法测定所含的西贝碱含量.结果薄层层析看野生松贝及家种松贝、家种青贝的色谱相近,但因含量不同,斑点的清晰度也不相同;定量测得总生物碱百分含量(野生松贝0.103%、家种松贝0.148%、家种青贝0.120%)、西贝碱含量(野生松贝0.0103%、家种松贝0.0375%、家种青贝0.0153%).结论 3种川贝母的生物碱成分在薄层色谱上基本相近,总生物碱含量及西贝碱含量家种品高于野生品.
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HPLC-DAD法对不同生长年限瓦布贝母10种核苷和碱基含量的测定
核苷和碱基具有多种生理生化活性,定量测定瓦布贝母的含量对其质量控制也很重要.本文建立了高效液相色谱-二极管阵列检测器联用技术(HPLC-DAD)同时测定瓦布贝母鳞茎中6种核苷(鸟苷、胞嘧啶核苷、胸苷、腺苷、尿苷、肌苷)和4种碱基(胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤)成分含量的测定方法.采用Zorbax 300 (A) 300 Extend C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),检测波长为260 nm,以甲醇和水为流动相梯度洗脱,以1.0 mL/min的流速在30 min以内能够实现所选用的核苷和碱基实现完全分离.采用优化色谱条件后,所有10种待测成分具有良好的线性关系(R2≥0.9993),精密度(RSD≤3.715％),重复性(RSD≤3.748％),稳定性(RSD≤5.545％)和加样回收率(97.688％-102.923％).利用所建立的色谱方法成功地应用于不同生长年限瓦布贝母核苷和碱基的测定,并且首次分析了不同生长年限(1-7年)瓦布贝母的10种核苷和碱基的含量变化.本研究将有助于对瓦布贝母的栽培时间选择、质量控制、药理研究和临床应用.
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瓦布贝母茎叶和鳞茎中生物碱的对比
目的 对瓦布贝母地上茎叶部分和地下鳞茎部位总生物碱及代表性生物碱的量进行对比研究.方法 采用酸性染料比色法测定总生物碱的量；利用HPLC-ELSD,采用外标两点法测定贝母甲素和贝母乙素.结果 3个批次瓦布贝母地上茎叶中总生物碱量为0.55％,地下鳞茎部分总生物碱为0.40％；地上茎叶部分中贝母甲素的量为0.046 7％,地下鳞茎部分中贝母甲素的量为0.021 3％；地上茎叶部分中贝母乙素的量为0.014 0％,地下鳞茎部分中贝母乙素的量为0.006 9％.结论 瓦布贝母地上茎叶部分总生物碱量及贝母甲素和贝母乙素的量均高于地下鳞茎部分的量.
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瓦布贝母与松贝母中贝母素甲和贝母素乙的含量对比研究
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)同时测定瓦布贝母中贝母素甲和贝母素乙含量的方法,并与松贝母进行比较,为科学评价和有效控制瓦布贝母药材质量提供可靠方法.方法 色谱柱:Dia-monsil Cl8(250. 0 mm×4. 6 mm,5 μm),流动相:乙腈A-0. 05%——二乙胺水C(70∶30),流速:1 mL/min,ELSD漂移管温度:85 ℃,氮气流速:1. 5 L/min,增益值:2,柱温:30 ℃.结果 贝母素甲和贝母素乙分别在0. 452 ~2. 712 μg和0. 660~3. 96 μg 范围内线性关系良好,加样回收率(n =6)分别为99. 50% 、100. 37% ,RSD 分别为1. 14% 、1. 91% .瓦布贝母栽培品中贝母素甲和贝母素乙的含量均高于其野生品和松贝母.结论 此方法操作简便,结果准确、可靠,可用于瓦布贝母药材的质量评定,瓦布贝母栽培品中生物碱含量较高.
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HPLC-ELSD法测定西藏林芝地区野生瓦布贝母中3种生物碱的含量
目的 以贝母辛、西贝母碱、贝母素乙3种生物碱成分为指标,考察西藏林芝地区不同产地野生瓦布贝母的品质情况,为今后林芝地区川贝母人工种植种质选育奠定实验基础.方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Welch Ultimate AQ-C1s柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％(体积分数)二乙胺(体积比70∶30),流速为1.0 mL/min,检测器为蒸发光散射检测器.结果 林芝地区6批野生瓦布贝母中的贝母辛、西贝母碱和贝母素乙质量分数分别是川贝母对照药材的1.79～ 2.70倍、2.13～3.64倍和1.88～2.37倍.结论 林芝地区的野生瓦布贝母品质较好,可作为人工种植育种的种质来源.
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HPLC-ELSD测定栽培的瓦布贝母中西贝碱
目的建立测定栽培瓦布贝母西贝碱的高效液相-蒸发光散射检测方法.方法以Shim-pack ODS C18(150mm×4.6 mm,5 μm)为分析柱;以乙腈-水-二乙胺(60∶40∶0.3)为流动相,流速1 ml*min-1;以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,ELSD的气化温度为40℃,空气压力为1.7 bar.结果西贝碱在0.1086～ 0.5430 mg*ml-1之间线性关系良好,回归方程为lnC＝0.7586lnA-10.183(r=0.9999,n=5); 3、4、5年生栽培的瓦布贝母中西贝碱的含量分别为9.0%、8.1%、9.5%;平均回收率97.2%.结论所用方法快速、准确、简便,可直接测定栽培的瓦布贝母中西贝碱的含量.
关键词： 瓦布贝母 高效液相-蒸发光散射 西贝碱 含量测定 -
瓦布贝母地上茎叶提取物的纯化工艺研究
目的:优选瓦布贝母地上茎叶提取物的佳纯化工艺.方法:以解吸液中的总生物碱含量为指标,考察大孔吸附树脂对瓦布贝母地上茎叶提取物的佳吸附及洗脱条件.结果:以X-5大孔吸附树脂为佳纯化树脂,上样液浓度为5.221 mg/g、上样pH值为8.5,洗脱液为pH=3、浓度为75％的乙醇50BV冲洗大孔吸附树脂,提取物中总生物碱含量达到高为18％.结论:该方法能明显提高瓦布贝母地上茎叶部分提取叶中的总生物碱含量,实验优选的工艺能够满足瓦布贝母地上茎叶提取物的纯化要求.
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川贝母及常见伪品鉴别
贝母属植物品种较多,名称近似,现将川贝母及常见伪品鉴别如下.1 正品川贝母为百合科植物川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don、暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia 、甘肃贝母Fritillaria przewalskii Maxim 、梭砂贝母Fritillaria delavayi Franch.太白贝母 Fritillaria taipaiensis P.Y.Li或瓦布贝母 Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsiavar.wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liu,S.Wang.et S.C.Chen的干燥鳞茎[1],按性状不同分别习称"松贝"、"青贝"、"炉贝"和"栽培品".夏秋二季或积雪融化后采挖,除去须根、粗皮及泥沙,晒干或低温干燥.
