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黄芪多糖对结肠癌SW620细胞增殖及凋亡作用的影响
目的:研究黄芪多糖对结肠癌细胞SW620增殖的影响,探讨其抗肿瘤机制.方法:体外培养的SW620细胞,分别给予黄芪多糖(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g·L-1),培养48 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄芪多糖对人结肠癌细胞SW620增殖的影响;用1.0 g·L-1黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,碘化丙啶(PI)单染检测药物处理后的肿瘤细胞周期,Annexin V/PI双染检测药物处理后的肿瘤细胞凋亡率;分别加入0.25,0.5,1.0 g·L-1黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-9和细胞色素C的表达.结果:黄芪多糖能够抑制人结肠癌细胞SW620的增殖(P ＜0.05,P＜0.01),且呈浓度依赖效应;与空白组比较,黄芪多糖1.0 g·L-1处理组G2/M期比例增加,早期凋亡率增加,并且晚期凋亡率和总凋亡率均增加(P＜0.05,P＜0.01);与空白组比较,黄芪多糖0.25,0.5,1.0 g·L-1组Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C和促凋亡基因Bax表达量增加,Caspase-9前体和抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:黄芪多糖对结肠癌细胞SW620具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用,其诱导凋亡机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的.
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健脾消癌方对结肠癌TGF-β/lncRNA-ATB/miR-200a信号通路的影响
目的:观察健脾消癌方对结肠癌SW620细胞中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/长链非编码RNA-ATB(long noncoding RNA ATB,lncRNA-ATB)/微小RNA 200a(microRNA 200a,miR-200a)信号通路的影响,探讨健脾消癌方抑制结直肠癌转移的可能作用机制.方法:10％,15％,20％健脾消癌方含药血清处理TGF-β诱导后SW620细胞,实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测lncRNA-ATB,miR-200a,E盒结合锌指蛋白(Zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEBl) mRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ZEB1蛋白表达水平.结果:与空白组比较,TGF-β诱导组lncRNA-ATB,ZEBl mRNA相对表达量升高,miR-200a mRNA相对表达量下降(P＜0.01);与TGF-β诱导组比较,健脾消癌方低剂量组lncRNA-ATB,ZEB1 mRNA相对表达量降低,miR-200a相对表达量升高(P＜0.05);与TGF-β 诱导组比较,健脾消癌方中、高剂量组IncRNA-ATB,ZEB1 mRNA相对表达量显著降低,miR-200a相对表达量升高(P＜0.01).与空白组比较,TGF-β诱导组的ZEB1蛋白相对表达量升高(P＜0.05);与TGF-β诱导组比较,健脾消癌方低剂量组ZEB1蛋白相对表达量稍降低,差异无统计学意义,健脾消癌方中、高剂量组ZEB1蛋白相对表达量显著降低(P＜0.01).结论:健脾消癌方可能通过抑制SW620细胞TGF-β诱导的lncRNA-ATB的表达,增加miR-200a的表达,降低ZEB1表达来抑制结肠癌的转移.
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硫酸寡糖复合物对人结肠癌SW620细胞迁移与侵袭能力的影响
目的 探讨硫酸寡糖复合物(PI-88)对结肠癌SW620细胞迁移与侵袭的影响及机制.方法 培养人结肠癌SW620细胞,分为对照组、溶媒组和药物组;对照组细胞不做任何处理,药物组细胞给予5μL的0.5 mol/L的PI-88,溶媒组给予细胞5μL的磷酸盐缓冲液(PBS).各组细胞处理后继续培养24 h,采用划痕实验检测结肠癌SW620细胞迁移距离;Transwell小室检测结肠癌SW620细胞迁移数量与侵袭数量;Western blot检测结肠癌SW620细胞中乙酰肝素酶(HPA)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的表达.结果 划痕实验结果显示,药物组SW620细胞迁移距离(35.49±6.89)μm小于对照组(216.75±21.43)μm、溶媒组(227.52±17.72)μm,差异均有统计学意义(P值均<0.05).Transwell小室细胞迁移、侵袭实验结果显示,药物组SW620细胞迁移数目(226±37)个和侵袭数目(89±11)个均少于对照组(875±93、321±28)个和溶媒组(843±116、331±43)个,差异均有统计学意义(P值均<0.05).Western blot实验结果显示,药物组PHA、VEGF、bFGF蛋白相对表达量均明显低于对照组和溶媒组,差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 PI-88具有抑制结肠癌SW620细胞迁移与侵袭的作用,其作用机制可能与PI-88抑制结肠癌SW620细胞HPA、VEGF、bFGF蛋白的表达有关.
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RNA干扰沉默Sp1基因抑制大肠癌SW620细胞的恶性增生
目的 采用RNA干扰技术沉默大肠癌SW620细胞转录因子特化蛋白1(Sp1)的表达,观察其对细胞增生的影响.方法 构建靶向人Sp1基因的干扰载体(pGenesil-1-Sp1),脂质体介导转染SW620细胞,荧光倒置显微镜下观察转染效率,应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测其对Sp1mRNA及蛋白质水平的影响,MTT法检测SW620细胞增生活性的改变.结果 成功构建针对Sp1的干扰载体,转染后能够有效抑制大肠癌SW620细胞中Sp1 mRNA和蛋白的表达,且在转染48 h抑制作用强.其对Sp1 mRNA和蛋白质抑制率分别为68.47%和73.82%.与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).MTT实验显示,下调Sp1表达可显著抑制大肠癌SW620细胞的体外增生能力.结论 Sp1基因沉默能够抑制人大肠癌SW620细胞的增生,为以Sp1为靶点的大肠癌基因治疗提供新的思路和手段.
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AP-2α对大肠癌SW620细胞增生的影响及其作用机制
目的 研究转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制.方法 构建pcDNA3.1(+)-AP-2α重组质粒,采用脂质体介导质粒转染入SW620细胞,利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响;荧光定量PCR方法和Western印迹法检测转染前后各组细胞中雌激素受体-β(ER-B)表达水平的变化.结果 转染AP-2α后SW620细胞内AP-2α mRNA含量及蛋白表达水平显著升高.MTT结果提示,转染AP-2α基因后SW620细胞增生速度受到抑制.转染AP-2α基因后ER-β mRNA和蛋白表达增加,且在转染48 h增加为明显,ER-βmRNA和蛋白质分别增加了94.47%和54.67%,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AP-2α可抑制SW620细胞的增生,其抑制机制很可能与增强ER-β的表达有关.
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五味子乙素通过VEGF/PI3K/Akt信号通路抑制人结肠癌细胞SW620的增殖和迁移
目的 研究分析结肠癌患者血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路的改变,以及五味子乙素对SW620细胞的影响,并分析其可能的作用机制.方法 蛋白印迹实验检测结肠癌患者正常肠道组织和癌变肠道组织中VEGFA、VEGF-R2、磷脂酰肌醇-3羟基激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、Akt、p-Akt蛋白的表达,CCK-8法检测五味子乙素对SW620细胞增殖的影响,Transwell检测五味子乙素对SW620细胞迁移的影响;实时荧光定量PCR法检测SW620细胞内VEGFA、VEGF-R2、PI3K、Akt基因表达水平;免疫印迹法检测SW620细胞内VEGFA、VEGF-R2、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平.结果 与正常肠道组织相比,结肠癌患者癌变肠道组织内VEGF-R2、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);与对照组比较,五味子乙素可以显著抑制SW620细胞的增殖和迁移(P＜0.01),同时可以显著降低SW620细胞内VEGFA、VEGF-R2、PI3K、Akt基因表达水平和蛋白表达水平(P＜0.01).结论 结肠癌患者肠道内VEGF/PI3 K/Akt信号通路被激活,五味予乙素可以抑制SW620细胞的活性和迁移,同时抑制VEGF/PI3K/Akt信号通路.
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氧化苦参碱对人结肠癌SW620细胞p16/cyclinD1/CDK4通路的影响
目的 观察氧化苦参碱诱导人结肠腺癌细胞株SW620凋亡的作用并探讨其可能机制.方法 采用MTT法检测氧化苦参碱对SW620细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测氧化苦参碱对SW620细胞凋亡的影响;流式细胞仪检测氧化苦参碱对SW620细胞周期的影响;实时定量PCR法检测细胞内p16、cyclinD1及CDK4基因表达水平;免疫印迹法检测细胞内p16、CyclinD1及CDK4蛋白表达水平.结果 氧化苦参碱抑制SW620细胞增殖作用呈剂量依赖性,其作用24 h的IC50为4.02 μmol/L;与对照组相比,苦参碱处理后的SW620细胞G1期比例明显增高,G2期细胞比例下降(P＜0.05);氧化苦参碱作用后SW620细胞p16基因和蛋白水平升高(P＜0.05),cyclinD1及CDK4基因和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论 氧化苦参碱在体外能抑制SW620细胞的增殖,诱导细胞在G1期阻滞,其诱导作用与其调控p16、cyclinD1及CDK4基因和蛋白表达有关.
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姜黄素联合伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用
目的：研究姜黄素增强伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用，并探讨其作用机制。方法 MTT法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响；流式细胞仪检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞凋亡的影响，比较细胞凋亡率；采用蛋白质印记法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞内拓扑异构酶I蛋白表达水平的影响。结果伊立替康和姜黄素单用均对SW620细胞增殖具有抑制作用，呈浓度和时间相关性。5、50μg/mL伊立替康分别与0～30μg/mL姜黄素联合处理SW620细胞12、24、48 h均具有协同抑制细胞活性的作用，且呈浓度和时间相关性。高质量浓度比低质量浓度的伊立替康与姜黄素联合用药抑制效果显著（P＜0.01）。0、20μg/mL姜黄素分别与0、5、50μg/mL伊立替康联合处理SW620细胞12、24、48 h，姜黄素可以增强伊立替康诱导的SW620细胞凋亡率。20μg/mL姜黄素联合5、50μg/mL伊立替康显著上调了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达，协同诱导了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达。结论伊立替康联合姜黄素可以协同增强对SW620细胞活性的抑制作用，协同诱导SW620细胞凋亡，其作用机制可能与伊立替康、姜黄素上调拓扑异构酶-Ⅰ表达有关。
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hCaMKⅡNα对结肠肿瘤分泌免疫抑制因子的抑制作用
目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制蛋白α(human calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ inhibitory alpha,hCaMKⅡNα)对结肠肿瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响及其作用机制.方法:将hCaMKⅡNα基因表达载体(pKⅡNα)或siRNA(si-KⅡNα)转染至结肠肿瘤细胞(LoVo细胞、SW620细胞和HT29细胞),形成过表达或干扰表达细胞.RT-PCR检测结肠癌LoVo细胞过表达hCaMKⅡα后白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)mRNA表达水平,ELISA法检测转染pKⅡNα或si-KⅡNα对SW620和LoVo细胞中VEGF、PGE2、IL-8和IL-10分泌的影响.为观测细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在hCaMKⅡNα介导的细胞因子调控中的作用,利用U0126抑制HT-29细胞中ERK1/2活性后,检测hCaMKⅡNα表达下调对VEGF和IL-8分泌的影响.结果:hCaMKⅡ可显著抑制结肠癌LoVo细胞中VEGF、IL-8和IL-10mRNA水平的表达;可抑制SW620和LoVo细胞中IL-8和VEGF蛋白的分泌,但对PGE2和IL-10的分泌没有影响.相应地,利用RNA干扰技术下调hCaMKⅡNα表达可显著上调HT29细胞中IL-8和VEGF的分泌;并且发现MEK1/2活性的抑制可完全阻断hCaMKⅡNα对IL-8的影响,但只能部分阻断对VEGF的影响.结论:hCaMKⅡNα通过抑制ERK活性下调结肠肿瘤细胞VEGF和IL-8的分泌,在结肠肿瘤免疫逃逸中起到负相调控作用.
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AP-2α对大肠癌细胞侵袭生长及ER-β表达的影响
AP-2α蛋白与朋ER-β基因启动子区域发生特异性结合.结论:AP-2α转染SW620细胞可显著抑制大肠癌SW620细胞体外黏附、侵袭与迁移能力,其分子机制很可能与AP-2α直接作用于ER-β基因启动子区域从而影响ER-β基因的表达有关.
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磷脂酶Cε1的过表达可抑制结肠癌SW620细胞的迁移并诱导其凋亡
目的:探讨磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)基因过表达对结肠癌细胞迁移、细胞周期及凋亡等生物学特性的影响.方法:采用脂质体转染的方法建立PLCE1过表达的SW620细胞株,实验分为3组:亲本细胞组(未转染基因),对照组[转染含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的空质粒],实验组(转染质粒pcDNA-DEST53-PLCE1).分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测PLCE1 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达;Transwell小室法检测PLCE1过表达对SW620细胞迁移能力的影响,FCM法检测对细胞周期及凋亡率的影响,DNA Ladder法检测对细胞凋亡的影响.结果:PLCE1过表达可抑制结肠癌SW620细胞的迁移能力,实验组迁移细胞数为(8.80±1.72)个,而亲本组和对照组分别为(32.6±2.42)和(32.2±3.25)个,3组间差异有统计学意义(P＜0.01).PLCE1过表达可导致结肠癌细胞周期G1期延长,并出现凋亡.结论:PLCE1过表达可抑制结肠癌细胞的迁移能力,并引起细胞凋亡.PLCE1基因过表达使SW620结肠癌细胞恶性程度降低,该基因可能是新的结肠癌相关抑癌基因.
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小白菊内酯及顺铂对人结肠癌细胞SW620凋亡和增殖的作用
[目的]探讨小白菊内酯及顺铂对人结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响.[方法]不同浓度的小白菊内酯和顺铂分别处理SW620细胞,MTr法检测细胞增殖的变化情况,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况.[结果]小白菊内酯和顺铂对SW620细胞增殖均具有抑制作用;分别作用48h后,小白菊内酯和顺铂对SW620细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性；5 μmol/L顺铂联合10μmol/L小白菊内酯作用SW620细胞时,对细胞增殖具有协同抑制作用.小白菊内酯和顺铂可以诱导SW620细胞凋亡.[结论]小白菊内酯和顺铂联用具有协同作用,能抑制SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡.
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二萜类化合物excisanin A诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及机制研究
目的本文研究大萼香茶菜有效单体excisanin A诱导人结肠癌SW620细胞株凋亡及其分子机制.方法 MTT法检测细胞增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,Western blot法检测excisanin A对PARP、caspase-3、caspase-9剪切片断的影响,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38、c-Jun表达的影响.结果 Excisanin A对结肠癌SW620细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性,其IC50 值为8.22 μmol·L-1.用8.71 μmol·L-1 excisanin A处理SW620细胞12、24、36 h,AnnexinV/PI双染检测细胞的早期凋亡,其凋亡率分别为 17.2%、20.5%、13.8%,而对照组细胞的凋亡率仅为1.9%(P<0.05).不同浓度的excisanin A作用于SW620细胞48 h后,Western blot法检测发现PARP、caspase-3,caspase-9 3种蛋白均出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显.进一步研究发现,excisanin A处理SW620细胞后,JNK、p38的磷酸化水平明显升高,c-Jun的表达亦增高.结论 Excisanin A具有明显的细胞毒作用,能诱导SW620细胞凋亡,JNK和p38途径的激活可能是其诱导凋亡的分子机制之一.
关键词： excisanin A SW620细胞 细胞凋亡 信号转导 -
miR-124对人结肠癌SW620细胞生长与侵袭的影响
目的 观察miR-124对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用MTT实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-124对人结肠癌SW620细胞的生长、侵袭转移能力的影响.结果 MTT检测发现,过表达miR-124可抑制人结肠癌SW620细胞的生长,且具有时间依赖性；细胞划痕实验显示,转染miR-124成熟体12、24h后伤口愈合率分别为26.5％±0.7％、37.7％±1.5％,其阴性对照分别为40.6％±2.5％、78.2％±1.6％,P＜0.05;Iranswell侵袭实验显示,转染miR-124成熟体24 h后穿过基底膜的人结肠癌SW620细胞数为(37±2.6)个,其阴性对照为(80±3.6)个,P＜0.05.结论 miR-124可抑制人结肠癌细胞生长与侵袭.
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萝卜硫素对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡及迁移的影响
目的:观察萝卜硫素(SFN)对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用CCK-8法检测0、5、10、15、20 μmol/L SFN处理48、72 h对SW620细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测0、5、10、15、20 μmol/L SFN处理24、48 h对SW620细胞凋亡的影响,采用细胞划痕实验观察20 μmol/L SFN处理24 h对SW620细胞迁移的影响,并采用Western blot法检测细胞中STAT3、NF-κB、p-STAT3、p-NF-κB及MMP-2、MMP-9蛋白的表达.结果:随着SFN浓度的升高,SW620细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05).同时20 μmol/L SFN可明显减弱SW620细胞的迁移能力,降低p-STAT3、p-NF-κB与MMP-2及MMP-9蛋白的表达(P<0.05).结论:SFN抑制SW620细胞增殖、促进其凋亡的机制可能与降低p-STAT3、p-NF-κB的表达有关,抑制侵袭及转移的机制可能与其降低MMP-2及MMP-9蛋白的表达有关.
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高转移结肠癌细胞微环境对人树突状细胞功能的影响
目的:探讨高转移结肠癌细胞SW620分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对人单个核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响,为DC疫苗在结肠癌患者中的临床应用提供依据.方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4的RPMI 1640培养液诱导培养,第2天对照组同前培养,实验组在此基础上加入SW620条件培养基,均隔天半量换液,第4天加入超声破碎法制备的SW620抗原,第6天加入脂多糖.第8天收集对照组正常成熟DC和实验组肿瘤相关DC(TADC).显微镜观察其形态,流式细胞仪检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a mRNA的表达,混合淋巴细胞反应及体外杀伤活性实验检测其刺激T细胞增殖及杀伤能力.结果:TADC与正常成熟DC相比,细胞形态明显受到抑制.流式细胞仪检测PBMC、正常DC及TADC CD86及CD1a分子阳性率,差异均有统计学意义(F分别为46.95及19.09,P<0.001).与正常DC比较,TADC CD86分子阳性率由(68.56±8.04)%降为(42.41±10.87)%,CD1a分子阳性率由(55.71±12.12)%降为(26.60±12.03)%(P均<0.05);CD1a基因表达降低,体外刺激T细胞增殖[(112.53±7.16)%懈.(91.26±6.62)%]及杀伤能力[(62.42±0.57)%vs.(50.37±2.21)%]均下降(t分别为6.17、17.41.P均<0.001).结论:SW620条件培养基所营造的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.
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稳定表达DNA结合蛋白A慢病毒载体的构建及其对大肠癌细胞增殖的影响
目的 观察慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)沉默DNA结合蛋白A(dbpA)基因对大肠癌细胞株SW620增殖的影响,探讨该基因的作用.方法 实验分为3组:慢病毒干扰组(shRNA-dbpA组)、非特异性序列组(CON组)和空白对照组(NC组).制备dbpA-短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克隆,测序鉴定.转染SW620细胞48h后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对细胞中dbpA mRNA表达水平进行分析,Western blot检测SW620细胞的dbpA蛋白表达水平;同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,并检测细胞克隆形成能力.结果 PCR和测序证实,成功构建shRNA-dbpA病毒表达载体,shRNA-dbpA显著下调了SW620细胞中dbpA的表达,所构建的重组慢病毒有较高的基因沉默效率,Western blot检测结果表明shRNA-dbpA组的dbpA表达水平下调.流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(26.60±0.38)％、(1 2.54±0.25)％和(4.46±0.19)％,shRNA-dbpA组显著高于其他两组(P＜0.01),且G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞增多(P＜0.05);MTT法检测结果显示各组的增殖第5天吸光度值分别为1.183±0.226、5.295±0.282和10.207±0.383,shRNA-dbpA组显著低于其他两组(P＜0.01);细胞克隆数分别为(37±3)、(64±5)和(175±10)个,shRNA-dbpA组显著低于于其他两组(P＜0.01).结论 以dbpA为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株SW620中的dbpA表达,显著增加细胞的凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,降低了细胞的增殖克隆能力.
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以KRAS启动子G-四链体DNA为靶点的血根碱对人结肠癌细胞SW620作用及其机制
目的 研究血根碱与KRAS启动子G-四链体DNA的相互作用,探究以KRAS G-四链体DNA为靶点的血根碱对人结肠癌细胞SW620的作用及机制.方法 采用MTT法检测血根碱对人结肠癌细胞SW620增殖的影响.采用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、圆二色谱等方法研究血根碱与K R A S启动子G-四链体DNA的相互作用.采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测血根碱对SW620细胞KRAS mRNA表达的影响.结果 血根碱能够抑制人结肠癌SW620细胞的增殖.血根碱与K R A S启动子G-四链体DNA的结合能力较强,结合计量比接近1:1,结合分子机制为生成了不发光的复合物.血根碱可维持G-四链体DNA的平行构型及热稳定性.血根碱能抑制人结肠癌SW620细胞KRAS mRNA的表达.结论 血根碱可能通过与KRAS启动子区域G-四链体结合并维持其结构的稳定,抑制KRAS mRNA表达,进而抑制人结肠癌细胞SW620的增殖,发挥抗癌作用.
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腺相关病毒携带hTERT启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤肿瘤细胞
背景与目的:腺相关病毒(adeno-associated virus)作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗研究.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosis.inducing ligand,TRAIL)基因可迅速诱导多种肿瘤细胞的凋亡.是一个安全有效的肿瘤杀伤基因.本研究旨在构建能在肿瘤细胞内特异性表达TRAIL基因的靶向腺相关病毒,并探讨其体外抗肿瘤效应的可能机制.方法:利用肿瘤特异性启动子端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcfiptase,hTERT)构建特异性杀伤肿瘤细胞的腺相关病毒载体pAAV-hTERT-TRAIL.通过与pAAV-Rc、pHelper共转染HEK293细胞包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL.将该病毒体外转染人结肠癌SW620细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞和正常细胞NHLF、MRC5后,检测TRAIL基因的肿瘤特异性表达.MTT法检测其对细胞增殖的影响,ELISA、Western blot法以及流式细胞仪检测细胞的凋亡,并分析其体外抗肿瘤效应的可能机制.结果:成功包装出病毒AAVhTERT-TRAIL.RT-PCR、Western blot和免疫组化法均证实AAV-hTERT-TRAIL能介导TRAIL基因在肿瘤细胞内特异性表达,但在正常细胞内不表达.以100 MOI AAV-IlTERTTRAIL感染细胞96 h后,SW620、A549和HepG2细胞的增殖率分别是41.55%、44.29%、49.95%,NHLF和MRC5细胞的增殖率分别是84.59%和87.22%.Western blot检测发现AAV-hTERT-TRAIL可激活Caspase通路.流式细胞仪和ELISA方法检测证实AAV-hTERT-TRAIL可诱导细胞凋亡.结论:hTERT的存在增强了腺相关病毒所携带TRAIL基因表达的肿瘤靶向性和对正常细胞的安全性.由它调控的杀伤基因可介导肿瘤细胞特异性的细胞毒效应.
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精脒对SW620细胞增殖及糖酵解的影响
目的 探讨精脒对人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的影响.方法 以SW620细胞为研究对象,用0.625～2.5 μmoL/L精脒(SPD)作用于细胞,细胞密度以104个/mL接种于96孔培养板,分别培养24 h后,MTT法检测细胞增殖情况;同时,取6孔板培养24 h的细胞上清液,用试剂盒检测SW620细胞葡萄糖消耗及乳酸水平;细胞密度以1.2× 105个/mL接种于6孔培养板中,培养24 h后加入不同浓度SPD,继续培养24 h后,Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1)、乳酸脱氢酶(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化.结果 与对照组比较,精脒各浓度组均能促进SW620细胞的增殖(P＜0.01),且促进作用呈剂量依赖性;精脒各浓度组作用后SW620细胞内葡萄糖的消耗及乳酸含量明显增多(P＜0.01),呈剂量依赖性;与对照组比较,LDHA、HIF-1及GLUT1蛋白表达水平随着精脒浓度的升高而增加(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论 精脒具有促进人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的作用.
