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牛膝总皂苷对维甲酸致骨质疏松大鼠骨代谢的影响
目的:研究牛膝总皂苷对维甲酸致骨质疏松大鼠骨代谢指标的影响.方法:用维甲酸复制大鼠骨质疏松症模型,给于牛膝总皂苷30,100,300 mg·kg-1连续灌服,测定大鼠血清钙、磷含量,碱性磷酸酶活性、骨钙素含量以及尿液中羟脯氨酸含量,与模型组进行比较.结果:牛膝总皂苷可升高骨质疏松大鼠血钙含量,升高碱性磷酸酶活性和血清骨钙素水平,降低尿中羟脯氨酸水平.结论:牛膝总皂苷可改善骨质疏松大鼠的骨代谢.
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UHPLC-MS/MS联用微透析法研究牛膝引栀子苷关节靶向在佐剂性关节炎大鼠体内药动学的影响
建立了UHPLC-MS/MS测定栀子苷(GE)和3种牛膝皂苷成分(姜状三七皂苷R1、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa)在大鼠关节、血液透析液中药物浓度的分析方法,并应用该法研究牛膝总皂苷-栀子苷(ABS-GE)配伍前后在佐剂性关节炎(AA)大鼠体内的药动学过程,以探讨ABS“引药下行”作用的活性部位.AA大鼠模型单用或联用ABS,GE后,微透析探针植入大鼠关节腔及颈静脉血管中收集样品,采用Waters Acquity HSS C18色谱柱分离,以乙腈-0.1％甲酸水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测上述4种成分.结果显示,大鼠关节及血液透析液中GE、姜状三七皂苷R1、人参皂苷Ro及竹节参皂苷Ⅳa,分别在2～4 000,16～4 096,14～3 584,23～5 888μg·L-1线性良好;上述4种成分精密度、准确度、稳定性及基质效应结果均符合生物样品定量分析要求.ABS与GE联用(60 mg· kg-1+60 mg·kg-1)后,使GE的AUCjoint/AUCplasm达到GE单用(60 mg·kg-1)的2倍,表明ABS可以提高GE向关节腔靶向分布的程度.同时3种牛膝皂苷成分在关节腔的药动学变化趋势与配伍后GE的变化趋势无显著差别.此外,ABS与GE联用后对AA大鼠足爪肿胀、关节炎指数及关节滑膜病理组织的改善作用均强于GE单用.表明ABS对GE具有靶向引导作用,增加GE在关节腔浓度,并在药效上协同增强.
关键词： 牛膝总皂苷 栀子苷 UHPLC-MS/MS 微透析 药动学 -
正交试验法优选牛膝的提取工艺
目的 优选牛膝的佳提取工艺. 方法 以牛膝总皂苷含量为评价指标,采用正交试验法筛选牛膝的佳工艺条件. 结果 牛膝的佳提取工艺条件为药材10倍量80%的乙醇,提取3次,每次1 h. 结论优化的提取工艺科学、合理,可以作为牛膝的佳提取工艺方法.
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牛膝总皂苷的制备及其保护尿酸钠致血管内皮细胞损伤的作用
目的:评价牛膝总皂苷抗急性痛风活性,为进一步深入研究牛膝皂苷的药效作用奠定基础;方法:建立香兰素-冰醋酸-高氯酸比色法测定牛膝总皂苷的含量;采用溶剂法制备总皂苷提取物;用尿酸钠(MSU)体外直接刺激血管内皮细胞(HUVEV)损伤的急性痛风模型,MTT法评价牛膝皂苷保护HUVEC活力的作用.结果:牛膝皂苷含量测定方法简单、灵敏准确,牛膝中总皂苷的含量为1.74%,总皂苷提取物纯度为70.9%,转移率为70.7%,对MSU致HUVEC的损伤具有显著的保护作用.结论:溶剂法制备牛膝皂苷工艺简便,纯度高;牛膝总皂苷具有抗急性痛风作用.
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牛膝总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用及机制研究
目的:研究牛膝总皂苷(total saponin Achyranthes,TSA)对大鼠急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)的防治作用及其机制.方法:雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,TSA高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg-1·d-1)以及吲哚美辛组(5 mg·kg-1·d-1),灌胃给药,每天2次,连续5d,第3天除正常组外,大鼠踝关节腔内注射尿酸钠溶液,测定大鼠关节肿胀度,48 h后处死大鼠,检测大鼠肿胀关节浸出液IL-1 β、IL-18、IL-6水平,以及踝关节病理组织学,免疫组化法检测大鼠踝关节IL-1β的表达,Western blot法检测滑膜组织中NALP3(NACHT,LRR and PYD domains-containing protein 3)炎性体相关蛋白变化.结果:模型组大鼠关节显著肿胀,活动减少,关节浸出液IL-1β、IL-6和IL-18水平显著增高,关节滑膜组织增生,炎性细胞浸润明显,IL-1β蛋白表达增加,滑膜组织NALP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1前体和活性形式蛋白表达增高.TSA高、中剂量及吲哚美辛组大鼠上述指标均不同程度改善.结论:TSA对AGA有防治作用,其机制可能是抑制NALP3炎性体装配和激活以及抑制炎性细胞因子的表达.
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萆薢总皂苷合用牛膝总皂苷降血尿酸和抗炎作用的组方合理性研究
目的 探讨牛膝总皂苷和萆薢总皂苷降低小鼠血尿酸和抗炎作用的组方合理性及剂量配比.方法 采用尿酸或酵母膏致小鼠高尿酸血症模型以及二甲苯致小鼠耳肿胀模型,按照Codrug软件,得优化组方.结果 萆薢总皂苷组、牛膝总皂苷+萆薢总皂苷组和阳性对照组小鼠血清尿酸水平明显降低(P＜0.01),牛膝总皂苷480、240、120 mg·kg-1组小鼠血清尿酸水平与模型组比较差异无显著性.牛膝总皂苷、萆薢总皂苷对小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用,两者合用抑制率强于单药组,两药配伍理论优化剂量为牛膝总皂苷为120 mg·kg-1,萆薢总皂苷为240 mg·kg-1.结论 萆薢总皂苷能降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平,而牛膝总皂苷对小鼠血清尿酸水平无明显影响.两者均有较强的抗炎作用,合用抗炎作用增强,优化组方为牛膝总皂苷:萆薢总皂苷=1:2.
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不同提取方法对土牛膝总皂苷含量测定的影响
目的 建立土牛膝中总皂苷的含量测定方法,并考察不同提取方法对土牛膝中总皂苷含量测定的影响.方法 采用比色法测定总皂苷的含量,分别考察甲醇回流提取、乙醇回流提取等5种提取方法制得的样品溶液所测定的总皂苷的含量.结果 甲醇回流提取、乙醇回流提取、水超声提取、乙醇超声提取及索氏回流提取制备的样品溶液中总皂苷的含量分别为3.36%,4.75%,2.63%,4.97%,2.14%.结论 比色法可用于土牛膝总皂苷含量测定,样品溶液的制备宜采用乙醇超声提取法.
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牛膝总皂苷抗炎、镇痛和活血作用研究
目的观察牛膝总皂苷的抗炎镇痛及活血化瘀作用.方法制作小鼠二甲苯耳肿胀、大鼠蛋清足肿胀、大鼠琼脂肉芽肿等炎症模型,研究牛膝总皂苷三种剂量30、100、300 mg@kg-1的抗炎作用,运用热板法观察牛膝总皂苷的镇痛作用,另外还观察了牛膝总皂苷对"血瘀"大鼠血液流变学特性的影响.结果不同剂量下的牛膝总皂苷能减轻大鼠和小鼠急性炎症反应,降低大鼠琼脂肉芽肿重量,延长热板上小鼠舔足时间,改善大鼠血液流变性.结论牛膝总皂苷具抗炎镇痛及活血作用.
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牛膝总皂苷对实验兔膝骨关节炎滑膜组织的影响
目的:观察牛膝总皂苷(TSA)对兔膝骨关节炎(OA)模型滑膜组织的影响.方法:将40只实验兔分为正常组8只、OA模型组32只,OA造模成功后将OA模型组分为OA模型阳性对照组、OA模型空白组、OA模型TSA低剂量组、OA模型TSA中剂量组、OA模型TSA高剂量组,各6只,分别予硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水、TSA低剂量、TSA中剂量、TSA高剂量灌胃2个月后进行关节粘连改善度测定、滑膜组织病理HE染色、滑膜炎KRENN评分、β-catenin蛋白免疫组化检测,及关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3含量检测.结果:实验兔OA模型造模成功后灌胃2个月,与OA模型空白组关节粘改善度比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA低、中、高剂量组差异有统计学意义(P＜0.05),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高卉1量组比较差异有统计学意义(P＜0.01);滑膜HE染色和滑膜炎评分比较,OA模型空白组见大量滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列紊乱,滑膜组织周边可见较多毛细血管增生,呈重度滑膜炎表现,OA模型阳性对照组见中度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列不规则,滑膜组织周边可见少量毛细血管增生,呈中度滑膜炎表现,OA模型TSA高剂量组见轻度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列尚规则,滑膜组织周边可见微量毛细血管增生,呈轻度滑膜炎表现;β-catenin蛋白免疫组化比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA高剂量组与OA模型空白组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P＜0.05);各组与正常组比较TNF-1,IL-1β,MMP-3指标差异有统计学意义(P＜0.05),OA模型TSA高剂量组与OA模型阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者与OA模型空白组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:牛膝总皂苷能有效抑制OA滑膜炎症,改善关节粘连度,降低滑膜组织β3-catenin蛋白表达以及减少关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3因子含量,其作用机理有待进一步探索.
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牛膝总皂苷对过氧化氢致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究
目的:观察牛膝总皂苷对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法:体外培养HUVEC,分为空白对照组、模型对照组及牛膝总皂苷低、中、高浓度组,MTT法检测细胞活力,微板法检测上清液中一氧化氮(NO)的含量,采用ELISA法检测内皮素-1(ET-1)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量.结果:与模型对照组比较,牛膝总皂苷中、高浓度组细胞活力显著升高,ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:牛膝总皂苷对H2O2诱导的HUVEC损伤具有显著的保护作用.
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牛膝总皂苷对兔膝骨关节炎软骨组织形态变化及关节液中IL-1β、TGF-β1含量的影响
目的 观察牛膝总皂苷(TSA)对兔膝骨关节炎(KOA)软骨组织形态变化及关节液中细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)和转化生长因子β1(TGF-β1)含量的影响.方法 将36只新西兰兔,随机分为空白对照组,模型组,阳性对照组(硫酸氨基葡萄糖,60 mg· kg-1),牛膝总皂苷高、中、低(200,100,50 mg·kg-1)剂量组.采用改良Hulth法复制兔膝骨关节炎模型.药物干预2个月后,采用ELISA法检测各组兔膝关节液中IL-1β、TGF-β1的水平,分别于光镜及透射电镜下观察各组兔关节软骨的组织形态学变化.结果 与空白对照组比较,模型组兔膝关节液中IL-1β的含量明显增高(P＜0.01),TGF-β1的含量明显降低(P＜0.01);与模型组比较,各给药组IL-1β的含量明显降低(P＜0.01),TGF-β1的含量显著增高(P＜0.01).光镜下观察关节软骨组织形态变化,结果表明TSA呈剂量依赖的抑制了软骨组织的退变.各组兔KOA软骨组织结构Mankin评分结果表明,与空白对照组比较,模型组评分明显增加(P＜0.01);与模型组比较,各给药组评分明显减少(P＜ 0.05,P＜ 0.01).透射电镜下观察关节软骨细胞形态学变化,结果表明TSA具有呈剂量依赖的保护软骨细胞的作用.结论 TSA能抑制细胞因子IL-1β的表达,提高转化生长因子TGF-β1的表达,具有保护软骨组织缓解软骨退变的作用.
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大孔吸附树脂富集纯化牛膝总皂苷研究
目的:应用大孔吸附树脂富集纯化牛膝总皂苷.方法:牛膝醇提液上大孔吸附树脂柱,以水及不同浓度乙醇依次洗脱,考察牛膝总皂苷的洗脱率和纯度.结果:牛膝总皂苷富集于50%乙醇洗脱液部分,洗脱率在58.42%以上.结论:采用大孔吸附树脂方法富集、纯化牛膝总皂苷可行.
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牛膝总皂苷对大鼠离体胸主动脉环舒张作用的机制研究
目的 研究牛膝总皂苷(ABS)对大鼠离体胸主动脉血管环舒张作用及其作用机制.方法 采用累积加药法,通过观察ABS对去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的血管环张力的影响,并观察几种抑制剂对其作用的影响.结果 ABS对NE预收缩的内皮完整和去内皮血管环均有舒张作用,L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、亚甲蓝(MB)、吲哚美辛(INDO)能显著减弱ABS诱导的血管环舒张作用;钾离子通道阻滞剂对ABS的舒血管效应有明显抑制作用(P<0.05);ABS对KCl预收缩的血管环有良好的舒张作用.结论 ABS的舒血管作用与NO介导途径有关,同时与钾离子通道的开放及血管平滑肌细胞上受体依赖性钙通道和电压依赖性钙通道有关.
